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重组蛋白常见问题权威解答
Ins_bf0c01c3
2023/11/22
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生命科学仪器综合讨论
重组蛋白在生物医药领域的应用越来越广泛,然而,许多研究者在使用过程中可能会遇到各种问题。本文将对重组蛋白常见问题进行解析,包括其制备、纯化、保存以及应用等方面的问题,为您提供权威的解答和全面的指导。通过阅读本文,您将能够更好地理解和应用重组蛋白技术,提高研究工作的效率和准确性。
1.
如何生产重组蛋白?真核表达(酵母、昆虫和哺乳动物细胞)与大肠杆菌表达相比有什么优势?
我们的大多数重组蛋白都是在真核系统中生产的,分析证书中会为您提供有关单个产品如何生产的具体信息。真核生物作为表达系统有几个优势。
真核生物本身很少分泌原生蛋白,但却能分泌重组蛋白。因此,真核生物系统通常是分泌表达重组蛋白然后进行纯化。在大肠杆菌中制造的重组蛋白通常被定位在包涵体中。从包涵体中纯化重组蛋白需要在苛刻的条件下进行,然后再进行重折叠处理。这些苛刻的处理会对蛋白质的功能产生负面影响。
真核生物分泌的重组蛋白由高尔基体处理,因此可以进行翻译后修饰。这些修饰包括糖基化、磷酸化和硫酸化。有许多蛋白质需要经过修饰才能发挥功能、正常折叠或溶解。
真核生物没有像大肠杆菌那样的细菌细胞壁,因此不存在可影响目标系统炎症反应的内毒素(脂多糖)。
2.
当我打开小瓶时,什么也没看到。我怎么知道小瓶里有蛋白质?
打开小瓶之前要先离心!我们的大多数产品都是用低浓度缓冲液冻干的,因此几微克的产品可能不太明显。我们建议在打开前将小瓶放入微型离心机中离心
20-30
秒,以将可能滞留在瓶盖或试管侧面的蛋白质离心到小瓶底部。我们的质量控制程序可确保每小瓶中的产品量正确无误。
3.
如何复溶冻干粉?重组蛋白
f
复溶可接受的体积是多少?重组蛋白复溶后的浓度是多少?
请查阅您的货物中包含的分析证书,以了解复溶方法,因为并非所有产品都在相同的条件下进行复溶。一般来说,我们建议使用无菌水进行复溶。将推荐体积的无菌水加入小瓶中,轻轻摇动以完全溶解蛋白质。不要涡旋。
重组蛋白的浓度取决于复溶体积。例如,如果在
100μL
载体蛋白溶液中复溶
10μg
重组蛋白,则浓度为
10μg/100μL
或
100μg/mL
。
4.
如何储存重组蛋白?重组蛋白的保质期多长?
若要长期保存,蛋白溶液应与载体蛋白(如
0.1% BSA
或
0.1% HSA
)一起以等分的形式保存,并在
-20
°
C
下冷冻保存。请注意,每次冷冻
/
解冻循环都可能导致蛋白质发生变性。除非分析证书上另有说明,大多数重组蛋白的保质期为一年。请按照分析证书上的规定在最佳储存条件下保存。
5.
什么是载体蛋白?
载体蛋白(如
HSA
或
BSA
)用于提高重组蛋白的稳定性,避免产品粘附在瓶壁上。
6.
如何确定重组蛋白的量?为什么我的检测结果与你们的结果不同?
我们通过
BCA
、
SDS-PAGE
、
HPLC
和其他方法确定重组蛋白的量。不同的检测方法会产生不同的定量结果。如果您采用不同的检测方法,有时差异会很大。蛋白质在储存过程中也有可能形成聚集体,从而在复溶和离心后造成损失。
7.
义翘神州使用哪些标签进行蛋白质表达
/
纯化? 如果我需要去除标签怎么办?
常用标签有
His
、
Flag
、
Fc
、
GST
、
MBP
、
SUMO
、
Trx
等。我们的科研人员会根据蛋白质的特性和客户的具体要求,为不同蛋白推荐不同表达
/
纯化标签。一般,
His
是蛋白纯化的首选标签,它也可以与其他标签构建双标签表达。义翘神州提供广泛的蛋白生产和纯化服务,包括标签去除和内毒素去除等服务。
义翘神州提供从基因合成、载体构建到蛋白质表达、纯化的一站式服务,可以根据客户需求,选用不同表达
/
纯化标签、表达宿主等,真正为客户实现深度私人定制。多种纯化体系,为蛋白表达、纯化提供多种选择,帮助客户最大限度提高研究项目的成功率。如果对上述问题还有疑问,可以参看:
重组蛋白表达纯化服务
详情
https://cn.sinobiological.com/services/recombinant-protein-expression-service
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