仪器信息网APP
选仪器、听讲座、看资讯
立即体验
APP内打开
回版面
评论
收藏
点赞
拍砖
举报
取消
发布
当前位置:
仪器社区
>
生命科学仪器
>
生命科学仪器综合讨论
>
帖子详情
无细胞表达系统FAQ详解
Ins_bf0c01c3
2023/11/24
私聊
生命科学仪器综合讨论
无细胞表达系统是一种在生物制药和基因疗法领域广泛应用的生物技术。尽管它带来了许多优势,如高表达水平和翻译后修饰,但无细胞表达系统也存在一些常见问题和挑战。本文将详细解答这些问题,并提供相应的解决方案。
Q1:
无细胞合成(
CFPS
)体系相对于细胞体系有哪些优势?
A1:
无细胞表达系统的优势主要体现在:
? 可自动化操作简便、快捷——成本低(无需培养细胞和细菌相关的场地设施)、表达时间短(
3h
)、单位表达量高。
? 蛋白表达工程化(
Cell-free protein engineering
)——无细胞合成系统作为一个开放式的系统,可以向体系中自由添加所需的成分以调控蛋白的正确合成。例如可以向系统中加入
Fe2+
、
Mn2+
和
Cu2+
等金属离子促进含有对应离子蛋白的正确合成;可以有效表达抗菌肽等毒性蛋白并实现规模化目的蛋白的生产。
? 适合原型研究(
cell-free prototyping
),整体原料均为外加,活性物质之间发生的化学酶促反应使整个过程相对可控。
Q2:
真核来源的蛋白是否必须用真核表达系统?
A2:
并非如此,真核来源的蛋白除了传统的哺乳动物表达系统,还可以利用无细胞蛋白合成。无细胞系统是一套酶促级联反应,可以添加很多其他组分甚至是真核来源的提取物来实现真核蛋白的表达。如果某些目标蛋白(比如抗体功能性片段
scFv
和
VHH
)的功能不依赖翻译后修饰,在这种情况下,不管是无细胞系统还是
HEK293
系统,两者表达的活性无明显差异。
Q3:
无细胞合成系统是否适用于高通量,表达量如何?少量蛋白的检测是否也适用?
A3:
无细胞表达系统非常适合高通量表达,其产量最高可到
mg/mL
级别,抗体和抗体功能性片段是
100
μ
g/mL
级别。对于少量蛋白的检测需要建立相应的检测方法,如您想进一步了解,我们可以协助进行方法学的设计。
Q4:
对于原核体系难以表达的真核来源蛋白,无细胞表达体系有什么优势吗?
A4:
因为其开放式系统可以添加很多其他组分甚至是真核来源的提取物来实现真核蛋白的正确合成。例如我们聚焦的
VHH
、
VHH-Fc
等都可以实现无细胞系统中上清表达,但是这些蛋白在原核表达中往往以错误的形式存在。
Q5:
我在无细胞表达系统中进行表达,但蛋白总是以低表达水平出现,如何解决?
A5:
低表达可能是由于反应条件不当或蛋白的折叠不完整。您可以尝试优化反应条件,如调整温度、
pH
值和反应时间,以提高蛋白的表达水平。同时,添加适当的蛋白辅助因子或分子伴侣,有助于促进蛋白的正确折叠和表达。
Q6:
以不溶性形式表达,该怎么解决?
A6:
蛋白不溶性表达可能是由于蛋白的折叠不正确或缺乏正确的蛋白折叠因子。您可以尝试添加蛋白折叠辅助因子,如小麦胚芽提取物,有助于促进蛋白的正确折叠和溶解性。此外,优化反应条件和表达条件,如调整温度和反应时间,也可能有助于提高蛋白的溶解性。
Q7:
形成夹杂物,导致纯化困难,有什么解决办法?
A7:
夹杂物的产生可能是由于蛋白的折叠不正确或反应条件不适合。您可以尝试添加蛋白辅助因子或分子伴侣,如
chaperonin
,来帮助蛋白的正确折叠和防止夹杂物的形成。同时,优化反应条件和表达条件,如调整温度和反应时间,也可能有助于减少夹杂物的产生。
Q8:
出现部分降解,如何解决?
A8:
蛋白降解可能是由于蛋白的不稳定性或存在蛋白酶的活性。您可以尝试添加蛋白酶抑制剂,如苯甲酸,来减少蛋白的降解。同时,优化反应条件和表达条件,如调整温度和反应时间,也可能有助于提高蛋白的稳定性。
Q9:
出现异常修饰,如何解决这个问题?
A9:
蛋白异常修饰可能是由于无细胞表达系统中存在的特定修饰酶。您可以尝试选择不同的表达系统或添加特定的修饰酶抑制剂,来减少蛋白的异常修饰。同时,优化反应条件和表达条件,如调整温度和反应时间,也可能有助于减少蛋白的异常修饰。
Q10:
形成聚集体,导致纯化困难,如何解决?
A10:
蛋白聚集体的形成可能是由于蛋白的折叠不正确或反应条件不合适。您可以尝试添加蛋白折叠辅助因子或分子伴侣,如小麦胚芽提取物,有助于促进蛋白的正确折叠和防止聚集体的形成。同时,优化反应条件和表达条件,如调整温度和反应时间,也可能有助于减少聚集体的产生。
A10:
高背景信号可能是由于蛋白的非特异性结合或存在夹杂物。您可以尝试优化反应条件和表达条件,如调整温度和反应时间,来减少非特异性结合。同时,使用适当的纯化方法,如亲和层析或凝胶过滤,可以帮助减少背景信号。另外,您还可以使用合适的对照实验来验证蛋白的特异性结合,以确保蛋白表达的准确性和可靠性。
义翘神州自主研发的
无细胞表达系统
,经过充分验证,可为您提供优质的
VHH
及
scFv
快速表达服务,加速您的研发进程。有需求可以来义翘神州网咨询详情
https://cn.sinobiological.com/services/cell-free-protein-synthesis-service
相关话题
1
膜蛋白表达常见问题解答
2
个性化定制:专属于您的磷酸化抗体
3
简述生物安全检测服务背景、方法及前景
4
高通量抗体库技术的特点及筛选步骤简要分析
5
抗体亲和力成熟:方法、机制与意义
近期热榜
赛默飞实验室产品焕新计划有奖调研!
【七月征文】不一YOUNG实验“猿”
报名开启:ICS2024第十三届光谱网络会议!
推荐收藏!盘点中药材及饮片检测解决方案
热门活动
甄选国优仪器,助推设备更新
采购咨询618活动:1000元奖励等你拿
猜你喜欢
最新推荐
热门推荐
更多推荐
基因芯片在食品微生物检测中的应用
2006/08/09
【转帖】“青蛙皮肤”抗生素有望杀灭超级细菌!!!
2010/10/29
蛋白质立体结构原则(图)
分享
2013/08/02
生物实验室之设计探讨资料全
分享
2013/12/31
双特异性抗体的作用原理及制备方法详解
资料
2023/09/06
科学家研制成功“纳米耳朵”
分享
2012/01/18
预防手足口病,呵护宝宝健康
讨论
2021/06/03
104项医疗器械行业标准颁布 三大类推荐标准杜绝“洋垃圾”
转帖
2013/12/09
【我们不一YOUNG】蛋白质浓度测定方法大全
原创
2024/07/06
【我们不一YOUNG】HTS酶抑制剂筛选的流程介绍
分享
2024/07/05
太空微重力环境下癌症药物研究系统进口航空航天随机定位微重力模拟仪AJ001X
分享
2024/07/05
弱光成像或体内发光实验Atik TE科研制冷CCD相机
原创
2024/07/05
【我们不一YOUNG】结缘仪器,一起结缘,与仪器信息网一起成长
原创
2024/07/01
心血管检测仪打开后出现ch375dll.dll电脑丢失怎么办
已应助
2024/07/01
出售贝克曼DXC800生化分析系统
原创
2024/06/21
编织袋拉力机
原创
2024/06/14
检测报告一定要有判定结果吗?
求助
2024/07/01
气相FID重现性不好原因
求助
2024/07/01
求助,非甲烷总烃测定中,除烃空气0.4mg/m3,怎么计算的呢?是按总烃计算公式吗?
已应助
2024/06/29
求助安捷伦GC7890B,EPC无响应解决办法
求助
2024/07/01
HJ1332便携非甲实际应用问题
讨论
2024/07/01
衍射斑点标定求助
已应助
2024/06/30
EI源的灯丝镉厂家通用吗?
求助
2024/07/03
‘有奖问答’对错题’:某仪器零件的长度X和质量Y的相关系数为0.68,改进后长度缩短0.2厘米,质量低0.5克,新零件的长度和质量的相关系数为( )
讨论
2024/07/02
测乙醇含量用什么色谱柱好啊?
已应助
2023/11/24
药品检测质量控制,应该在哪查询资料?
已应助
2023/11/24
根据你们的经验这种Pb是有还没ND的?
原创
2023/11/24
液质响应突然大幅降低
已应助
2023/11/24
【微语】折磨你的从来不是任何人的情绪,而是你心存幻想的期待。世间万物都在治愈你,唯独你不肯放过自己。
讨论
2023/11/24
土壤苯并(a)芘
已应助
2023/11/24
MPN541382-PV电源模块替代VTM48EF030T070A00
仪器微课堂
2023/11/24
CMA一般不再接受外国区域标准进行资质认定了
原创
2023/11/24
品牌合作伙伴
岛津
日立科学仪器
珀金埃尔默仪器(上海)有限公司(PerkinElmer)
日本电子株式会社
丹纳赫
安捷伦
赛默飞世尔科技
普析通用
欧波同
天美
天瑞仪器
德国耶拿
海能技术
马尔文帕纳科
磐诺科技
上海仪电科仪
梅特勒托利多
聚光科技
莱伯泰科
盛瀚
多宁生物
丹东百特
科哲
卓立汉光
屹尧科技
华谱科仪
宝德仪器
优莱博
HORIBA
布鲁克核磁
举报帖子
执行举报
点赞用户
好友列表
加载中...
正在为您切换请稍后...