仪器信息网APP
选仪器、听讲座、看资讯
立即体验
APP内打开
回版面
评论
收藏
点赞
拍砖
举报
取消
发布
当前位置:
仪器社区
>
生命科学仪器
>
生命科学仪器综合讨论
>
帖子详情
蛋白抗体选择攻略:常见问题详解
Ins_bf0c01c3
2023/12/06
私聊
生命科学仪器综合讨论
在生物医学领域,蛋白抗体已成为研究细胞生物学、疾病机制和药物开发的重要工具。然而,在选择和使用蛋白抗体时,许多科研人员可能会遇到一些常见问题。本文将详细解析这些问题,帮助大家更好地理解和使用蛋白抗体。
WB
、
IHC
、
ChIP...
你的抗体选对了吗?
Q1.
做流式的抗体和免疫组化的抗体是一样的吗?
不一定能通用。流式是用直接标记还是间接标记?如果是直接标记的话,那这个抗体一般不是
FITC
标记或者就是
TRITC
,
PE
之类的。如果恰好你的免疫组化,也是想用荧光素标记的抗体来直接标记,那就可以通用。如果你的免疫组化要用其它的标记的话,或者是间接标记的话,就有麻烦,因为荧光素的标记很可能会影响二抗和一抗的结合。
Q2.
为什么我的抗体做
WB
非常好,而做不了
IF
,
IHC
等其他任何实验?
首先恭喜你有一个
WB
非常好的抗体,毕竟能获得做
WB
非常好的抗体也不容易。其次,你这个抗体很可能是通过人工合成多肽得到的,和上面所述,你用来做抗原的多肽恰好被包埋在蛋白质的中心,因此只能识别
WB
中线性的部分。
Q3.
如何选择免疫组化抗体?
首先,一抗是选择单克隆抗体还是多克隆抗体,单克隆抗体特异性强,灵敏度低;多克隆抗体灵敏度高,特异性弱。根据你的实验结果,如果非特异多,那么选择单克隆抗体;如果阳性信号弱,不妨选择多克隆抗体试试。一般家兔来源的都是多克隆,小鼠来源的是单克隆。其次是要弄明白该一抗能够识别什么种属的抗原,抗体说明书上面一般注明有,比如小鼠
Mus,
大鼠
Rat,
人
Hum
。再次比较重要的是要注意一抗的来源。比如我们在人的癌组织中做
p53
的免疫组化,一抗我们采用的是小鼠来源的
p53
抗体,那么二抗我们一定要选择抗小鼠的二抗比如(山羊抗小鼠,兔抗小鼠),这一点非常重要。最后,一般的抗体说明书都会注明能做什么实验,如果标明了不可以做免疫组化,一定不要选择;反过来说,即使标明了可以做免疫组化,也不一定能够做,商家只会夸大其效果。
Q4. WB
和
IF
的二抗是一样的吗?
很明显,不是!免疫荧光抗体是用于
免疫荧光试验的,是用
FITC
或
PE
等标记的抗体,结果需要紫外线激发并用荧光显微镜观察
WB
抗体一般是
HRP
或碱性磷酸酶等标记的抗体,需显色底物(如
OPDTMB
等)直接显色(肉眼)或化学发光法显影(需特殊仪器)。
Q5.
做
CHIP
的抗体是否可以用来做
WB
抗体?
不一定,一般来说做
CHIP
级别的抗体对抗体纯度特异性方面都要求比较高,基本上能做
CHIP
的抗体都可以做
WB
。但是如果
CHIP
的抗体识别的是构象表位(比如是由两个实际靠在一起但变为线性结构之后相隔很远的两端序列),而不是线性表位,这种
CHIP
抗体做不了
WB
。
Q6.
抗体说明书上面没有写该抗体能够用于某项实验怎么办?
一般而言,抗体研发出来之后都要经过
WB
,
IP
,
IF
,
IHC
实验。档发现浓度不够做
IF
,
IHC
时候,国外的抗体一般都是写未检测,国内的抗体一般是不写。所以尽量不要抱着试试的心里去尝试,往往只会浪费时间。你想啊,如果抗体能够做该实验,他们肯定会写上去啊。
Q7.
做
ELISA
的抗体能否用来做
WB
?
通常用
WB
抗体稀释浓度为
1:1000
,
IF/IHC
为
1:100
,而如果可以做
ELISA
则可以稀释
1:10000
。如果一个抗体用来做
ELISA
的,那么言外之意就是该抗体效价不高。但不是说
ELISA
的抗体不能用于做
WB
,抗体说明书提示做
ELISA
稀释比例为
1:1000
,那么你可以试试
1:100
做做
WB
。
更多详情可以关注义翘神州
抗体纯化
:
https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-purification
相关话题
1
抗体纯化方法详解:步骤、应用与注意事项
2
液氮生物容器的巧妙应用解决了冷冻保存中的样品蒸发问题
3
流式细胞分析方案详解:从步骤到流式免疫检测的全面指南
4
ELISA类型及其原理:常见问题解答
5
什么是蛋白标签?蛋白标签在重组蛋白生产中有什么作用?
近期热榜
赛默飞实验室产品焕新计划有奖调研!
【七月征文】不一YOUNG实验“猿”
报名开启:ICS2024第十三届光谱网络会议!
推荐收藏!盘点中药材及饮片检测解决方案
热门活动
甄选国优仪器,助推设备更新
采购咨询618活动:1000元奖励等你拿
猜你喜欢
最新推荐
热门推荐
更多推荐
【有趣】人容易在意识层面盲目乐观
分享
2011/10/12
【分享】ELISA--间接法原理动画
2007/10/14
【原创】【第三届原创大赛发奖】gl19860312请进
2010/12/28
【转帖】血气分析仪使用过程中注意的问题
2007/06/08
生物工程的一个新的分支:代谢工程
分享
2012/12/20
【分享】小麦基因组草图绘制成功
2010/09/06
单位新办资质,诚聘化学,化探等相关专业职称兼职挂靠,费用一次付
求助
2017/11/14
多聚组氨酸标签(His-tag)
资料
2015/02/12
【我们不一YOUNG】蛋白质浓度测定方法大全
原创
2024/07/06
【我们不一YOUNG】HTS酶抑制剂筛选的流程介绍
分享
2024/07/05
太空微重力环境下癌症药物研究系统进口航空航天随机定位微重力模拟仪AJ001X
分享
2024/07/05
弱光成像或体内发光实验Atik TE科研制冷CCD相机
原创
2024/07/05
【我们不一YOUNG】结缘仪器,一起结缘,与仪器信息网一起成长
原创
2024/07/01
心血管检测仪打开后出现ch375dll.dll电脑丢失怎么办
已应助
2024/07/01
出售贝克曼DXC800生化分析系统
原创
2024/06/21
编织袋拉力机
原创
2024/06/14
检测报告一定要有判定结果吗?
求助
2024/07/01
气相FID重现性不好原因
求助
2024/07/01
求助安捷伦GC7890B,EPC无响应解决办法
求助
2024/07/01
‘有奖问答’对错题’:用抽样方案(30,0)对产品批进行连续验收,当批不合格品率为1%时,方案的接收概率为73.97%,则平均检出质量为( )。
讨论
2024/07/05
HJ1332便携非甲实际应用问题
讨论
2024/07/01
如何做好体系工作?
分享
2024/07/01
多人主检的报告,检测审核应该怎么签字
求助
2024/07/05
EI源的灯丝镉厂家通用吗?
求助
2024/07/03
高效液相问题
原创
2023/12/06
硝酸盐还原率问题
讨论
2023/12/06
微生物实验
已应助
2023/12/06
点检记录和运行记录
已应助
2023/12/06
求助|markes 的TD-100热脱附线路压力突然增大
求助
2023/12/06
四川省生态环境厅关于公开征求《四川省危险废物监管和利用处置能力建设方案(2023—2025年)(征求意见稿)》意见的公告
分享
2023/12/06
深圳市生态环境局 深圳市发展和改革委员会 深圳市工业和信息化局 深圳市住房和建设局 深圳市交通运输局 深圳市市场监督管理局关于印发《深圳市减污降碳协同增效实施方案》的通知
分享
2023/12/06
新疆维吾尔自治区生态环境厅关于工业固体废物环境管理有关要求的公告
分享
2023/12/06
品牌合作伙伴
岛津
日立科学仪器
珀金埃尔默仪器(上海)有限公司(PerkinElmer)
日本电子株式会社
丹纳赫
安捷伦
赛默飞世尔科技
普析通用
欧波同
天美
天瑞仪器
德国耶拿
海能技术
马尔文帕纳科
磐诺科技
上海仪电科仪
梅特勒托利多
聚光科技
莱伯泰科
盛瀚
多宁生物
丹东百特
科哲
卓立汉光
屹尧科技
华谱科仪
宝德仪器
优莱博
HORIBA
布鲁克核磁
举报帖子
执行举报
点赞用户
好友列表
加载中...
正在为您切换请稍后...