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重组蛋白的类型及常见问题解析
Ins_bf0c01c3
2023/12/13
私聊
生命科学仪器综合讨论
重组蛋白是生物科学领域的重要研究对象,其类型多样且具有广泛的应用。然而,在研究和使用过程中,人们可能会遇到各种问题。本文将对这些常见问题进行解析,以帮助读者更好地理解和应用重组蛋白。
重组蛋白的主要类型包括:
①生长因子:一组细胞间信号转导蛋白,由细胞产生并用于通信。其等可刺激多种细胞过程,包括细胞分裂、分化、迁移和存活。主要生长因子家族包括:
FGF
:成纤维细胞生长因子
VEGF
:血管内皮生长因子
神经营养因子:一个生长因子亚群,主要作用于大脑和神经系统相关的细胞
②细胞因子:包括对免疫细胞功能和通信至关重要的干扰素、白细胞介素、促炎性细胞因子和趋化因子
③酶:可进行化学转化的生物活性蛋白;包括重组蛋白酶、激酶和核酸酶
重组蛋白
常见问题解析:
①如何准确评估重组蛋白的生物活性?
生物测定旨在测量给定生长因子或细胞因子的生物活性。在大多数情况下,生物测定是基于细胞的检测,会使用不同的指示细胞,例如原代细胞或细胞系。常用的生物测定包括细胞增殖检测、趋化作用检测、细胞因子生成检测和细胞毒性检测。给定细胞因子的生物活性以
ED50
表达,它代表诱导
50%
最大反应的细胞因子浓度。
②应如何有效地复溶重组蛋白?
首先,对容器进行离心,使粉末聚集在管的底部。我们通常建议将其复溶至
0.1
至
1.0 mg/mL
浓度。大多数蛋白可通过加入无菌蒸馏水复溶。但产品数据表或
CoA
将说明何时需要使用水以外的稀释液。也可在这些文档中找到推荐的溶液、载体蛋白浓度和扩展的储存条件。
③重组蛋白如何保存?
通常,我们建议将冻干重组蛋白储存在
–
20
°
C
下,但可在
4
°
C
或室温下短期储存。复溶蛋白溶液时,我们建议您制备至少含
10
μ
L
蛋白溶液的工作等份试液,并在 –
20
°
C
至 –
80
°
C
下储存。不允许进行多次反复冻融。有关储存冻干和复溶重组蛋白的产品特定说明,请见产品手册、数据表或检验证书
(CoA)
。
④在冻干重组蛋白瓶中未发现蛋白沉淀的可能原因是什么?
重组蛋白通常不含载体蛋白或添加剂(如
BSA
、
HSA
、蔗糖等)。因此在冻干过程中,蛋白成品可能为薄薄的,有时肉眼不可见的薄膜形式沉积在小瓶上,而非颗粒状。沉淀物的大小(如果有)与样品瓶中的重组蛋白数量没有直接关系。
为确保蛋白产物的完全回收,在打开冻干重组蛋白瓶之前,建议对其进行离心
20
–
30
秒,以将可能残留在瓶盖或侧面的任何蛋白聚集到瓶底。复溶后,您可以通过在
SDS-PAGE
上运行少量产品来确认是否存在产品蛋白。通常来说,只要在丙烯酰胺凝胶上上样
10 ng
的蛋白,应该就能看到预期大小的蛋白条带。
义翘神州提供
重组蛋白表达服务
,同时可以根据客户需求,选用不同表达
/
纯化标签、表达宿主等,真正为客户实现深度私人定制。多种纯化体系,为蛋白表达、纯化提供多种选择,帮助客户最大限度提高研究项目的成功率。有需求可以查看:
https://cn.sinobiological.com/services/recombinant-protein-expression-service
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