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多重荧光免疫组化(TSA):原理、优势与实操关键
Ins_bf0c01c3
2024/01/03
私聊
生命科学仪器综合讨论
多重荧光免疫组化(
TSA
技术)是一种基于酪胺信号放大技术的染色方法,利用抗原抗体反应对样本中的多种蛋白标志物进行荧光染色标记。这种技术能在同一组织切片上实现多个靶标蛋白的共染色,最多可同时标记数十种蛋白,从而揭示组织微环境中的复杂信息。通过荧光图像分析,我们可以进行定量分析、细胞分型、以及空间关系分析等多方面的深入研究。
一、技术原理
酪酰胺信号放大(
TSA
)技术利用辣根过氧化酶(
HRP
)对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记。在
H2O2
环境下,荧光标记的酪胺分子被
HRP
催化激活,产生大量酶促反应,使荧光素与抗原紧密结合部位沉积,实现信号放大。
TSA
技术通过循环使用不同荧光染料,可在一张组织切片上实现多种蛋白的共染色。
二、优势
①
TSA
技术能够显著增强荧光放大信号,其增强幅度大约是普通荧光的
3
~
10
倍,使得检测更为敏感和准确。
②在
TSA
技术中,一抗抗体的种属来源不受限制。不同于普通荧光免疫组化共染的要求,
TSA
技术每一轮染色后可以将上一轮的一抗和二抗洗掉,对后续染色无影响。这意味着同一种属来源的一抗并不会影响实验结果,为实验提供了更大的灵活性。
③在
TSA
技术的实验过程中,无需严格避光。这是因为荧光素具有较高的稳定性,不易淬灭。即使在实验操作过程中没有采取避光措施,也不会对实验结果产生影响。更为便利的是,染色后的玻片可以保存数月之久而不发生淬灭,方便后续重新扫描和分析。
三、注意事项
①在准备染料时,要确保完全溶解并混合均匀。若试剂含有有机溶剂并出现沉淀,需先行过滤。
②实验过程中,要防止切片干燥并注意避光,以保持荧光染料的稳定性,防止其淬灭,从而提高实验的准确性和可靠性。
③选择高特异性的第一抗体是关键,它能更准确地识别目标蛋白,减少非特异性染色,从而提高实验的敏感性和特异性。
④选择荧光染料时,要根据第一抗体的表达量来搭配。表达量高的应与弱光搭配,而表达量低的应与强光搭配,以平衡不同抗体间的荧光强度,使实验结果更准确可靠。
⑤在实验前,务必制定详细的方案,包括确定染色顺序、修复条件和每一种抗体所搭配的荧光染料。通过合理的方案设计,可以确保实验的顺利进行,提高实验的一致性和可重复性。
义翘神州提供
多重荧光免疫组化服务
,详情可以关注:
https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services
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