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流式细胞仪检测细胞周期及正常范围
Ins_bf0c01c3
2024/03/07
私聊
生命科学仪器综合讨论
细胞周期
cell cycle
是指从一次细胞分裂形成子细胞开始到下一次细胞分裂形成子细胞为止所经历的过程,它反映了细胞增殖的速度。在临床上,有很多研究证明,细胞周期分析对人肿瘤的诊断预后具有很高的价值。
一个完整的细胞周期包含间期和分裂期(
M
期)两个阶段,间期又分为
DNA
合成前期(
G1
期)、
DNA
合成期(
S
期)和
DNA
合成后期(
G2
期),处于不同时期的细胞的
DNA
含量存在差异。一般认为,
G 1
期细胞具有增殖活性,参与细胞周期循环,是二倍体细胞;
S
期细胞,
DNA
含量逐渐增加,从二倍体变成四倍体,随后进入
G 2
期,最终进入
M
期。检测细胞周期常用的方法是检测
DNA
含量,可以选择能与
DNA
结合的荧光染料(如
PI
等),再根据细胞各个时期
DNA
含量不同从而荧光强度不同的方法,分析各个阶段的细胞比例。
流式细胞仪
PI
染色法检测细胞周期的原理
由于细胞周期各时相的
DNA
不同
,
通常正常细胞的
G1/G0
期具有二倍体细胞的
DNA
含量
(2N),
而
G2/M
期具有四倍体细胞
DNA
含量
(4N),
而
S
期的
DNA
含量介于二倍体和四倍体之间。
PI
(碘化丙啶)为插入性核酸荧光染料,能选择性嵌入核酸
DNA
和
RNA
双螺旋的碱基之间与之结合,结合量与
DNA
的含量成正比关系,其荧光强度直接能反映细胞内
DNA
含量。
因此
,
通过流式细胞仪
PI
染色法对细胞内
DNA
含量进行检测时
,
可以将细胞周期各时相区分为
G1/G0
期
,S
期和
G2/M
期
,
获得的流式直方图对应的各细胞周期可通过特殊软件计算各时相的细胞百分率。
通过定量测定
DNA
含量来分析细胞周期是流式细胞术最早的应用之一。
流式细胞周期(
cell cycle
)检测结果分析常用的流式细胞术分析细胞周期的方法是依据细胞
DNA
含量(横坐标)来分析的:
G0
期:静止期,有丝分裂完成后,脱离细胞周期暂时停止分裂的一个阶段,胞内
DNA
含量保持二倍体;
G1
期:
DNA
合成前期,从有丝分裂到
DNA
复制前的一段时期,此期主要合成
RNA
和核糖体,胞内
DNA
含量保持二倍体;
S
期:
DNA
合成期,在此期,合成
DNA
及组蛋白,胞内
DNA
含量介于
G1
期与
G2
期之间;
G2
期:
DNA
合成后期,是有丝分裂的准备期,合成
RNA
及蛋白质,
DNA
合成终止,胞内
DNA
含量为四倍体;
M
期:细胞分裂期,胞内
DNA
含量为四倍体;
流式细胞检测正常范围
流式细胞检测的正常范围通常依赖于被检测细胞或生物粒子的类型以及所测参数的性质。一般而言,正常的细胞数量、细胞大小、细胞形态、细胞内物质的浓度和分布等参数都在一定的范围内。这些正常范围通常是通过对比大量健康个体或样本的流式细胞检测结果而得出的。例如,正常血细胞的计数和比例,各种免疫细胞的分布,以及细胞内的荧光强度等,都有相应的正常范围。
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