仪器信息网APP
选仪器、听讲座、看资讯
立即体验
APP内打开
回版面
1
收藏
1
拍砖
举报
取消
发布
当前位置:
仪器社区
>
生命科学仪器
>
生命科学仪器综合讨论
>
帖子详情
单克隆抗体第一次筛选的方法详解
Ins_bf0c01c3
2024/03/13
私聊
生命科学仪器综合讨论
单克隆抗体第一次筛选是制备过程中的关键步骤,涉及抗原特异性、抗体分泌量和细胞生长特性等多方面评估。通过精细操作和科学流程,确保筛选出特性优良的杂交瘤细胞株,为后续研究与应用奠定坚实基础。下面一起来看下
单克隆抗体第一次筛选的方法
:
第一次筛选
首先,在已免疫过的
B
淋巴细胞(即效应
B
细胞)和骨髓瘤细胞进行杂交时,可能出现的情况应该先弄清楚。
如果只考虑两两融合,可能的情况有:(效应)
B
淋巴细胞和(效应)
B
淋巴细胞的融合;(效应)
B
淋巴细胞和骨髓瘤细胞的融合(即杂交瘤细胞);骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞的融合(即瘤瘤细胞)。
第一类细胞在体外培养的条件下,因为无法无限增殖,最终死亡,因此,筛选的关键是限制第二类细胞的增殖。科学家在设计实验时,已经考虑到这方面问题,所以他们选择的瘤细胞是有遗传缺陷的,即胸腺嘧啶核苷激酶缺陷(
TK
-)或者次黄嘌呤磷酸核苷转移酶(
HGPRT
-)缺陷。
筛选的目的:获得杂交瘤细胞。
筛选的方法:
用选择性培养基来完成,即
HAT
培养基。
加入次黄嘌呤(
H
)、氨基喋呤(
A
)及胸腺嘧啶核苷(
T
)的培养基称
HAT
培养基。
其中,氨基喋呤可阻断
DNA
合成的主要途径。主要途径阻断后,依靠应急途径即在
HGPRT
(次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶)和
TK
(胸苷激酶)作用下,利用胸腺嘧啶和次黄嘌呤合成
DNA
,缺少其中一种,
DNA
合成不能发生。
用于杂交的骨髓瘤细胞系均由经有毒药物诱导而成选择产生的代谢缺陷型细胞,细胞内均无
TK
或
HGPRT
,所以单个或融合骨髓瘤细胞在
HAT
培养液中将死亡。
B
细胞虽然有
HGPRT
和
TK
,但在体外通常培养条件下,尤其是在单个细胞环境下难于长期存活和增殖传代。
因此,只有杂交瘤细胞才能在
HAT
培养液中生长繁殖。
即
:
①淋巴细胞:不能生长,
5
到
7
天死亡;
DNA
的主要合成途径被
A
阻断。
②骨髓瘤细胞:不能生长,
5
到
7
天死亡;
HGPRT
缺乏,
DNA
合成的旁路途经受阻。
③骨髓瘤细胞和脾细胞融合形成杂交瘤细胞,可长期生长繁殖。利用淋巴细胞的
HGRT
将
H
合成为嘌呤碱并最终与
T
一起合成
DNA
从淋巴细胞获得产生某种抗体的遗传信息,从骨髓瘤细胞获得不断繁殖的能力。
由于通过以上方法选择出杂交瘤细胞,虽然都是杂交瘤细胞,但可能是同一抗原的不同抗原决定簇刺激产生的。所以产生抗体是不纯的。如果不进一步提纯,这样得到的是多克隆抗体,所以,需要第二次筛选。
义翘神州提供
杂交瘤细胞培养及抗体生产服务
,可采用低血清或无血清培养基进行高密度体外培养,降低牛
IgG
污染,是国内外客户优选的杂交瘤细胞生产抗体方案。详情可以关注:
https://cn.sinobiological.com/services/hybridoma-culture-antibody-production-service
义翘神州:蛋白与抗体的专业引领者,欢迎通过百度搜索
“义翘神州”与我们取得联系。
相关话题
1
肺癌概述及早期诊断
2
人鼠嵌合型单克隆抗体制备原理及优点
3
FITC标记蛋白步骤及常见问题解析
4
影响抗原抗体反应的因素
5
抗癌耐寒性
+关注
私聊
季伟玮
第1楼
2024/05/03
厉害!点赞请继续,例如,是用哪种方法来做的筛选啊?
0
发表回复
近期热榜
迎国庆送壕礼!十月发帖抢大疆云台
【官方邀请】高效液相色谱使用情况有奖调研
喜迎国庆!第十七届原创大赛超级原创日参赛奖励翻倍
丹纳赫四十周年寄语征集领大礼包
热门活动
【售后专场--招聘会】
第三届微课大赛投票进行中ing
猜你喜欢
最新推荐
热门推荐
更多推荐
2017年蛋白质组学市场将达172亿美元,这块蛋糕如何分?
讨论
2013/09/06
【原创】电泳知识介绍(一)序
2007/07/30
【求助】HBsAg 2010版药典新规定
2010/08/26
酶标仪回收率计算方法是什么?
原创
2014/08/04
请问TOPI异构酶稀释应该用什么稀释
求助
2022/07/29
【每周一题】超净工作台安装、使用和维护应该注意什么?鼠标一抖,积分到手哦(已公布答案)
讨论
2013/06/07
以生物路径丛概念从事复杂疾病之基因分析
分享
2012/12/11
正排量微注射器功能特点及规格
分享
2019/10/09
医疗仪器的革新:守护生命的科技力量
分享
2024/09/19
仪器的魅力:科技探索与精准控制的基石
分享
2024/09/19
Tigergene动物实验用颅钻
原创
2024/09/16
全光谱流式细胞仪原理,可以帮忙解答一下吗
原创
2024/09/09
bd流式细胞仪多少钱一台,可以帮忙解答一下吗
原创
2024/09/09
生物技术领域外商投资放开-干细胞重大利好!
原创
2024/09/09
化学发光免疫分析原理,能不能展开详细说说
原创
2024/09/07
Excounter第三代全自动外泌体分析仪重磅上市(让外泌体检测从此简单)
原创
2024/09/07
实验室容量瓶、移液管等玻璃器皿检定
求助
2024/09/25
标准溶液该如何配置?
第十七届原创
2024/09/25
微量注射器用移液器检定规程出具证书,带CNAS logo,合理吗?
求助
2024/09/25
关于气相基线高一倍求助
求助
2024/09/24
如果计量器具较小,校准标签贴不开怎么办?
求助
2024/09/26
【求助】申请CNAS实验室认可,文审阶段老师提出我司的组织机构图中未体现有关部门对实验室的支撑关系。请问如何修改?
求助
2024/09/24
粪大肠阴性对照 产气肠杆菌的测定
求助
2024/09/25
氟化物数据不稳定
求助
2024/09/25
求推荐含金量高的橡胶检测技术培训班
求助
2024/03/13
各位大侠,由谁知道:目前不同品牌的离子色谱仪市场占有率?
已应助
2024/03/13
硫酸铵测凯氏定氮仪的回收率
已应助
2024/03/13
广东省环境监测协会立项《水质 六溴环十二烷的测定 高效液相色谱-三重四极杆质谱法》等两项团体标准
分享
2024/03/13
重庆市环境科学学会关于对《工业园区污水处理厂污泥危险特性鉴别技术指南》团体标准立项的通知
分享
2024/03/13
检测站必须要过环评吗?
已应助
2024/03/13
求助:管理评审必须提出整改项吗?
已应助
2024/03/13
CHA2266-99F Ku频段低噪声驱动放大器UMS
仪器微课堂
2024/03/13
品牌合作伙伴
丹纳赫苏州基地 打工人的梦想
岛津
日立科学仪器
珀金埃尔默仪器(上海)有限公司(PerkinElmer)
日本电子株式会社
丹纳赫
安捷伦
赛默飞世尔科技
普析通用
欧波同
天美
天瑞仪器
德国耶拿
海能技术
马尔文帕纳科
磐诺科技
上海仪电科仪
梅特勒托利多
聚光科技
莱伯泰科
盛瀚
多宁生物
丹东百特
科哲
卓立汉光
屹尧科技
华谱科仪
宝德仪器
优莱博
HORIBA
布鲁克核磁
举报帖子
执行举报
点赞用户
好友列表
加载中...
正在为您切换请稍后...