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营养琼脂培养基污染源分析

oscar_2007

2024/08/16

食品毒素/微生物检测

营养琼脂培养基污染源分析

最近几天微生物实验室的灭菌过的营养琼脂培养基放在内，12小时后长出霉菌，接连几天都出现这种现象，而我们内部只是依据标准GB/T 5750.12-4《生活饮用水标准检验方法，微生物指标》中菌落总数-平皿计数法，做饮用水中的细菌总数，细菌总数是指1mL水样在营养琼脂培养基上、有氧条件下（36±1）℃培养48H后，所得水样中菌落总数。那么营养琼脂培养基上的霉菌何来？

营养琼脂培养基配制及灭菌

称量13.2g营养琼脂，用400mL一级水溶解到锥形瓶中，盖好橡胶塞用A4纸包扎好，放到高压灭菌锅里经121℃灭菌20min，灭菌完成后，拿出来时要摇一摇，以防琼脂出现沉淀，最后放到45℃水浴锅中保温。

在倒平板前净化试验台的灭菌：在培养基移至净化试验台前，对台面用75%酒精喷洒清洁灭菌，保持台面无菌状态，佩戴的手套同样使用75%酒精喷洒清洁灭菌。确保营养琼脂培养基在处理过程中不会出现菌种干扰或污染。

倒平板：待培养基冷却至45℃左右，按无菌操作法倒2个平板，每皿约15mL平置，待凝固。

倒平板的方法：右手托住培养基的锥形瓶底置酒精灯火焰，用左手将瓶塞轻轻地拨出，锥形瓶保持对着火焰；对瓶口灭菌，然后用右手小指与无名指夹住瓶塞。左手打开培养皿皿盖，迅速倒入培养基约15mL，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后平置于净化试验台桌面上，待凝后即为平板。

以上是营养琼脂培养基未接种整个培养处理过程。

正常水样接种过程：

使用已灭菌的移液器吸取1mL充分混匀的水样置于已灭菌的培养皿，加入约15mL营养琼脂培养基，在培养箱36±1℃的环境下进行48h培养。即为1ml水样中的菌落总数。

霉菌来源分析：
1. 空调长时间未使用，冷凝管道内滋生细菌，随着冷风吹出，再被净化试验台的抽风装置抽进去，导致放置在试验台的培养基感染。由于室内设置的温度25℃，当时那几天湿度在60-65之间。为霉菌提供了合适的温床。
2. 营养琼脂培养基灭菌后在实验区域被交叉污染，实验人员未发现。在倒平板时，未对营养琼脂培养基溶液进行酒精灯杀菌。也有可能引入细菌。

对以上两个问题点进行整改，以及对使用人员进行回炉培训，强调实验过程随时灭菌的重要性。

模拟实验：

重新将配置的营养琼脂灭菌，倒平板，放置于净化试验台，在未开启空调。24H后再观察营养琼脂培养基没有出现霉菌现象。连续放置48H小时，也未出现霉菌现象。

总结

实验过程的细小的问题点都可能影响到最终实验结果，作为实验人员应该重视实验过程的每一个细节，都是决定实验能否正常完成的关键点。优化每个实验点对整个实验过程是一个完美的追求。

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