仪器信息网APP
选仪器、听讲座、看资讯
立即体验
APP内打开
回版面
评论
收藏
点赞
拍砖
举报
取消
发布
当前位置:
仪器社区
>
样品前处理
>
前处理综合讨论
>
帖子详情
【金秋计划】+电荷异构体的馏分收集(IEX-HPLC法)
通标小菜鸟
2024/09/04
私聊
前处理综合讨论
单克隆抗体
在生产及存储过程中会由于抗体分子自身性质、环境应力、储存方式等因素,而发生复杂的
翻译后修饰
,如氧化、脱酰胺、糖基化、C末端赖氨酸切除、N末端
焦谷氨酸
化、降解/聚合等,造成抗体在电荷分布方面高度的异质性。电荷异构体的产生会影响抗体药物的结合能力、生物学活性、免疫原性以及结构稳定性等,进而影响抗体药物的
药物代谢动力学
、安全性和有效性。电荷变化的复杂性常常给评估完整的电荷变化概况带来巨大的挑战。
目前,有多种方式(IEX-HPLC、FFE、icIEF等)对电荷异构体进行馏分收集,从而进一步对产品进行表征。奕安济世生物药业
理化分析
平台具有成熟的IEX-HPLC馏分收集技术,可获得较高的目标收集组分含量,馏分收集纯度1(IEX-HPLC)可达85%以上。收集装置如图1所示,主要是由HPLC和馏分
收集器
串联组成。
图1. IEX-HPLC馏分收集系统
为提高馏分收集效率,前期一般需要在所用原始分析方法(IEX-HPLC)基础上进行优化,在保持主洗脱梯度程序不变的情况下,缩短方法的平衡时间,增加进样质量。其中,在不改变
进样器
定量环体积基础上,通过叠加多次进样然后一次洗脱的方式以增加进样质量,可大大提高目标组分的收集效率。图2展示了不同进样质量的CEX-HPLC色谱图,单次进样/洗脱的抗体质量可达9 mg。
图2. 叠加进样及收集区域
为了提高目标组分的收集效率,采用进样9 mg的抗体质量进行馏分收集,收集区域如图2(下)所示。将盲收2得到的馏分样品结合二次精制的方式,再经系列换液、浓缩,最终得到的目标收集组分经CEX-HPLC检测图谱如图3所示,馏分收集纯度见表1。其中第二个碱性峰的(Basic Fraction 2)由于发生N端焦谷氨酸环化,导致其收集纯度降低,其余馏分收集样品纯度可达90%以上。
图3. 馏分收集样品CEX-HPLC检测结果叠图
表1. 馏分收集纯度
馏分收集样品的纯度达到后续表征研究要求后,需对其进行储存条件进行稳定性评估。以确保其质量在表征研究过程中,未发生明显改变。馏分收集后的样品将进一步用于表征研究,对CQA评估、工艺变更、产品批次间差异、质量标准制定等具有重要的指导意义。
相关话题
1
【金秋计划】+分馏和干馏有什么区别
2
【金秋计划】+食品微生物检验样品前处理的部分讨论
3
【金秋计划】+GB/T 20769-2008前处理中的关键控制点有哪些,确保检测的准确性?
4
【金秋计划】+农残检测好多都是单点定量,怎么选浓度点?可以用曲线校正吗?
5
【金秋计划】+农残检测氟虫腈,判定的时候要求氟甲腈、氟虫腈、氟虫腈砜、氟虫腈硫醚加和,但是氟甲腈和氟虫腈砜、氟虫腈硫醚没有给检测方法,这个应该怎么检测呢?
近期热榜
【官方邀请】高效液相色谱使用情况有奖调研
【中秋佳节】 在一起月更圆!
一个“不符合”难住新领导
第三届微课大赛投票进行中ing
热门活动
第三届微课大赛投票进行中ing
【仪采通】仪器采购更轻松
猜你喜欢
最新推荐
热门推荐
更多推荐
外标法定量问题
求助
2014/06/16
求问:凯氏定氮仪的外校
求助
2011/07/15
原子簇的结构规则和化学键
2006/03/15
【资料】电感耦合等离子质谱分析的应用
2008/08/26
【讨论】你们的烘箱使用多少年了?报废了没有?
2010/08/21
【求助】spe柱可以再生吗?
2008/04/15
莱驰球磨仪好用吗
原创
2014/09/01
【讨论】GPC仪器再问
2007/06/03
第一次配置浓硫酸时 都应该注意什么
第十七届原创
2024/09/19
离子色谱测含EDTA的水样里的硫酸根
求助
2024/09/18
【仪器心得】青岛华派科仪HP-M30P涡旋振荡器使用心得
第十七届原创
2024/09/18
【仪器心得】CJJ-78-1磁力加热搅拌器使用心得
第十七届原创
2024/09/18
药品中吐温-80去除方法
求助
2024/09/17
【金秋计划】用 HJ586-2010 方法测定游离余氯的标准曲线不成线性怎么办?
分享
2024/09/10
【金秋计划】水质余氯检测用哪个方法?
分享
2024/09/10
【金秋计划】浊度与其他指标的联系与影响有哪些?
分享
2024/09/10
【金秋计划】当没有合适的基质时可以用标准加入法来试试看
第十七届原创
2024/09/13
原子吸收火焰法测定土壤中六价铬所用质控样值一直在衰减
求助
2024/09/12
人比人真的该死!”-同是去参观实验室的两个人给带来的收获却是不同的!!
第十七届原创
2024/09/18
有经验的新进人员为什么就不能“拿来即用”哪?
第十七届原创
2024/09/18
检测报告出问题真正的法律责任应该由谁来负?
第十七届原创
2024/09/18
关气瓶是先关总阀还是先关减压阀?
求助
2024/09/14
植物油中其他油的色谱检测初探
第十七届原创
2024/09/18
基线(随机出现)突跃有哪些原因?
求助
2024/09/12
【金秋计划】+超临界流体色谱(SFC)在热力学方面的研究
分享
2024/09/04
【金秋计划】+超临界流体色谱的进展
分享
2024/09/04
天气预报啊
原创
2024/09/04
举报资料“GB/T 9345.1-2008 塑料 灰分的测定第1部分:通用方法”
2024/09/04
秋天 丰收的秋节
原创
2024/09/04
举报资料“GB 51017-2014 古建筑防雷工程技术规范.pdf”
2024/09/04
有实验室认可CNAS交流的群吗?小白们,大师们一起交流交流经验啊?求问在网上提交申请资料后,什么时候寄送纸质资料呢?申请费什么时候交呢?啊,太多问题了!求助!
原创
2024/09/04
求助化妆品类相关标准,谢谢
已应助
2024/09/04
品牌合作伙伴
岛津
日立科学仪器
珀金埃尔默仪器(上海)有限公司(PerkinElmer)
日本电子株式会社
丹纳赫
安捷伦
赛默飞世尔科技
普析通用
欧波同
天美
天瑞仪器
德国耶拿
海能技术
马尔文帕纳科
磐诺科技
上海仪电科仪
梅特勒托利多
聚光科技
莱伯泰科
盛瀚
多宁生物
丹东百特
科哲
卓立汉光
屹尧科技
华谱科仪
宝德仪器
优莱博
HORIBA
布鲁克核磁
举报帖子
执行举报
点赞用户
好友列表
加载中...
正在为您切换请稍后...