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凝胶色谱(GPC)
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【金秋计划】+请评价一下混合床色谱柱及单孔径色谱柱两者之间的利弊?
memory光阴
2024/09/14
私聊
凝胶色谱(GPC)
答:这是一个很难回答的问题,因为这里存在一个设计理念的问题,同时有许多方面都需要考虑。
让我们就从
“线性校正曲线”开始谈起。虽然当今在实验室中,研究员更广泛地使用能够处理更复杂算法的计算机,因此对简单数学的要求已经普遍减少,但大多数人似乎还是比较乐于接受线性关系的模式。
不幸的是,摩尔质量的对数与洗脱体积之间的关系不是线性的。
GPC/SEC校正曲线在形状上通常为S形,因此摩尔质量的对数与洗脱体积两者绘制出来的图形也为S形。大部分时间多项式函数的第3(立方的)、第5或第7项用于进行数据拟合。只要该校准曲线的斜率也得到相应的评估,这就是一个很好的避免过度拟合的方法。[2] 该方法使研究人员能够充分利用色谱柱的完全分离范围。请注意,当处于摩尔质量的最高点或最低点时,线性色谱柱同样也是非线性的,因此如果样品在该区域进行洗脱,必须配合不同的拟合方法。
线性或混合床色谱柱是色谱生产商激烈竞争下的产物。生产不仅涉及特殊的合成路线,更多的时候是对单孔径色谱混合的精益求精。线性色谱柱的主要优点是,它们可以在一个恒定的分辨率下,在一个宽泛的摩尔质量范围内进行分离,对于常规
QC也是非常理想的工具,而如果用户需要处理不同摩尔质量,也能够帮助用户对色谱柱进行筛选。你可以通过添加相同类型的线性色谱柱来简单地实现分辨率的提高。然而,当需要分离更高或更低的摩尔质量时,要改变摩尔质量的分离范围是非常困难的。错误匹配孔隙的风险非常高,例如当线性色谱柱与那些适用于低聚物分离的单色谱柱结合时。[3]
单孔径色谱柱的主要优点是其提供了高效率的分离,但其分离的摩尔质量范围是有限的。因此,单孔径色谱柱常常要与其他色谱柱结合使用。可以通过增加和移除色谱柱的方式,来适应改变的分子量及时间需求。这种方法的一个附加优点是,具有最大孔隙率的色谱柱可优先用于分离高摩尔质量(以及高粘度)的聚合链,从而避免粘性指进。因此何为最佳类型的色谱柱取决于实验室的需求。
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