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高效液相色谱基础篇|关于离子交换色谱柱维护保养及注意事项小知识
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2024/10/09
私聊
液相色谱(LC)
承接上回,我们说了一下离子交换色谱柱的原理、构造、分离机制、使用过程中的注意事项及它的局限性,今天主要说说它的维护保养和相关的注意事项,色谱柱固有一死,但好的操作还是能延缓它的生命周期的。
01.离子交换色谱柱的维护
1)
柱体积估算:
可以使用公式V=0.68πr
2
L 来估算色谱柱的柱体积,其中 V 为柱体积(mL),r 为色谱柱内径(cm),L 为色谱柱长度(cm)。
2)色谱柱的柱效测试:
在条件允许的情况下,对新色谱柱进行测试。
3)色谱柱平衡:
新柱使用前,应先用甲醇或乙腈冲洗,然后用初始流动相冲洗,以达到平衡。
4)色谱柱保护:
对于复杂样品,建议使用在线滤器或保护柱,或者使用SPE小柱进行前处理。
5)色谱柱清洗
:
常规清洗包括使用100%水冲洗除盐,然后用甲醇或乙腈冲洗。对于强保留污染物,可以使用高浓度缓冲盐溶液(一般不超过1M的盐浓度)清洗,再用甲醇或乙腈清洗。
6)色谱柱保存:
色谱柱应在适宜的温度下保存,并且根据制造商的建议使用合适的保存液。如果长时间不用,应该用保存液进行冲洗,确保里面填料不会干涸。
7)使用保护柱:
对于容易污染的样品,建议使用保护柱来延长分析柱的寿命。
8)记录维护:
记录色谱柱的使用和维护历史,包括使用日期、样品类型、清洗和再生周期等。
9)更换柱子:
当色谱柱性能下降,如出现峰形异常、柱效降低或分离度下降时,考虑更换新柱。
02.离子交换色谱柱的注意事项
1)pH范围:
确保流动相的pH值在色谱柱指定的范围内,通常为2-8,以防止固定相水解或分解。
2)温度控制:
避免长时间在极端温度下使用色谱柱,一般推荐使用温度不超过60℃。
3)样品清洁度:
样品应尽可能干净,避免含有悬浮颗粒、聚合物或其他可能堵塞或污染色谱柱的物质。
4)样品溶解性:
样品最好溶解在流动相或与之兼容的溶剂中,以减少柱床的污染。
5)流动相组成:
流动相的组成应当新鲜配制,避免使用长时间存放的溶液,以防微生物生长或沉淀形成。
6)缓冲盐浓度:
使用合适的缓冲盐浓度,避免过高的浓度可能导致的柱床污染或性能下降。
7)避免高压:
在冲洗或使用过程中,避免对色谱柱施加过高的压力,这可能导致填料压缩或床层损坏。
8)避免极端条件
:
避免在超出色谱柱制造商规定的pH、温度或有机溶剂比例的条件下使用色谱柱。
9)定期平衡:
新柱或长时间未使用的色谱柱在使用前应进行适当的平衡。
总结一下:
为了确保离子交换色谱柱的长期稳定性和高效性能,我们需要遵循一系列维护和保养的步骤。首先,我们需要了解色谱柱的基本特性,比如它的体积,这可以通过特定的公式来计算。新柱子在投入使用前应该进行柱效测试,以确保其性能符合标准。
使用前,色谱柱需要用适当的溶剂进行预冲洗,然后用流动相进行平衡,以保证分析的重现性。对于含有复杂组分的样品,建议使用保护柱或在线过滤器,以减少对分析柱的污染。
在操作过程中,我们需要注意以下几点:保持流动相的pH值在色谱柱允许的范围内,控制色谱柱的使用温度,确保样品的清洁度,以及使用新鲜配制的流动相。同时,也要避免使用过高的压力,防止超出色谱柱制造商规定的使用条件。
定期清洗色谱柱也是必不可少的,这包括使用水溶液去除盐分,接着用有机溶剂进行深度清洗。如果遇到顽固的污染物,可能需要使用高浓度的缓冲盐溶液进行处理。色谱柱在不使用时应该用推荐的溶剂保存,以防止填料干涸和性能下降。
此外,记录色谱柱的使用和维护历史对于追踪其性能变化非常重要。当色谱柱的性能下降时(如出现异常的峰形或降低的柱效),就应该考虑更换新的色谱柱了。
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