ufoqk
第5楼2007/08/21
方法的前后文见下文,本想把整个文件发上去,声望不够。
9.3 定性分析
9.3.1 分析
按照9.1操作。
9.3.2 出峰确认
通过与比较图A.1、A.2和A.3,确认检测样品的出峰。这些电泳图谱显示了真正的脱脂奶粉的出峰特征和掺入大豆和豌豆蛋白的出峰特征。
9.4 定量分析
9.4.1 分析
按照9.1分析检测样品(8.2)、空白样品(9.4.2)和参比样品(5.6)。
9.4.2 空白样品
在34475Pa(0.5psi)压强下,进样样品缓冲液(5.2)50s,应该获得相对平缓的基线。
9.4.3 检测
根据以下顺序检测:
a)参比样品(5.6);
b)空白样品(9.4.2);
c)检测样品(8.2);
d)空白样品(9.4.2);
e)参比样品(5.6)。
若样品数超过10到15个,重复以上顺序。
9.4.4 出峰确认
按照9.3.2确认获得的谱图,图A.1、A.2和A.3显示了真正的脱脂奶粉的出峰特征和掺入大豆和豌豆蛋白的出峰特征。
9.4.5 峰区域的整合(integration of peak)
调整整合参数使各谱图能与A.2或A.3可比。不要将多个峰整合在一个图上,以免引起峰区域计算错误。
利用以下公式计算标准化的蛋白质(i)峰区域Ani:
Ani=Ai/ti;
Ai---蛋白质i的峰区域数值;
ti---峰i的移动时间,min;
对于豌豆蛋白,将各标准化峰区域求和。
注意:现代数据获取软件提供标准区域的计算方法。
9.4.6 校正
9.4.6.1 参比样品
使用两个参比样品,按照9.4.3和9.4.5测量并计算。
9.4.6.2 响应因子Rfi的计算:
Rfi=Pc/Aci;
Pc---校准物中植物蛋白占总蛋白的质量分数;
Aci ---参比校准物的标准区域数值。
如果校准物响应因数误差不超过5%,使用该响应因数;否则计算线性衰退常数。
10 计算及结果
10.1 定性分析
如果检测样品图谱与图A.1不同,说明检测样品中添加了其它蛋白质,为可以样品。
基于大豆蛋白或豌豆蛋白出峰特征的唯一性,与图A.2、A.3比较。
10.2 定量分析
10.2.1 计算
计算掺入植物蛋白的质量分数,Ps,利用以下公式计算:
Ps=Rf×Ansi;
Rf---平均响应因数(见9.4.6.2);
Ansi---按照9.4.5计算样品标准峰区域的值。
若应用9.4.6.2的衰退公式,可替代Rf、Ansi。
10.2.2 检测结果的表达
结果保留两位小数。