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【求助】土壤酶的测定

  • wgy5615321
    2007/09/22
  • 私聊

土壤固体废弃物监测

  • 有人侧过土壤磷酸酶吗
    有点疑问:
    1.缓冲液的选择:柠檬酸缓冲液和tris-HCl缓冲液如何选择
    2.硫酸铝的作用是什么,资料上说,加100ml0.3%的硫酸铝,能不能改为加10毫升3%的硫酸铝,因为我用的锥形瓶没那么大。
    3.在做土壤酶实验时都需要加甲苯,甲苯的作用到底是什么
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  • wgy5615321

    第1楼2007/09/23

    有没有高手啊?

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  • xiaoyu311_0

    第2楼2007/09/24

    我知道加甲苯是为了杀死土壤中微生物,以免测定过程中微生物分泌酶而影响测定结果

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  • wgy5615321

    第3楼2007/09/24

    嗯,有道理
    不知道,其它两点有没有人帮忙解释一下

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  • 高卧东山

    第4楼2007/09/24

    1.缓冲液主要要注意的当然是pH范围,其次也要防止其组分与样品作用
    2.我认为不行。虽然这样没改变硫酸铝的用量,但是等于溶液的总体积少了90mL,最终改变了溶液中所有试剂的真实浓度。比较可取的方法应该是所有试剂均酌情减量使用。

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  • zjgreentea

    第5楼2007/09/25

    1。缓冲液只是为了保持土壤pH在测定中的稳定一致。磷酸酶有酸性,中性。碱性之分。根据你要测定的酶选择相应的缓冲液pH. 二种缓冲液应该都没关系。只要你标准曲线用同样的。

    2。我没看到过要加硫酸铝的。不知你用的是什么方法。我用的是美国土壤学会的方法。

    3。加甲苯是为了中止酶反应。也可用其它试剂的。但应该说甲苯的效果比较好。多数人用这个。这样你的结果也容易与其它人的比较。

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  • wgy5615321

    第6楼2007/09/25

    我用的是关松荫那本《土壤酶及其研究法》

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  • wgy5615321

    第7楼2007/09/25

    做了一个预试验
    发现值很低,标线最高浓度15毫升酚工作液(0.01mg/ml)的吸光值才0.05,但是标线的趋势还可以
    而样品的吸光值,很多都测不出来,不知道是啥原因,是否是因为加了100ml 0.3%的Al2(SO4)3的缘故?

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  • xiaoyu311_0

    第8楼2007/09/26

    土壤酶活性测定,都是一开始就加甲苯,甲苯加入不是终止反应的

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  • wgy5615321

    第9楼2007/09/27

    美国土壤学会的方法,不知道能否共享一下
    不知道是基质问题,还是操作或者试剂上的问题,我测得的值,总是很低,不太可靠
    本人,第一次测磷酸酶,不太懂,请大家,多多指教

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  • zjgreentea

    第10楼2007/09/27

    称1 g风干土于50 mL三角瓶中,加入0.2 mL甲苯和4 mL MUB(通用缓冲液,测酸性磷酸酶时用pH 6.5的,测碱性磷酸酶时用pH 11的),再加1 mL 0.05 M对硝基苯磷酸钠溶液 (用同样的缓冲液MUB配),摇匀后加盖,放进37℃的培养箱中进行培养, 1个小时后取出,加入0.5 M 的CaCl2 1 mL 及0.5 M 的NaOH 4 mL,摇匀后过滤并测定滤液在410 nm下的吸光值。

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