【飞诺美色谱】婴幼儿奶粉中5种核苷酸分析报告

艾杰尔飞诺美

2024/04/07 18:14

摘要：本实验采用高效液相色谱 (HPLC) 法结合紫外检测器，按照 GB 5413.40-2016 婴幼儿食品和乳制品中核苷酸的测定方法，使用 Venusil ® AQ C18 Plus 色谱柱(5 µm，150Å；4.6 × 250 mm)对 5 种核苷酸混合标准溶液、某品牌婴幼儿奶粉供试品溶液进行分析测定。结果表明：在波长为 254 nm，流动相为磷酸盐缓冲溶液(pH3.2)︰甲醇=1000︰4(v/v)时， Venusil ® AQ C18 Plus色谱柱可将 5 种核苷酸完全分离，基质样品分离效果与国标标准谱图接近，可用于婴幼儿奶粉中 5 种核苷酸的分析测定。

关键词：高效液相色谱法；紫外检测器；婴幼儿奶粉；核苷酸；Venusil ® AQ C18 Plus

前言

核苷酸是生命遗传物质 DNA 和 RNA 的基本组成单位，是体内合成核酸的前身物。婴幼儿正处在快速生长发育阶段，身体对核苷酸的需求量超过体内合成核苷酸的能力，但母乳可为婴幼儿提供所需核苷酸。而对于没有母乳喂养的婴幼儿，食用含足量核苷酸的配方奶粉，不仅可提高免疫力，也可保护婴幼儿肠胃健康。

实验部分

仪器、试剂与材料

主要仪器设备

高效液相色谱仪，紫外检测器；

试剂材料

屈臣氏水；甲醇为色谱纯；

磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、冰乙酸、四丁基硫酸氢铵为分析纯；

胞嘧啶核苷酸对照品、腺嘌呤核苷酸对照品、尿嘧啶核苷酸对照品、次黄嘌呤核苷酸对照品、鸟嘌呤核苷酸对照品：由某乳制品公司提供；

高效液相色谱柱：Venusil ® AQ C18 Plus； 5 μm，150 Å，4.6 × 250 mm；

样品制备

5 种核苷酸混合标准溶液：分别称取核苷酸标准品 CMP、AMP、UMP 各 10 mg、GMP、IMP 各 5 mg(精确至 0.1 mg)，用水溶解成并定容至 100 mL，混匀，即得；某品牌婴幼儿奶粉供试品溶液：称取 5.0 g 奶粉样品，用 20 mL 热水(50-60℃)充分溶解试样，冷却至室温；用 10%乙酸溶液调节 pH 至 4.1，移至 50 mL 容量瓶中，定容，滤纸过滤，所得滤液用 0.45 μm 滤膜过滤，即得供试品溶液。

色谱条件

色谱柱：Venusil ® AQ C18 Plus； 5 μm，150 Å，4.6 × 250 mm；

流动相：磷酸盐缓冲溶液(称取 1.360g 磷酸二氢钾，加 0.4753 g 四丁基硫酸氢铵，加 900 mL 水溶解，用 0.1 mol/L 磷酸氢二钾溶液调 pH 至 3.2，定容至 1000 mL)︰甲醇=1000︰40(v/v)；

波长：254 nm；

柱温：25℃；

流速：1.0 mL/min；

进样量：10 µL。

结果与讨论

本实验按照 GB 5413.40-2016 婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定中方法，使用Venusil ® AQ C18 Plus 色谱柱对 5 种核苷酸混合标准溶液、婴幼儿奶粉供试品溶液进行检测，由以下结果可知，5 种核苷酸分离度均大于 1.5，实现完全分离；对婴幼儿奶粉样品的分离效果与国标标准图谱接近。

结论

本本实验按照 GB5413.40-2016 婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定中方法，使用Venusil ® AQ C18 Plus 色谱柱对 5 种核苷酸混合标准溶液、婴幼儿奶粉供试品溶液进行检测，结果表明在上述实验条件下，Venusil ® AQ C18 Plus 色谱柱可用于婴幼儿奶粉中5 种核苷酸的分析检测。

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