摘要：本实验采用高效液相色谱法结合紫外检测器，使用邻苯二甲醛（OPA）、N-乙酰-半胱氨酸为衍生试剂，对天冬氨酸对映体进行柱前衍生，选择 Venusil ® C18 Plus 色谱柱，采用磷酸氢二钠与十水合四硼酸钠缓冲液（pH8.2）︰甲醇=98︰2(v/v)为流动相，流速为1.0 mL/min，检测波长为338nm，柱温为 25℃，进样量为 5 µL 时，测得混合对照溶液中 D-L 天冬氨酸对映体的分离度为 2.05，能够满足检测要求。
关键词：高效液相色谱法；D-L 天冬氨酸；邻苯二甲醛；Venusil ® C18 Plus 色谱柱
前言
氨基酸是构成蛋白质的基本物质，蛋白中的氨基酸都是 L 型的，只有 L 型的才能被人体直接利用，D 型氨基酸由于难以被细菌降解，不易产生抗药性而成为酶抑制剂的重要合成前体， L-天冬氨酸在医药上主要用于钾、钙等无机离子的补充剂，疲劳回复剂。D-天冬氨酸是一种重要的手性化合物，在医药、食品等方面起着很重要的作用。目前分离氨基酸对映体的方法很多，如酶解拆分、手性色谱、高效液相色谱等。用高效液相色谱法拆分氨基酸对映体分为直接法和间接法两种途径，直接法是采用手性固定相或手性流动相进行拆分，间接法即柱前衍生化法，分离条件简单，分离效果好。本实验采用间接法，用邻苯二甲醛（OPA）作为衍生试剂对 D-L 天冬氨酸进行柱前衍生，衍生化反应如下：
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备
高效液相色谱仪，紫外检测器；
试剂材料
实验用水为屈臣氏蒸馏水；磷酸氢二钠与十水合四硼酸钠均为分析纯试剂；
D-L 门冬氨酸对照品：白色粉末，由某药业集团股份有限公司提供；
高效液相色谱柱：Venusil ® C18 Plus；5 μm，120 Å，4.6 × 250 mm。
色谱条件
色谱柱：Venusil ® C18 Plus；5 μm，120 Å，4.6 × 250 mm；
缓冲液：称取十二水合磷酸氢二钠 9.0g，十水合四硼酸钠 9.5g，加水 2000mL 溶解，
用 36%盐酸调节 pH 至 8.2，用 0.45μm 滤膜过滤；
流动相：缓冲液︰甲醇=98︰2(v/v)；
流 速：1.0 mL/min；
波 长：338nm；
柱 温：25℃；
进样量：5 µL。
样品制备
称取 D、L-天冬氨酸粉末 5.0 mg，分别置于两个 10 mL 容量瓶中，加 0.1 mol/L 盐酸溶解并稀释至刻度，分别制得每 1.0 mL 中含 0.5 mg 的溶液；
分别称取 D、L-天冬氨酸粉末 5.0 mg，置 10 mL 容量瓶中，加 0.1 mol/L 盐酸溶解并稀释至刻度，制得每 1.0 mL 中分别含 D、L-天冬氨酸 0.5 mg 的溶液；
样品衍生
准确量取 Durashell AA 氨基酸分析手册中的硼酸盐缓冲液 50 µL，置 1.0 mL 离心管中，加入样品溶液 20 µL，混匀，加入 Durashell AA 氨基酸分析手册中的 OPA 衍生试剂 10 µL，混匀，放置 1.0 min，即得。
结果与讨论
本实验采用高效液相色谱 (HPLC) 法结合紫外检测器，使用邻苯二甲醛（OPA）、N-乙酰-半胱氨酸为衍生试剂，对天冬氨酸对映体进行柱前衍生，测得混合对照溶液中D-L 天冬氨酸对映体的分离效果较好。
结论
本实验采用高效液相色谱 (HPLC) 法结合紫外检测器，使用邻苯二甲醛（OPA）、N-乙酰-半胱氨酸为衍生试剂，对天冬氨酸对映体进行柱前衍生，测得混合对照溶液中D-L 天冬氨酸对映体的分离度为 2.05，能够满足检测要求。
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