一 背景 不饱和脂肪酸是构成体内脂肪的一种脂肪酸,人体必需的脂肪酸。花生四烯酸(AA)是 一种在生物体内含量较高, 分布最广的多不饱和必需脂肪酸。对粪便样品中花生四烯酸的研 究,可为体内脂肪酸代谢提供一定参考信息。 本实验采用Cleanert MAS-M对粪便样品进行净化处理,建立了粪便样品中花生四烯酸含 量检测方法。
二 目标物信息
三 材料与仪器 Cleanert MAS-M 96 孔萃取板;Cleanert M96 生物样品前处理仪;Cleanert V96 氮吹浓 缩仪;96 孔接收板;PTFE 过滤头;Venusil ASB C18(2.1*50mm,3μm,150Å);API 4000+ LC-MS/MS 串联质谱。 四 样品处理方法 4.1 样品前处理 称取 50mg 粪便样品加入 5mL 离心管中,向其中加入 0.5mL 1%甲酸水,涡旋混匀 2min, 再向其中加入 1.5mL 甲醇,涡旋,6000r/min 离心 5min,取上清液;重复上述步骤再提取一 次,合并上清液,过 0.22μm PTFE 滤头,向其中加入 0.6mL 氨水,使上样液中含有 4%氨水, 待净化。 4.2 净化过程 所用 SPE 为 Cleanert MAS-M 96 孔萃取板 活化:甲醇 600μL,水 600μL 上样:待净化液全部上样,上样液弃去 淋洗:水 600μL,甲醇 600μL,弃去 洗脱:3%甲酸乙腈溶液 600μL,使用 96 孔收集板将洗脱液分别收集。 将收集板放置于 96 位氮吹仪上,将温度设定为 45℃,开启氮气将洗脱液氮吹至近干, 并用 100μL 乙腈/水(7/3,v/v)将样品重溶,进样检测。 五 仪器检测条件 5.1 HPLC 条件 色谱柱:Venusil ASB C18(2.1*50mm,3μm,150Å) 流速:200μL/min 柱温:30℃ 进样量:5μL
流动相:乙腈/水(75/25,v/v) 5.2 质谱条件 扫描模式:电喷雾电离负模式 采集模式:多反应监测(MRM)
六 结果
实验所用的粪便样品中含有约 3mg/kg 的花生四烯酸,计算加标回收率时需要扣除样品 中目标物的含量。
七 结论 本实验采用Cleanert MAS-M 96孔板对粪便样品中的花生四烯酸进行批量样品高通量前 处理。实验结果表明 Cleanert MAS-M 能够有效除去干扰物,并能够对花生四烯酸进行定量 萃取,回收率达到 88.9%,可以满足日常对批量生物样品分析的需求。
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