【飞诺美色谱】血浆中司美格鲁肽与替尔泊肽的测定

艾杰尔飞诺美

2024/09/09 14:05

概述

胰高血糖素样肽-1（GLP-1）激动剂被认为是未来几年最具市场增长潜力的一类糖尿病药物。司美格鲁（Semaglutide，又称索马鲁肽）和替尔泊肽（Tirzepatide，又称替西帕肽），作为新一代的GLP- 1药物，不仅可以刺激体内胰岛素的释放，有效地控制血糖水平，同时可以抑制胃肠蠕动，增加饱腹感，抑制食欲。它们在降糖、减重、心血管收益、安全性等方面均展现出良好的临床优势。本文建立了一种血浆中索马鲁肽和替尔泊肽药物的测定方法，为药物安全性和治疗效果的进一步研究提供科学依据。

关键词

多肽；Peptide-3-MW；Aeris peptide XB-C18； LC-MS/MS

化合物信息

实验部分

3.1仪器、试剂与材料

3.1.1主要仪器设备

液相色谱串联质谱仪(AB SCIEX Triple QuadTM6500)，配有电喷雾离子源(ESI)； 96孔正压装置(Agela Cleanert M96)；

3.1.2试剂材料

96孔板：Peptide-3-MW （5mg/1mL/Well, 2ea/pk）

屈臣氏蒸馏水，甲醇、甲酸、乙醇均为色谱级。

3.1.3样品基质

EDTA抗凝大牛血浆

3.2样品前处理方法

预处理：200 µL血浆，加入400 µL甲醇蛋白沉淀，15000g/5min 离心取500µL上清，再加入 400 µL水稀释，涡旋混匀，待净化；

活化：96孔板依次使用 200 µL甲醇、200 µL水活化；

上样：加载预处理后的血浆至活化后微孔板；

淋洗：使用500 µL水淋洗微孔板；

洗脱：用50 µL洗脱液（5%甲酸乙醇：水=4:1）洗脱2次，涡旋混合，待检测

3.3仪器检测条件

3.3.1色谱条件

色谱柱： Aeris peptide XB-C18（2.1×100 mm, 2.6 μm）；P/N: 00D-4505-AN

流动相A相：0.1%甲酸水溶液；

流动相B相：0.1%甲酸乙腈溶液；

流速：0.3 mL/min；

柱温：40 ℃；

进样量：5 μL；

梯度程序见表2：

3.3.2质谱条件

离子源类型：电喷雾离子源（ESI+）

扫描方式：多反应监测正负离子模式（MRM）

喷雾针电压：5500 V

离子源温度：450 ℃

加热器（GS1）：60 psi

辅助加热气（GS2）：60 psi

气帘气（CUR）：30 psi

碰撞气（CAD）：High

为获得较好的稳定和灵敏度，各化合物监测离子对的去簇电压（DP）和碰撞电压（CE），目标化合物定量离子对以及内标监测离子对等参数均需经过系统优化。本案例参数仅供参考不具备法律效力。

3.4结果与讨论

3.4.1 灵敏度和线性

如图1所示，该方法两种化合物的线性范围为 0.5ng/mL~200ng/mL，线性良好，R 2均大于0.995。化合物定量下限均可做到0.5ng/mL血浆浓度。图2、 3中可以看出两个化合物峰形良好，且残留非常小（图4），进曲线最高点200ng/mL后进空白溶液，索马鲁肽残留在千分之一，替尔泊肽残留在万分之五以内。

3.4.2 方法回收率和基质效应

分别对血浆浓度10ng/mL和100ng/mL进行了加标回收考察和基质效应情况评估，结果见下表4，两个化合物绝对回收均在80%以上，但表现出一定的基质抑制效应。

3.5实验谱图

结论

本实验建立了血浆中索马鲁肽（Semaglutide）和替尔泊肽（Tirzepatide）的定量方法，LQD可以做到 0.5ng/mL，线性范围0.5ng/mL~200ng/mL，外标法回收率均在80%以上。

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