方案摘要
方案下载| 应用领域 | 食品/农产品 |
| 检测样本 | 生食水产品 |
| 检测项目 | |
| 参考标准 | GB/T 19857-2005 水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量测定 |
孔雀石绿和结晶紫是人工合成的三苯甲烷类化合物，都属于工业染料，因其价格低廉且具有杀菌和驱虫的效果，曾广泛应用于水产养殖中，但孔雀石绿和结晶紫及其代谢物的生物毒性较强，在生物体内长期累积会对人体造成危害。 逗点生物结合自身产品优势，建立了固相萃取-高效液相色谱-质谱联用法测定虾肉中的孔雀石绿和结晶紫含量的方法，样品在提取后，经中性氧化铝柱固相萃取柱净化后，采用高效液相色谱-串联质谱仪测定。经验证，加标回收率范围90-110%，RSD值小于5%，满足要求。
虾肉中孔雀石绿和结晶紫残留量液相色谱-串联质谱法测定
（Copure® ALN中性氧化铝柱）
《GB/T 19857-2005 水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量测定》
一、背景介绍
孔雀石绿和结晶紫是人工合成的三苯甲烷类化合物，都属于工业染料，因其价格低廉且具有杀菌和驱虫的效果，曾广泛应用于水产养殖中，但孔雀石绿和结晶紫及其代谢物的生物毒性较强，在生物体内长期累积会对人体造成危害。
逗点生物结合自身产品优势，建立了固相萃取-高效液相色谱-质谱联用法测定虾肉中的孔雀石绿和结晶紫含量的方法，样品在提取后，经中性氧化铝柱固相萃取柱净化后，采用高效液相色谱-串联质谱仪测定。经验证，加标回收率范围90-110%，RSD值小于5%，满足要求。
2、 仪器条件
2.1 色谱条件
仪器：UPLC-MS/MS（Thermo Fisher TSQ Endura）
色谱柱：Commasil® Coreshell C18 (2.1 mm×100 mm, 1.7 μm)
流动相：A-水（0.1%甲酸） B-乙腈（0.1%甲酸）
洗脱方式：梯度洗脱，见表1
表1 流动相梯度洗脱条件
时间（min） | 流速（mL/min） | %B | Curve |
0.0 | 0.3 | 5 | 5 |
1.5 | 0.3 | 60 | 5 |
3.0 | 0.3 | 100 | 5 |
10.0 | 0.3 | 100 | 5 |
10.5 | 0.3 | 5 | 5 |
15 | 0.3 | 5 | 5 |
流速：0.3 mL/ min
柱温：30 ℃
进样量：10 μL
2.2 质谱条件
离子源：HESI 电喷雾电压：3500 V
鞘气压力：15 arb 辅气压力：1 arb
离子传输管：360 ℃ 辅气温度：380 ℃
表2 孔雀石绿和结晶紫离子对参数（*为定量离子）
Compound | Precursor（m/z） | Product（m/z） | Collision Energy（V） | RF Lens（V） | RT/min |
孔雀石绿 | 329 | 208 | 33 | 168 | 4.27 |
313* | 34 | ||||
隐性孔雀石绿 | 331 | 239* | 28 | 151 | 4.27 |
316 | 31 | ||||
孔雀石绿-d5 | 334 | 318* | 37 | 157 | 4.25 |
隐性孔雀石绿-d6 | 337 | 240 | 29.8 | 139 | 4.25 |
322.2* | 19.9 | ||||
结晶紫 | 372 | 251 | 41 | 134 | 4.21 |
356* | 43 | ||||
隐性结晶紫 | 374 | 238 | 36 | 157 | 4.22 |
358* | 35 |
三、试验步骤
3.1样本提取
称取5.00 g已捣碎的虾肉于50 mL离心管中，加入400 μL混合内标溶液（孔雀石绿-d5和隐性孔雀石绿-d6）。加入11 mL乙腈，超声波震荡提取2.0 min，2500 rpm涡旋震荡提取5.0 min，8000 r/min离心5.0 min，上清液转移至另一空50 mL离心管。重复提取一次，合并上清液，用乙腈定容至25 mL，摇匀待净化。
3.2样本净化
取Copure® 中性氧化铝柱（货号：COALN31000），加入5.0 mL乙腈活化。加入上述样品待净化液5.00 mL后再加入4.0 mL乙腈进行洗涤，合并收集全部过滤液，45℃水浴氮吹至近干。加入1.0 mL乙腈，超声震荡5.0 min，加入1.0 mL 5 mmol/L乙酸铵，超声波震荡1.0 min，过0.22 μm滤膜后上机测试。
3.3基质空白试验
称取空白试样，按上述步骤进行实验。
四、实验结果
虾肉基质中结晶紫、隐形结晶紫、孔雀石绿及其内标、隐形孔雀石绿及其内标的定量离子对提取色谱图如下所示。
虾肉中孔雀石绿、隐性孔雀石绿、结晶紫、隐性结晶紫加标实验回收率结果详见表3，回收率90-110%之间，偏差值均小于5%，回收率和稳定性满足测试要求。
表3 虾肉中孔雀石绿、隐性孔雀石绿、结晶紫、隐性结晶紫加标回收率结果
基质 | 项目 | 加标浓度（μg/kg） | 平均回收率(%)（n=3） | RSD(%)（n=3） |
虾肉 | 孔雀石绿 | 8.00 | 98.4 | 4.74 |
隐性孔雀石绿 | 8.00 | 94.5 | 3.06 | |
结晶紫 | 8.00 | 93.1 | 2.97 | |
隐性结晶紫 | 8.00 | 106 | 3.29 |
五、订购信息
货号 | 描述 | 包装 |
COALN31000 | Copure® 中性氧化铝柱，1g/3mL | 50支/盒 |
SDC-3000-D | biocomma® 多管涡旋混匀仪 | 1台/箱 |
BN24 | 24孔智能氮吹仪 | 1台/箱 |
SF130-22-NL | 针式过滤器，尼龙，直径13mm，孔径0.22μm，有机系 | 100个/盒 |
SC2-1 | 2 mL蓝色聚丙烯盖，白色PTFE/红色硅胶垫，9-425 | 100个/盒 |
V2-AL | 2 mL螺纹棕色样品瓶，带书写处11.6*32 mm，9-425 | 100个/盒 |
文献贡献者
Copure® PWAX | GB 5009.35-2023糖果和水果罐头中11种合成着色剂的测定
Copure® | 鸭肉中利福平、阿奇霉素残留的测定（液相色谱-串联质谱法）
Copure® HLB 食品中香兰素、乙基香兰素的测定
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