【应用分享】强力甜味剂-果汁和酸奶中纽甜的检测

纳谱分析技术(苏州)有限公司

2020/06/04 14:22

纽甜是一种新型功能性甜味剂，系阿斯巴甜的衍生物，甜度约为蔗糖的 8 000 倍～13 000 倍，蔗糖的40 倍以上，是一种强力甜味剂，甜味纯正，甜味协和，稳定性好，价格低廉，纽甜作为甜味调节剂广泛应用于乳饮料、糕点、调味品等各类食品中。研究表明，过量食用甜味剂会对人体健康造成危害，因此国家食品添加剂使用标准也对其作出了严格规定。

绝大多数食品基质复杂，前处理过程去除不充分，不但会影响色谱分离度，而且极易堵塞色谱柱，缩短色谱柱的寿命。因此国标方法GB 5009.247-2016食品中纽甜的测定规定了固相萃取-高效液相色谱法测定食品中的纽甜含量。

适用范围：

本方法采用固相萃取-高效液相色谱法（参考GB 5009.247-2016），并加以优化，适用于食品中纽甜含量的测定。

实验步骤

试剂准备

混合提取液：分别吸取0.8 mL的甲酸和2.5 mL的三乙胺，加水定容至1000 mL的容量瓶中，pH约4.5；
0.1%磷酸水溶液：吸取1 mL的磷酸，加水定容到1000 mL的容量瓶中。

液相色谱仪器条件

Column: ChromCore C18, 5 μm
Dimension: 4.6 × 250 mm
Mobile Phase:
A)ACN
B)999/1（v/v）H2O/H3PO4
Gradient:
t（min）
A
B
0
32
68
13
32
68
14
90
10
17
90
10
17.5
32
68
21
32
68
Flow Rate: 1.0 mL/min
Temperature: 30 ℃
Injection: 20 μL
Detection: UV 218 nm

果汁提取

称取10 mL试样于50 mL容量瓶中，加入30 mL混合提取液，超声15 min后再用混合提取液定容至刻度线，若溶液浑浊，以不低于4000 r/min离心10 min后，过滤后待净化。

果汁净化

SPE柱：SelectCore C18固相萃取柱（500 mg/6mL）
活化：依次用5 mL的甲醇和水活化；
上样：加入10 mL上清液；
淋洗：用5 mL的混合提取溶液进行淋洗；
洗脱：用5 mL甲醇溶液进行洗脱，收集洗脱液，在40 ℃下用氮气吹干，用2 mL 混合提取溶液复溶后，上机检测。

检测谱图

图1：5 ug/mL纽甜对照品溶液色谱图

图2：果汁空白基质色谱图

图3：添加水平1 mg/kg的果汁基质色谱图

酸奶提取

称取10 g试样于50 mL容量瓶中，加入30 mL混合提取液，涡旋震荡10 min，超声30 min后再用混合提取液定容至刻度线，若溶液浑浊，以不低于4000 r/min离心10 min后，过滤后待净化。

酸奶净化

SPE柱：SelectCore HLB固相萃取柱（150 mg/6mL）
活化：依次用5 mL的甲醇和水活化；
上样：加入10 mL上清液；
淋洗：用5 mL的混合提取溶液进行淋洗；
洗脱：用5 mL甲醇溶液进行洗脱，收集洗脱液，在40 ℃ 下用氮气吹干，用2 mL 混合提取溶液复溶后，上机检测。

检测谱图

图4：酸奶空白基质色谱图

图5：添加水平1 mg/kg的酸奶基质色谱图

样品加标回收率实验结果

样品名称	化合物	加标量（mg/kg）	平均回收率%
果汁	纽甜	1	90.79%
酸奶	纽甜	1	92.64%

实验讨论

a. 我们在做酸奶基质样品的时候，发现过C18小柱特别慢，考虑到都是疏水反相保留模式，因此我们改用HLB小柱，不仅回收率良好，而且滴速要比C18小柱快3~5倍，因此，推荐复杂基质样品纽甜测定的时候，选择我们公司单分散HLB固相萃取柱。

b. 国标规定液相色谱的流动相应选择辛烷磺酸钠的离子对试剂，我们在实际分析过程中发现离子对试剂的确增加了纽甜的保留，但是时间久了柱压容易升高，而且每天配制辛烷磺酸钠的浓度微小差异导致保留时间有差异，因此我们降低了有机相比例，并且改成0.1%磷酸水溶液，纽甜的保留时间也和之前用离子对试剂的保留时间一样，峰型良好，分离度符合要求，日内和日间的保留时间和峰面积的精密度和重复性RSD也在1%以内，特别是柱压较平稳，没有明显升高。因此我们将流动相的水相改成0.1%磷酸水溶液。

实验结论

由实验数据可得，果汁样品的前处理选择纳谱分析SelectCore C18 500mg/6mL固相萃取柱，酸奶样品的前处理选择纳谱分析SelectCore HLB 150mg/6mL固相萃取柱。分析柱选择纳谱分析ChromCore C18 5μm，4.6×250mm，峰型良好，分离度符合要求，符合检测标准。

详细产品信息

产品描述	货号
ChromCore C18 5μm, 4.6×250mm	A001-050018-04625S
SelectCore C18 500mg/6mL; 30/pkg	C18050-060500-1
SelectCore HLB 150mg/6mL; 30/pkg	HLB060-060150-1

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t（min）	A	B
0	32	68
13	32	68
14	90	10
17	90	10
17.5	32	68
21	32	68