方案摘要
方案下载应用领域 | 制药/生物制药 |
检测样本 | 治疗类生物药品 |
检测项目 | 含量测定>色谱法 |
参考标准 | . |
离子交换是温和条件下分离蛋白质混合物的一个非常有用的技术,最常见的是应用增 加盐浓度的缓梯度溶液进行洗脱。pH 梯度洗脱使用频率较低(除专属应用外,例如色谱聚 焦),并且需要复杂的缓冲液体系。尽管如此,如今的四元液相色谱系统完全能够利用常 规缓冲盐实现 pH 梯度洗脱。本篇应用报告中,我们展示了 pH 梯度洗脱在分离单克隆抗体带电异构体时的优势。本文的工作使用了 Agilent Bio mAb 色谱柱、安捷伦 1260 Infinity生物惰性四元液相色谱系统和安捷伦缓冲液顾问软件。
蛋白质是复杂的生物分子,含有无数的带有酸性和碱性侧链官能 团的氨基酸。这些官能团的范围从羧酸类(天冬氨酸和谷氨酸) 和酚类(酪氨酸)到胺类(赖氨酸和组氨酸)和胍类(精氨酸), 还包括其他中性或疏水性残基。在给定的 pH 条件下,蛋白质将带 有一定电荷(除了等电点处净电荷为 0 外),并且可以与带有相反 电荷的吸附剂发生作用。因此,碱性蛋白质将在阳离子交换色谱 柱上获得保留。 常规的离子交换方法使用增加离子强度(盐浓度)的方法进行洗 脱,从而盐离子与蛋白质和吸附剂进行竞争吸附并最终使蛋白质 分子从色谱柱上洗脱下来。然而,pH 梯度也可用于该类洗脱。对于 阳离子交换色谱,增加 pH 使得蛋白质变成中性或带上负电荷,从 而可以从色谱柱上洗脱下来。 随着更多复杂的蛋白质被用于研究和分析,这种方法开始受到更 多的重视,复杂蛋白质如单克隆抗体,生物制备过程细微的变化 即可能导致带电变体的产生。这些细微差异包括 C 端赖氨酸的丢失、 脱酰胺基作用和唾液酸化作用(使分子酸性更强)、或者形成琥珀 酰亚胺和羧酸侧链的酰胺化(使分子碱性更强)等,如图 1 所示。 本文中我们展示了用于分离单克隆抗体带电变体的 pH 梯度方法, 该分离用传统的缓冲盐梯度洗脱时难以达到分离的效果。
用高分离度快速液相色谱-UV 和 MS 检测建立可靠的中药制剂质控方法 (PDF)
Agilent 1200 系列液相色谱方法开发解决方案在分析倍他乐克片降解产物中的应用 (PDF)
采用代谢物鉴定软件根据 Q-TOF MS 和 MS/MS 数据进行代谢 物结构解析
相关产品
二手翻新agilent安捷伦1200液相色谱仪
二手翻新安捷伦1260液相色谱仪
二手翻新安捷伦6890气相色谱仪
二手翻新agilent安捷伦7683自动进样器(带塔和盘)
二手翻新agilent安捷伦7890A气相色谱仪
二手翻新agilent安捷伦7890B气相色谱仪
二手翻新agilent安捷伦1329自动进样器
故障仪器寄修
二手翻新agilent安捷伦5973质谱仪
二手翻新agilent安捷伦5975质谱仪
二手翻新agilent安捷伦7697顶空进样器
二手翻新waters沃特世2695液相色谱仪
二手翻新agilent安捷伦7694顶空进样器
二手翻新agilent安捷伦G1888顶空进样器
二手翻新agilent翻新液相色谱HTS/HTC进样器
关注
拨打电话
留言咨询