大鼠肌腱成纤维细胞

原代培养原理和应用：

一、细胞原代培养是通过特殊分离方法从胚胎、组织器官以及外周血中分离获得单细胞，置于合适的培养基中培养，在无菌、适当温度和一定条件下，使细胞生存、生长和繁殖的过程。原代培养的“代”并非细胞的代数，是指细胞培养的次数，从体内取出组织接种培养到第一次传代的阶段，都属原代培养，一般持续1-4周。常见的原代培养过程如图1所示。

二、原代培养细胞直接来源于活体组织，体外培养也尽量模拟体内环境，使得分离得到的细胞接近生物体内的生活状态，可作为研究生物体细胞的生产、代谢、繁殖、凋亡提供有力手段，亦可用于各种药理作用、药物开发研究和临床实践。

三、原代细胞的质量取决于多个因素：取材、培养条件的优化、无菌操作，特别是组织分离技术等。对于大多数研究者而言，想要获得高质量的原代培养细胞仍然比较困难。尽管原代培养技术已较普遍，但是有时仍会得到一些难以解释的结果。拥有行政许可的洁净级实验动物中心，已构建细胞培养和实验平台，可分离培养数百种人、大小鼠和大型动物的原代细胞，并在此基础上提供相关细胞实验服务，包括细胞培养、细胞转染以及细胞药物刺激后各种增殖、侵染和凋亡实验。

大鼠肌腱成纤维细胞

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液 0.25%胰蛋白酶

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

方法简介：

公司实验室分离的大鼠肌腱成纤维细胞采用混合胶原酶消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测：

公司实验室分离的大鼠肌腱成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

细胞简介：

大鼠肌腱成纤维细胞分离自肌腱组织；肌腱是肌腹两端的索状或膜状致密结缔组织，便于肌肉附着和固定。一块肌肉的肌腱分附在两块或两块以上的不同骨上，是由于肌腱的牵引作用才能使肌肉的收缩带动不同骨的运动。每一块骨骼肌都分成肌腹和肌腱两部分，肌腹由肌纤维构成，色红质软，有收缩能力，肌腱由致密结缔组织构成，色乳白较硬，没有收缩能力。肌腱把骨骼肌附着于骨骼。长肌的肌腱多呈圆索状，阔肌的肌腱阔而薄，呈膜状，又叫腱膜。此处的肌腹即为通常所说的红肌，而肌腱即为白肌，分别控制肌肉的力量、爆发力和耐力。成纤维细胞是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来；成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的肺成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。

贴壁细胞传代操作步骤：

用移液管或者巴氏吸管吸取培养液；

使用不含钙镁离子的平衡盐溶液（PBS）冲洗细胞1-2次；

弃PBS，加入胰蛋白酶-EDTA消化液（消化液浓度根据各细胞不同有调整），轻轻摇晃培养瓶，使胰酶与细胞表面充分接触，37 ℃孵育2-3 min，加入含血清完全培养基终止消化。

将细胞悬液移入离心管中，800 rpm-1000rpm离心5min，弃上清，加入预热的完全培养基重悬细胞，轻轻吸打混匀，吹打过程中尽量不要出现气泡。

细胞计数，根据细胞量选择合适的传代比例，最后转移置37 ℃细胞培养箱中进行培养。

 悬浮细胞传代操作步骤：

悬浮细胞由于本身在生长培养基中悬浮，无需通过酶的作用使其从培养容器表面脱离，整个过程较为迅速，对细胞损伤较小。悬浮细胞传代，通常有两种方法，直接传代法和离心传代法。

（1）直接传代法

①　悬浮细胞长满至80%-90%左右（细胞悬液变黄，最大细胞密度随细胞系不同而有所差异），即可传代；

②　用吸管吸弃细胞悬液1/2～2/3；

③　加入适量的新鲜培养基，继续培养。

（2）离心传代法

①　将细胞悬液转移到离心管内；

②　800 rpm-1000rpm离心5min，弃上清；

③　使用新鲜的培养基重悬细胞；

④　吸管吸取适量细胞悬液，装入新的培养瓶，再加入适量的新鲜培养基，继续培养。

公司正在出售的产品：

Fmoc-Tyr(HPO3Bzl)-OH  191348-16-0  C31H28NO8P

Boc-D-Thr-OH  55674-67-4  C9H17NO5

Fmoc-Prolinol  148625-77-8  C20H21NO3

Fmoc-Ser-OH  73724-45-5  C18H17NO5

Boc-Hyp-OH  13726-69-7  C10H17NO5

Fmoc-D-Thr-OH.H2O  1272755-74-4  C19H19NO5.H2O

Z-Lys-OH  2212-75-1  C14H20N2O4

Fmoc-Homo-Tyrosine.DCHA  198560-10-0  C37H46N2O5

H-Asp-OtBu  4125-93-3  C8H15NO4

Boc-D-2-Pal-OH  98266-32-1  C13H18N2O4

H-D-Asp(OtBu)-OH  64960-75-4  C8H15NO4

Z-Glu(OtBu)-OBzl  3967-18-8  C24H29NO6

Boc-His(Tos)-ol  1169760-85-3  C18H25N3O5S

Z-D-Glu-OBzl  65706-99-2  C20H21NO6

Fmoc-1-Nal-OH  96402-49-2  C28H23NO4

小鼠组蛋白H3(H3)ELISA试剂盒 ，英文名： H3 ELISA Kit

山羊坏死因子α(TNF-α)ELISA检测试剂盒GoatTumornecrosisfactorα,TNF-αELISAKIT 96T/48T

犬叶酸(FA)免疫试剂盒 Canine Folic acid,FA ELISA Kit

英文名称Mouse17-KSELISAKIT小鼠17-同皮质类固醇(17-KS)规格：96T/48T

产气荚膜梭菌肠毒素(Closidiumperfringenscpe)鉴定16SrDNAPCR扩增检测试剂盒20次

RatFreeTestoterone,F-TESTOELISA试剂盒大鼠游离睾同(F-TESTO)ELISA试剂盒规格：96T/48T

大鼠肌腱成纤维细胞小鼠β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)ELISA试剂盒 ，英文名： Aβ1-42 ELISA Kit

大鼠巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA检测试剂盒RatMacrophageColony-StimulatingFactor,M-CSFELISAkit 96T/48T

人N端前脑素(-proBNP)免疫试剂盒 Human N-terminal pro-brain naiuretic peptide,-proBNP ELISA KIT

英文名称MouseAT-IIIELISAKit小鼠抗凝血酶(AT-III)规格：96T/48T

变性裂解液含有SDS

rabbitansformingGrowthfactorβ1,TGF-β1ELISA试剂盒兔子转化生长因子β1(TGF-β1)ELISA试剂盒规格：96T/48T

植物维生素D2(VD2)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

Human ai liver cell membrane aibody (LMA) ELISA Kit 人抗肝细胞膜抗体(LMA)ELISA试剂盒

PorcineSomatostatin,SSELISAKit 猪生长抑素(SS)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforAFP(MouseAlpha-fetoprotein)ELISAKit小鼠甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白规格：48T/96T

血液纤维蛋白溶酶原激活剂抑制物(PAI)活性化学发光法定量检测试剂盒20次

Mousethrombin-aithrombincomplex,TATELISAKit小鼠凝血酶抗凝血酶复合物(TAT)ELISA试剂盒规格：96T/48T