大鼠脑微血管内皮细胞

原代培养原理和应用：

一、细胞原代培养是通过特殊分离方法从胚胎、组织器官以及外周血中分离获得单细胞，置于合适的培养基中培养，在无菌、适当温度和一定条件下，使细胞生存、生长和繁殖的过程。原代培养的“代”并非细胞的代数，是指细胞培养的次数，从体内取出组织接种培养到第一次传代的阶段，都属原代培养，一般持续1-4周。常见的原代培养过程如图1所示。

二、原代培养细胞直接来源于活体组织，体外培养也尽量模拟体内环境，使得分离得到的细胞接近生物体内的生活状态，可作为研究生物体细胞的生产、代谢、繁殖、凋亡提供有力手段，亦可用于各种药理作用、药物开发研究和临床实践。

三、原代细胞的质量取决于多个因素：取材、培养条件的优化、无菌操作，特别是组织分离技术等。对于大多数研究者而言，想要获得高质量的原代培养细胞仍然比较困难。尽管原代培养技术已较普遍，但是有时仍会得到一些难以解释的结果。拥有行政许可的洁净级实验动物中心，已构建细胞培养和实验平台，可分离培养数百种人、大小鼠和大型动物的原代细胞，并在此基础上提供相关细胞实验服务，包括细胞培养、细胞转染以及细胞药物刺激后各种增殖、侵染和凋亡实验。

大鼠脑微血管内皮细胞

培养信息：

包被条件 PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 内皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%胰蛋白酶

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

方法简介：

公司实验室分离的大鼠脑微血管内皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶混合消化法结合密度梯度离心法、最后通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测：

公司实验室分离的大鼠脑微血管内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

细胞简介：

大鼠脑微血管内皮细胞分离自脑组织；脑微血管内皮细胞是血脑屏障的主要组成成分，它是组成脑微血管腔面单层扁平上皮样细胞，能够限制可溶性物质和细胞等从血液进入大脑，大脑微血管内皮细胞与外周内皮细胞相比具有一些相同特性。它所产生和分泌的生物活性物质对维持血管张力、调节血压、抗血栓形成等有重要作用，在脑血管疾病的发病机制中有重要病理生理学意义。与外周内皮细胞相同，大脑微血管内皮细胞表面表达细胞粘附分子，调控白细胞进入大脑。由于微血管内皮细胞的器官特异性，内皮细胞通常取源于疾病研究的相关组织。其主要特征如下：①脑微血管内皮细胞存在许多细胞间紧密连接，产生很高的跨内皮阻抗，延迟细胞旁的通量；②脑微血管内皮细胞缺乏内皮细胞的窗孔结构，其液相物质胞饮水平较低；③脑微血管内皮细胞具有不对称定位酶和载体介导转运系统，从而产生“两极分化”的表现型。

贴壁细胞传代操作步骤：

用移液管或者巴氏吸管吸取培养液；

使用不含钙镁离子的平衡盐溶液（PBS）冲洗细胞1-2次；

弃PBS，加入胰蛋白酶-EDTA消化液（消化液浓度根据各细胞不同有调整），轻轻摇晃培养瓶，使胰酶与细胞表面充分接触，37 ℃孵育2-3 min，加入含血清完全培养基终止消化。

将细胞悬液移入离心管中，800 rpm-1000rpm离心5min，弃上清，加入预热的完全培养基重悬细胞，轻轻吸打混匀，吹打过程中尽量不要出现气泡。

细胞计数，根据细胞量选择合适的传代比例，最后转移置37 ℃细胞培养箱中进行培养。

 悬浮细胞传代操作步骤：

悬浮细胞由于本身在生长培养基中悬浮，无需通过酶的作用使其从培养容器表面脱离，整个过程较为迅速，对细胞损伤较小。悬浮细胞传代，通常有两种方法，直接传代法和离心传代法。

（1）直接传代法

①　悬浮细胞长满至80%-90%左右（细胞悬液变黄，最大细胞密度随细胞系不同而有所差异），即可传代；

②　用吸管吸弃细胞悬液1/2～2/3；

③　加入适量的新鲜培养基，继续培养。

（2）离心传代法

①　将细胞悬液转移到离心管内；

②　800 rpm-1000rpm离心5min，弃上清；

③　使用新鲜的培养基重悬细胞；

④　吸管吸取适量细胞悬液，装入新的培养瓶，再加入适量的新鲜培养基，继续培养。

公司正在出售的产品：

Fmoc-N-Me-Asp(OtBu)-OH  152548-66-8  C24H27NO6

Z-D-Thr-OH  80384-27-6  C12H15NO5

Z-Phg-OH  53990-33-3  C16H15NO4

H-Trp(Boc)-OH  146645-63-8  C16H20N2O4

Boc-D-Phe(4-NH2)-OH  164332-89-2  C14H20N2O4

Rink Amide-MBHA Resin  431041-83-7  100-200:mesh,1%DVB

Boc-Leu-OH.H2O  13139-15-6  C11H21NO4.H2O

H-Sar-OtBu.HCl  5616-81-9  C7H15NO2.HCl

H-Phe(3-Cl)-OH  80126-51-8  C9H10ClNO2

Fmoc-Met(O2)-OH  163437-14-7  C20H21NO6S

H-2-Nal-OH.HCl  58438-03-2  C13H13NO2.HCl

Boc-Ala-OSu  3392-05-0  C12H18N2O6

Z-Trp-OMe  2717-76-2  C20H20N2O4

H-Gly-OH  56-40-6  C2H5NO2

Boc-ε-Acp-OH  6404-29-1  C11H21NO4

小鼠转录激活因子3(ATF3)ELISA试剂盒 ，英文名： ATF3 ELISA Kit

犬促卵泡素(FSH)ELISA检测试剂盒Caninefollicle-stimulatinghormone,FSHELISAKit 96T/48T

犬胸腺活化调节趋化因子(TARC/CCL17)免疫试剂盒 Canine thymus activation regulated chemokine,TARC/CCL17 ELISA Kit

英文名称HumanHLA-2ELISAKit人组织相容性抗原(HLA-2)规格：96T/48T

超强HRP酶联检测封闭溶液10毫升

RatGlucose-dependeinsulin-releasingpolypeptide,GIPELISA试剂盒大鼠葡萄糖依赖性胰岛素释放多肽(GIP)ELISA试剂盒规格：96T/48T

大鼠脑微血管内皮细胞小鼠β内啡肽(β-EP)ELISA试剂盒 ，英文名： β-EP ELISA Kit

大鼠基质金属蛋白酶8/中性粒细胞胶原酶(MMP-8)ELISA检测试剂盒Ratmaixmetalloproteinase8/Neuophilcollagenase,MMP-8ELISAkit 96T/48T

人P53抗体免疫试剂盒 Human P53 aibody ELISA Kit

英文名称MousesICAM-1ELISAKit小鼠可溶性细胞间粘附分子-1(sICAM-1)规格：96T/48T

胞核微型RNA(Pre-RNA)电泳法分离试剂盒20次

RabbitThrombinactivatablefibrinolysisinhibitor,TAFIELISA试剂盒兔纤溶抑制因子/凝血酶激活的纤溶抑制物(TAFI)ELISA试剂盒规格：96T/48T

猪C反应蛋白(CRP)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

Human ai compleme 1q aibody (C1q) ELISA Kit 人抗补体1q抗体(C1q)ELISA试剂盒

Porcinegrowthhormonereleasinghormone,GHRHELISAKit 猪促生长激素释放激素(GHRH)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforaGTELISAKit大鼠血管紧张素原规格：48T/96T

血液葡萄糖激酶(glucosekinase)比色法定量检测试剂盒20次

Mousei-iodothyronine,T3ELISAKit小鼠三甲状腺原氨酸(T3)ELISA试剂盒规格：96T/48T