人肾成纤维细胞

人肾成纤维细胞

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液 0.25%胰蛋白酶

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

方法简介：

公司实验室分离的人肾成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测：

公司实验室分离的人肾成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

细胞简介：

人肾成纤维细胞分离自肾组织；肾脏是机体的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除体内代谢产物及某些废物、毒物，同时经重吸收功能保留水份及其他有用物质，如葡萄糖、蛋白质、氨基酸、钠离子、钾离子、碳酸氢钠等，以调节水、电解质平衡及维护酸碱平衡。肾脏同时还有内分泌功能，生成肾素、促红细胞生成素、活性维生素D3、前列腺素、激肽等，又为机体部分内分泌激素的降解场所和肾外激素的靶器官。肾脏的这些功能，保证了机体内环境的稳定，使新陈代谢得以正常进行。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损以及骨创伤的修复有着十分重要的作用。肾成纤维细胞是肾脏结缔组织中最重要的细胞类型，在体外培养中，一般大致成梭形、多角形或不规则形等，为贴壁生长型细胞。刚分离的肾成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。其主要功能有：①组成过滤屏障内壁的重要部分；②在炎症和致血栓物质的刺激合成必要的生物活性分子；③受损后影响系膜细胞和上皮细胞，进而影响肾脏病变。

原代培养原理和应用：

一、细胞原代培养是通过特殊分离方法从胚胎、组织器官以及外周血中分离获得单细胞，置于合适的培养基中培养，在无菌、适当温度和一定条件下，使细胞生存、生长和繁殖的过程。原代培养的“代”并非细胞的代数，是指细胞培养的次数，从体内取出组织接种培养到第一次传代的阶段，都属原代培养，一般持续1-4周。常见的原代培养过程如图1所示。

二、原代培养细胞直接来源于活体组织，体外培养也尽量模拟体内环境，使得分离得到的细胞接近生物体内的生活状态，可作为研究生物体细胞的生产、代谢、繁殖、凋亡提供有力手段，亦可用于各种药理作用、药物开发研究和临床实践。

三、原代细胞的质量取决于多个因素：取材、培养条件的优化、无菌操作，特别是组织分离技术等。对于大多数研究者而言，想要获得高质量的原代培养细胞仍然比较困难。尽管原代培养技术已较普遍，但是有时仍会得到一些难以解释的结果。拥有行政许可的洁净级实验动物中心，已构建细胞培养和实验平台，可分离培养数百种人、大小鼠和大型动物的原代细胞，并在此基础上提供相关细胞实验服务，包括细胞培养、细胞转染以及细胞药物刺激后各种增殖、侵染和凋亡实验。
公司正在出售的产品：

Exendin-4 (1-8)  1802078-29-0  C35H51N11O13

Exendin-4 (3-39)  196109-31-6  C176H272N46O58S

FA-Ala-Arg-OH  76079-06-6  C16H23N5O5

FA-Ala-Lys-OH  76079-03-3  C16H23N3O5

FA-Ala-Phe-NH₂  29268-00-6  C19H21N3O4

Epiamastatin . HCl  100992-59-4  C21H38N4O8 · HCl

Epinecidin-1  1131706-77-8  C114H176N30O21S

Erythropoietin Mimetic Peptide Sequence 20  203397-62-0  C72H99N17O17S2

Ethyleneglycolmonooctylether  10020-43-6  C10H22O2

Ethyleneglycolmonopentylether  6196-58↶恰û

Endotoxin Substrate  68223-96-1  C25H40N8O7

Endotrophin (mouse)  1678414-54-4  C345H520N92O106S7

ent-[Amyloid β-Protein (20-16)]-β-Ala-D-Lys(ent-[Amyloid β-Protein (16-20)])  1426174-31-3  C79H119N15O13

ent-Amyloid β-Protein (1-42)  342896-25-7  C203H311N↶恰û

小鼠载脂蛋白A1(Apo A1)ELISA试剂盒 ，英文名： Apo A1 ELISA Kit

小鼠谷氨酸脱羧酶自身抗体(GAD-Ab)ELISA检测试剂盒Mouseglamicaciddecarboxylaseaoaibody,GAD-AbELISAKit 96T/48T

人金属硫蛋白(MT)免疫试剂盒 Human MT ELISA Kit

RatangiotensionⅡ,ANG-ⅡELISAKit大鼠血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA试剂盒规格：96T/48T

组蛋白H2A-K5乙酰化检测试剂盒10/20次等

MouseAlpha-fetoprotein,AFPELISA试剂盒小鼠甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)ELISA试剂盒规格：96T/48T

人肾成纤维细胞小鼠白介素2(IL-2)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

Rat chorionic gonadoopin beta (-CG beta) ELISA Kit 大鼠绒毛膜促性腺激素β(β-CG)ELISA试剂盒

HumanBone-specificAlkphaseB,ALP-BELISAKit 人骨特异性碱性0酸酶B(ALP-B)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanCarcinoembryonicFerritin,CEFELISA试剂盒人癌胚铁蛋白(CEF)ELISA试剂盒规格：96T/48T

重组腺病毒效价溶斑测定试剂盒20次

HumanSolubleClusterofdiffereiation40ligand，sCD40LELISAKit人可溶性CD40配体(sCD40L)ELISA试剂盒规格：96T/48T

猪纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

Human maix metalloproteinase 13 (MMP-13) ELISA Kit 人基质金属蛋白酶13(MMP-13)ELISA试剂盒

Rabbitmaixmetalloproteinase2/GelatinaseA,MMP-2ELISAKit 兔基质金属蛋白酶2/明胶酶A(MMP-2/GelatinaseA)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforai-DNaseB(Humanai-deoxyribonucleaseB)ELISAKit人抗DNA酶B抗体规格：48T/96T

血液α-L-岩藻糖苷酶(AFU)比色法定量检测试剂盒20次

PorcineHeatShockProtein70,HSP-70ELISAKit猪热休克蛋白70(HSP-70)ELISA试剂盒规格：96T/48T

贴壁细胞传代操作步骤：

用移液管或者巴氏吸管吸取培养液；

使用不含钙镁离子的平衡盐溶液（PBS）冲洗细胞1-2次；

弃PBS，加入胰蛋白酶-EDTA消化液（消化液浓度根据各细胞不同有调整），轻轻摇晃培养瓶，使胰酶与细胞表面充分接触，37 ℃孵育2-3 min，加入含血清完全培养基终止消化。

将细胞悬液移入离心管中，800 rpm-1000rpm离心5min，弃上清，加入预热的完全培养基重悬细胞，轻轻吸打混匀，吹打过程中尽量不要出现气泡。

细胞计数，根据细胞量选择合适的传代比例，最后转移置37 ℃细胞培养箱中进行培养。

 悬浮细胞传代操作步骤：

悬浮细胞由于本身在生长培养基中悬浮，无需通过酶的作用使其从培养容器表面脱离，整个过程较为迅速，对细胞损伤较小。悬浮细胞传代，通常有两种方法，直接传代法和离心传代法。

（1）直接传代法

①　悬浮细胞长满至80%-90%左右（细胞悬液变黄，最大细胞密度随细胞系不同而有所差异），即可传代；

②　用吸管吸弃细胞悬液1/2～2/3；

③　加入适量的新鲜培养基，继续培养。

（2）离心传代法

①　将细胞悬液转移到离心管内；

②　800 rpm-1000rpm离心5min，弃上清；

③　使用新鲜的培养基重悬细胞；

④　吸管吸取适量细胞悬液，装入新的培养瓶，再加入适量的新鲜培养基，继续培养。