人肾小球系膜细胞

原代培养原理和应用：

一、细胞原代培养是通过特殊分离方法从胚胎、组织器官以及外周血中分离获得单细胞，置于合适的培养基中培养，在无菌、适当温度和一定条件下，使细胞生存、生长和繁殖的过程。原代培养的“代”并非细胞的代数，是指细胞培养的次数，从体内取出组织接种培养到第一次传代的阶段，都属原代培养，一般持续1-4周。常见的原代培养过程如图1所示。

二、原代培养细胞直接来源于活体组织，体外培养也尽量模拟体内环境，使得分离得到的细胞接近生物体内的生活状态，可作为研究生物体细胞的生产、代谢、繁殖、凋亡提供有力手段，亦可用于各种药理作用、药物开发研究和临床实践。

三、原代细胞的质量取决于多个因素：取材、培养条件的优化、无菌操作，特别是组织分离技术等。对于大多数研究者而言，想要获得高质量的原代培养细胞仍然比较困难。尽管原代培养技术已较普遍，但是有时仍会得到一些难以解释的结果。拥有行政许可的洁净级实验动物中心，已构建细胞培养和实验平台，可分离培养数百种人、大小鼠和大型动物的原代细胞，并在此基础上提供相关细胞实验服务，包括细胞培养、细胞转染以及细胞药物刺激后各种增殖、侵染和凋亡实验。

人肾小球系膜细胞

培养信息：

包被条件 PLL（0.1mg/ml）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传3代左右

消化液 0.25%胰蛋白酶

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

方法简介：

公司实验室分离的人肾小球系膜细胞采用机械研磨法结合不同孔径不锈钢网筛过滤后使用胶原酶消化制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测：

公司实验室分离的人肾小球系膜细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

细胞简介：

人肾小球系膜细胞分离自肾小球组织；肾小球是肾元中的用于将血液过滤生成原尿的一团毛细血丛，被鲍氏囊所包裹，是尿液形成的重要构造。血液经由入球小动脉进入肾小球。肾小球内的微血管不像其他微血管，汇流入静脉，而是流入出球小动脉。在肾小球内，微血管受到高压，而加速了超滤作用（hyperfiltration）的进行。微血管中的血液经由超滤作用之后，形成滤液，渗入鲍氏囊内。肾小球与鲍氏囊合称为肾小体，肾小球的过滤速率便称为肾小球过滤率。肾小球系膜是位于肾小球毛细血管袢之间的一种特殊间充质，由系膜细胞和系膜基质组成。肾小球系膜细胞是肾小球内非常活跃的细胞，具有分泌细胞基质、产生细胞因子、吞噬和清除大分子物质及类似平滑肌细胞收缩的功能。肾小球系膜细胞增生和基质的过多产生是多种肾小球肾炎的主要病理表现。肾小球系膜细胞的培养是研究系膜扩张、瘢痕形成和肾小球硬化的理想方法。系膜细胞的主要作用可能有：①收缩作用，入球小动脉和出球动脉的收缩作用受系膜细胞的调节，以影响毛细血管袢的内压和滤过率；②支持作用，它填充于毛细血管袢之间，支持毛细血管的位置；③吞噬作用，能吞噬被阻留在基膜内的大分子物质和蛋白质；④分泌肾素，在肾缺血或免疫复合物沉积时，系膜细胞增生且分泌肾素。

贴壁细胞传代操作步骤：

用移液管或者巴氏吸管吸取培养液；

使用不含钙镁离子的平衡盐溶液（PBS）冲洗细胞1-2次；

弃PBS，加入胰蛋白酶-EDTA消化液（消化液浓度根据各细胞不同有调整），轻轻摇晃培养瓶，使胰酶与细胞表面充分接触，37 ℃孵育2-3 min，加入含血清完全培养基终止消化。

将细胞悬液移入离心管中，800 rpm-1000rpm离心5min，弃上清，加入预热的完全培养基重悬细胞，轻轻吸打混匀，吹打过程中尽量不要出现气泡。

细胞计数，根据细胞量选择合适的传代比例，最后转移置37 ℃细胞培养箱中进行培养。

 悬浮细胞传代操作步骤：

悬浮细胞由于本身在生长培养基中悬浮，无需通过酶的作用使其从培养容器表面脱离，整个过程较为迅速，对细胞损伤较小。悬浮细胞传代，通常有两种方法，直接传代法和离心传代法。

（1）直接传代法

①　悬浮细胞长满至80%-90%左右（细胞悬液变黄，最大细胞密度随细胞系不同而有所差异），即可传代；

②　用吸管吸弃细胞悬液1/2～2/3；

③　加入适量的新鲜培养基，继续培养。

（2）离心传代法

①　将细胞悬液转移到离心管内；

②　800 rpm-1000rpm离心5min，弃上清；

③　使用新鲜的培养基重悬细胞；

④　吸管吸取适量细胞悬液，装入新的培养瓶，再加入适量的新鲜培养基，继续培养。

公司正在出售的产品：

Fmoc-3,4-dichloro-D-Phe-OH  177966-58-4  C24H19Cl2NO4

Fmoc-3,5-dibromo-Tyr-OH  201484-26-6  C24H19Br2NO5

Fmoc-3,5-dinitro-Tyr-OH  195434-42-5  C24H19N3O9

Fmoc-3-iodo-Tyr-OH  134486-00-3  C24H20INO5

Fmoc-4-(7-hydroxycoumarin-4-yl)-Abu-OH  1187744-84-8  C28↶恰û

Fmoc-(Hmb)Gly-OH  148515-78-0  C25H23NO6

Fmoc-[D₂]Gly-OH  284665-11-8  C17H13D2NO4

Fmoc-[ring-D₅]Phe-OH  225918-67-2  C24H16D5NO4

Fmoc-2,4-dimethoxy-4’-(carboxymethyloxy)-benzhydrylamine  126828-35-1  C32H29NO7

Fmoc-3,4-dehydro-Pro-OH  135837-63-7  C20H17↶恰û

Fluorescein-6-carbonyl-Tyr-Val-Ala-DL-Asp(OMe)-fluoromethylketone  1926163-69-0  C45H50FN5O15

Fluorogenic Human CMV Protease Substrate  163265-38-1  C73H109N23O18S

Fmoc-(Dmb)Ala-OH  1425938-66-4  C27H27NO6

Fmoc-(Dmb)Gly-OH  166881-42-1  C26H25NO6

Fmoc-(Dm↶恰û

小鼠孕酮(Pg)ELISA试剂盒 ，英文名： Pg ELISA Kit

猴白介素6(IL-6)ELISA检测试剂盒MonkeyIerleukin6,IL-6ELISAKit 96T/48T

犬基质金属蛋白酶3(MMP-3)免疫试剂盒 Dog Maix metalloproteinase 3,MMP-3 ELISA kit

英文名称HumanVascularEndothelialcellGrowthFactorELISAKit人血管内皮细胞生长因子(VEGF)ELISAKit规格：96T/48T

化线粒体溶解试剂盒20次

RatIerferonα,IFN-αELISA试剂盒大鼠α干扰素(IFN-α)ELISA试剂盒规格：96T/48T

人肾小球系膜细胞小鼠白介素2(IL2)ELISA试剂盒 ，英文名： IL2 ELISA Kit

人多巴胺(DA)ELISA检测试剂盒humandopamine,DAELISAKIT 96T/48T

大鼠巨噬细胞炎症蛋白5(MIP-5)免疫试剂盒 Rat macrophage inflammatory protein 5,MIP-5 ELISA Kit

英文名称Ratleucocyteaigen-B27ELISAKit大鼠白细胞抗原B27(HLA-B27)规格：96T/48T

酒类乙醇比色法定量检测试剂盒20次

ELISAKitβ-HCG人绒毛膜促性腺激素β规格：48T/96T

猪血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

Human maix metalloproteinase 1 (MMP-1) ELISA Kit 人基质金属蛋白酶1(MMP-1)ELISA试剂盒

RabbitangiotensionⅡ,ANG-ⅡELISAKit 兔血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforai-HAV(Humanai-hepatitisAvirusIgMaibody)ELISAKit人抗甲型肝炎病毒IgM抗体规格：48T/96T

血液D-乳酸比色法定量检测试剂盒20次

PorcineHistamine,HISELISAKit猪组胺(HIS)ELISA试剂盒规格：96T/48T