乙肝病毒

p 　　2016年5月2日，河北科技大学副教授韩春雨课题组在Nature Biotechnology上发表了关于NgAgo基因编辑技术的论文，引发了科学界的强烈关注。然而，从一开始被认为是颠覆性的技术，到不久后大批科学家表示无法重复这一研究成果，现在，NgAgo是否具有“基因编辑”功能还是个大大的问号。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201707/insimg/a76bae8c-3d73-47f3-80d8-0eee2c4a4cfa.jpg" title=" 1.png" / /p p style=" text-align: center " 图片来源：Nature Biotechnology /p p 　　关于这一事件的最新动向还停留在今年5月。5月9日，Nature Biotechnology(NBT)发布了一则“编辑部关切”。文中称，NBT的编辑注意到了读者们对有关NgAgo论文重复性的担忧。此前NBT杂志也发布了韩国、德国、美国三个小组的研究结果(http://dx.doi.org/10.1038/nbt.3753)。他们试图重复原始论文中关键的Figure 4中的结果。然而，没有一个小组在任何位点或任何条件下观察到任何由NgAgo诱导的突变。此外，另一个不同研究小组也在Protein & amp Cell杂志上报道了相似的结果(doi:10.1007/s13238-016-0343-9)。 /p p 　　NBT编辑部称，他们已经与原始论文的作者们进行联系。作者们正在调查研究结果缺乏重复性的潜在原因，并已被通知NBT会发表这则声明。一旦相关调查完成，NBT将会更新最新的进展。 /p p 　　同月20日，央视CCTV13《新闻调查》栏目用43分钟的长视频对截止到当时的事件发展过程和最新进展进行了报道。之后的两个月，鲜有关于这一事件的最新报道。 /p p 　　 strong 最新成果：NgAgo可抑制乙肝病毒复制 /strong /p p 　　近日，小编注意到，一个中国研究团队发表了一项关于NgAgo的新成果。首先需要强调的是，该研究也未证实NgAgo的基因编辑功能。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201707/insimg/bbafb9e8-b2b1-4908-9f3b-c160e1c6b44f.jpg" title=" 2.png" / /p p style=" text-align: center " 图片来源：Antiviral Research /p p 　　具体来说，7月11日，发表在Antiviral Research杂志上题为“NgAgo-gDNA system efficiently suppresses hepatitis B virus replication through accelerating decay of pregenomic RNA”的论文中，来自山东大学等机构的研究人员证实，NgAgo-gDNA系统能够通过促进pgRNA(pregenomic RNA)的降解有效抑制乙肝病毒的复制。 /p p 　　该研究在结论中称，这一研究结果首次证明了NgAgo/gDNA在抑制乙肝病毒复制方面的潜力。研究发现，抑制效果明显与gDNA靶向区域(gDNA targeting region)有关。此外，尽管HBsAg(hepatitis B surface antigen，乙肝表面抗原)、HBeAg(hepatitis B e-antigen，乙型肝炎E抗原)和pgRNA的水平明显下降，但作者们未能检测到NgAgo的任何DNA编辑能力。最后，作者们证明，NgAgo/gDNA显著缩短了乙肝病毒pgRNA的半衰期。他们认为，这些结果为将NgAgo/gDNA系统用于控制病毒感染提供有趣的线索。 /p p 　　 strong 前情回顾：基因敲低、切割RNA，反正就不是基因编辑 /strong /p p br/ /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201707/insimg/f9d1f115-4be5-4e50-bb36-67cfea0da86b.jpg" title=" 3_副本.jpg" / /p p style=" text-align: center " 图片来源：Cell Research /p p 　　事实上，关于NgAgo的“非基因编辑”功能，去年Cell Research 杂志上的一篇论文也有报道。在这篇题为 NgAgo-based fabp11a gene knockdown causes eye developmental defects in zebrafish 的文章中，南通大学神经再生重点实验室副教授刘东团队观察到，NgAgo 确实可以改变斑马鱼的表型，但这并非是通过基因编辑实现的。团队通过实验得出结论，NgAgo 系统可以在不改变目标基因序列的情况下，对基因表达实现 knockdown(即下调其目标 mRNA 表达水平)，且这可能与 NgAgo 的基因剪切活性没有关系。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201707/insimg/c4f7edbf-20ab-4b59-a321-46f80c6d3b88.jpg" title=" 4.png" / /p p style=" text-align: center " 图片来源：BioRxiv /p p 　　此外，今年1月，在生命科学预印本网站BioRxiv上，来自韩国的一个研究小组发表的题为“DNA-dependent RNA cleavage by the Natronobacterium gregoryi Argonaute”的成果指出，NgAgo能作为一种DNA引导的核酸内切酶切割RNA，而不是DNA。这意味着NgAgo或许可以作为“RNA干扰”的一种工具发挥作用。 /p

p & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp 11月12日，北京生命科学研究所资深研究员、清华大学生物医学交叉研究院教授李文辉博士，凭借其在推动乙肝科研和治疗方面做出的杰出贡献，荣获全球乙肝研究和治疗领域最高奖——巴鲁克· 布隆伯格奖。这是迄今为止我国科学家首次获此殊荣。 /p p style=" margin-top: 10px " 　　巴鲁克· 布隆伯格奖是根据1976年诺贝尔医学或生理学奖得主巴鲁克· 布隆伯格博士的名字命名的，由位于美国宾夕法尼亚的乙肝基金会设立，旨在奖励对乙肝相关科研和治疗做出重要推动和显著贡献的个人，被誉为该领域的最高荣誉。该奖项在国际相关学术领域享有盛誉，此前，肝脏及器官移植开拓者、2012年拉斯克临床医学奖获得者托马斯· 斯塔茲尔博士，2020年诺贝尔医学或生理学奖的哈维· 阿尔特博士，以及美国肝病研究学会主席安娜· 洛克博士等，也曾获得该奖。 /p p style=" margin-top: 10px " 　　 strong 发现病毒受体，揭示乙肝感染奥秘 /strong /p p style=" margin-top: 10px " 　　李文辉2001年从协和医科大学获得博士学位之后，到美国哈佛医学院从事博士后研究，后担任讲师。2003年非典（SARS）爆发后，他和同事日夜奋战，在国际上第一个发现了SARS病毒的受体ACE2，在国际同行中引发轰动。2007年，李文辉回国加入北京生命科学研究所，开始聚焦乙肝和丁肝病毒的感染研究。经过5年的潜心攻关，他的团队终于发现了乙肝和丁肝病毒入侵人体细胞的共同受体——NTCP（牛磺胆酸钠共转运蛋白）。 /p p style=" margin-top: 10px " 　　乙肝和丁肝病毒必须先与肝脏细胞表面的受体分子结合，才能进入到宿主细胞内，实现对人体的感染。因此，找到病毒的受体，对于深入了解乙肝的感染机制、建立更好的体外和动物研究模型，以及研发出有效的新药，都至关重要。然而，寻找乙肝病毒的受体绝非易事。自巴鲁克· 布隆伯格在上世纪70年代发现乙肝病毒后，全球的科学家就前赴后继、寻找乙肝病毒感染人类肝脏的“金钥匙”。但是，40多年过去了，科学家们都一无所获。 /p p style=" margin-top: 10px " 　　经过艰苦卓绝的努力，李文辉团队终于在2012年11月找到了乙肝和丁肝病毒入侵人体细胞的共同受体——NTCP。同年11月，相关论文在学术期刊上发表后，立即在国际学术界引发轰动。肝病学界认为，该研究对乙肝基础和应用领域有重大和深远影响，将可能帮助乙肝治疗新药的发现而为乙肝病人造福。 /p p style=" margin-top: 10px " 　　 strong 乙肝受体工作“激发了实现慢乙肝治愈的雄心” /strong /p p style=" margin-top: 10px " 　　此次李文辉荣获巴鲁克· 布隆伯格奖，得到包括诺奖得主在内的多位国际同行的认可。 /p p style=" margin-top: 10px " 　　美国乙肝基金会主席、巴鲁克· 布隆伯格研究所共同创始人蒂莫· 布洛克博士认为：“（乙肝）领域高度认可和感谢李博士在乙肝受体研究上先驱性工作”，“李博士的工作位列领域内最为重要的工作之中”。 /p p style=" margin-top: 10px " 　　国际公认的抗乙肝和丙肝病毒药物研发领袖——内森尼尔· 布朗博士说：“李文辉博士是一个特别好的选择。就像蒂姆· 布朗克指出的，乙肝病毒的受体这么多年都非常难捕捉到，而了解乙肝病毒的入侵机制除了能对乙肝病理生理学提供更加精确的理解之外，还能帮助人们发现新的潜在的治疗方法”。 /p p style=" margin-top: 10px " 　　 strong 中国研发的乙肝新药曙光初现 /strong /p p style=" margin-top: 10px " 　　乙肝病毒受体的发现，打开了一扇新的大门。李文辉的研究成果发表后，国际知名的乙肝研究机构和制药公司，都在采用他创建的研发技术体系开展后续研究和药物开发。 /p p style=" margin-top: 10px " 　　李文辉自己也没有停止前进的脚步。他和自己的夫人、北京生命科学研究所生物制品中心主任隋建华合作，多年来一直在潜心研发治疗乙肝的新药和新疗法。辛勤的汗水浇灌出希望的蓓蕾：他们开发的第一个乙肝候选药物为国际首创，于去年进入临床试验，目前进展顺利；其余多个相关候选创新药物，有的正在进行临床前研究，有的已开始申报临床试验。 /p p style=" margin-top: 10px " 　　“获得巴鲁克· 布隆伯格奖我感到非常荣幸，这个奖应该和我的同事们一起分享。我和同事们会继续努力，争取在乙肝研究和药物研发上有新的突破。”得知获奖消息后，李文辉表示，很高兴受体发现上的工作能促进对乙肝感染的理解并催生新药的研发。 /p

目前全球有超过3.5亿慢性乙型病毒性肝炎患者，感染乙型肝炎病毒(HBV)是肝硬化和肝癌的主要发病原因。虽然已开发出有效的乙肝疫苗，但每年仍有近百万人死于乙肝和相关疾病，并伴随有同等数量的新增感染病例。早在40多年前，人类就发现了乙肝病毒，乙型肝炎病毒及其卫星病毒丁型肝炎病毒(HDV)必须通过结合细胞表面受体分子来实现对宿主细胞的感染。因此，如能找到该受体，一直是全世界研究此问题的科学家几十年孜孜研究，却仍未解决的问题。 　　日前，北京生命科学研究所李文辉研究员领导的科研团队通过不懈的努力，终于发现了这一受体分子，并揭秘了乙肝感染的关键过程，这将为乙肝及其相关疾病提供有效的治疗靶点，为肝病治疗带来新希望。相关研究成果发表在11月13日的eLife杂志上，题为“钠离子牛磺胆酸共转运多肽是乙型肝炎和丁型肝炎病毒功能性受体”。 　　为破解这一难题，李文辉博士及其团队从树鼩入手，开始了他们的探索之旅。树鼩是一种与灵长动物非常类似的小动物，也是除人类和黑猩猩以外，唯一能被乙肝病毒感染的物种。李文辉博士的团队首先绘制了一幅高质量的树鼩肝细胞基因表达图谱，为后续的研究奠定了坚实的基础。有了这个数据库，再结合先进的纯化技术和高分辨质谱分析手段，他们发现，肝脏胆汁酸转运体(NTCP，牛磺胆酸钠cotransporting多肽)会与乙肝病毒包膜L蛋白的关键受体结合域发生特异性相互作用。随后，在三种HBV/HDV易感型肝细胞中都进行了一系列基因敲除实验，证明NTCP的确是病毒受体。更重要的是，人肝癌细胞株HepG2细胞通常情况下不表达NTCP，也不能被HBV感染。但如果在该细胞株中外源性表达人或树鼩的 NTCP后，则细胞可以被HBV感染。他们还鉴定出NTCP上关键的病毒结合区域。比如猴子的NTCP通常不能结合乙肝病毒，但只要突变其NTCP上一段极小的区域，就能使之变成有效的HBV受体。 　　国际评审专家认为：“长期以来，人们一直在寻找HBV和HDV受体，NTCP的发现是该领域的一项巨大进步，对于病毒性肝炎的基础与临床研究都将产生深远的影响。”