星状病毒

星状病毒PCR检测试剂盒反应五要素： 参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+引物： 引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3’端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。⑤引物3’端的碱基，特别是zui末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。⑥引物中有或能加上合适的酶切位点，被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点，这对酶切分析或分子克隆很有好处。⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。产品特点：星状病毒PCR检测试剂盒高特异性：与其他病毒无交叉反应，无非特异性扩增；高灵敏度：检测灵敏度可达10~100拷贝；操作简便：该系列所有试剂均采用相同的体系和条件，可同时进行多个检测；高通量：多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。

p style=" text-align: justify text-indent: 2em " 有疫情一线的医生反映，一些患者核酸检测结果为阴性，但CT影像却显示为新型冠状病毒肺炎，病情也在不断发展。 /p p style=" text-align: justify text-indent: 2em " 有专家表示：“当前，用核酸检测新冠肺炎敏感性即阳性率只有30％—50％，假阴性带来的漏检是个大问题。” strong 那为什么会出现核酸检测假阴性的情况呢？ /strong /p p style=" text-align: justify text-indent: 2em " 近日，中国工程院院士、清华大学生物医学工程系讲席教授程京接受了记者的采访，他在采访中表示，这可能由多种因素导致。“首先，试剂盒研发需要十几种关键化学原材料，比如酶、合成DNA等。 strong 不同企业选择的原材料供货方不同，酶的活性、DNA的纯度就会有差别，这都会影响到核酸检测试剂的准确度。 /strong ”程京说。 /p p style=" text-align: justify text-indent: 2em " “而在 strong 试剂盒产品研发过程中，原材料制备、生产工艺选择、研发人员能力、技术手段使用，每一个环节都有可能产生偏差，误差累计起来也会导致试剂盒产品灵敏度出现差别。” /strong 程京说。 /p p style=" text-align: justify text-indent: 2em " 再者， strong 取样过程不规范也会影响后续的分离和测定结果 /strong 。以使用最普遍、操作简单的咽拭子采集为例，由于咽部的新冠病毒含量少，所以有可能造成漏检。“虽然只是在咽部拿棉签划几下，但如果没有良好的专业实操技能，样本的采集部位和手法可能不符合规范，就可能直接影响检测结果。”程京表示，此外，刚被感染的病人因体内带毒数量有限，也可能出现检测结果为阴性。 /p p style=" text-align: justify text-indent: 2em " strong 送样本时必须采取冷链运输，如果在运送过程中样本受损，也会影响检测结果 /strong 。 /p p style=" text-align: justify text-indent: 2em " 核酸检测出现假阴性的问题，一度引发用CT影像代替核酸检测试剂确诊新冠肺炎的呼声。近日发布的《新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案（试行第五版）》中，在“疑似病例”和“确诊病例”之外新增了一个“临床诊断病例”，并将“疑似病例具备肺炎影像特征者”作为其诊断标准（只限于湖北省之内），这也意味着CT影像结果成了“临床诊断病例”的判定依据。 /p p style=" text-align: justify text-indent: 2em " 浙江大学附属第二医院放射科主任医师、中国医师协会放射医师分会呼吸专委会主任委员张敏鸣教授曾指出，CT影像结果阳性也存在误诊可能。他还提到，如果都去做CT检查而忽略防护，容易造成交叉感染。专家表示，无论是CT检查还是核酸检测，都不能保证绝对的准确性。 /p p style=" text-align: justify text-indent: 2em " “ strong 尽管核酸检测存在假阴性问题，但核酸检测是病原诊断的一个依据，也是目前确诊的最重要依据。 /strong ”国家医疗专家组成员、北京大学第一医院感染疾病科主任王贵强表示。 /p p style=" margin-top: 0em margin-bottom: 1em padding: 0px color: rgb(68, 68, 68) font-family: 宋体, & quot Arial Narrow& quot white-space: normal text-align: justify text-indent: 2em " span style=" margin: 0px padding: 0px text-indent: 2em " 众志成城，抗击疫情。防控新型冠状病毒感染的肺炎疫情，全国在行动，仪器及检测人也在行动!仪器信息网作为科学仪器行业的专业门户网站，充分发挥科学仪器行业专业媒体资源优势，整合科学仪器及检验检测多方资源，第一时间推出 /span a href=" https://www.instrument.com.cn/zt/xxgzbd" target=" _blank" style=" margin: 0px padding: 0px color: rgb(84, 141, 212) text-decoration-line: none text-indent: 2em " span style=" margin: 0px padding: 0px " strong style=" margin: 0px padding: 0px " “抗击新冠疫情，仪器人在行动” /strong /span /a span style=" margin: 0px padding: 0px text-indent: 2em " 专题，全力支援疫情抗击工作。 /span /p p style=" margin-top: 0em margin-bottom: 1em padding: 0px color: rgb(68, 68, 68) font-family: 宋体, & quot Arial Narrow& quot white-space: normal text-indent: 2em " strong style=" margin: 0px padding: 0px " /strong /p p style=" margin-top: 0em margin-bottom: 1em padding: 0px color: rgb(68, 68, 68) font-family: 宋体, & quot Arial Narrow& quot white-space: normal text-align: center text-indent: 2em " a href=" https://www.instrument.com.cn/zt/xxgzbd" target=" _blank" style=" margin: 0px padding: 0px color: rgb(102, 102, 102) text-decoration-line: none " img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/202002/uepic/a767565f-df49-479b-8f08-ac6296a275ee.jpg" title=" ae723130-0e56-4376-8be7-ad82428ada84.jpg" alt=" ae723130-0e56-4376-8be7-ad82428ada84.jpg" style=" margin: 0px padding: 0px border: 0px max-width: 100% max-height: 100% " / /a /p p arial=" " white-space:=" " text-align:=" " style=" margin-top: 0em margin-bottom: 1em padding: 0px color: rgb(68, 68, 68) font-family: 宋体, & quot Arial Narrow& quot white-space: normal text-align: center " span style=" margin: 0px padding: 0px color: rgb(84, 141, 212) " a href=" https://www.instrument.com.cn/zt/xxgzbd" target=" _blank" style=" margin: 0px padding: 0px color: rgb(84, 141, 212) text-decoration-line: none " 点击图片查看专题详情 /a /span /p p style=" margin-top: 0em margin-bottom: 1em padding: 0px color: rgb(68, 68, 68) font-family: 宋体, & quot Arial Narrow& quot white-space: normal text-align: center " img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/202002/uepic/63b2fa31-6e48-4b20-8924-9b0e251db168.jpg" title=" 企业微信截图_1581300750743.jpg" alt=" 企业微信截图_1581300750743.jpg" width=" 400" height=" 400" border=" 0" vspace=" 0" style=" margin: 0px padding: 0px border: 0px max-width: 100% max-height: 100% width: 400px height: 400px " / /p

近日，由新型冠状病毒引起的肺炎疾病在武汉地区形成了一定规模的爆发，全国各地都已经引起了高度的重视。那么这个冠状病毒到底是什么以及为什么称它为新型？冠状病毒在系统分类上属冠状病毒科（Coronaviridae）冠状病毒属（Coronavirus）。冠状病毒属的病毒是具外套膜（envelope）的正链单股RNA病毒，直径约80～120nm，其遗传物质是所有RNA病毒中最大的，只感染人、鼠、猪、猫、犬、禽类脊椎动物。冠状病毒的一个变种是引起非典型肺炎的病原体，属于RNA病毒。冠状病毒最先是1937年从鸡身上分离出来，病毒颗粒的直径60～200nm，平均直径为100nm，呈球形或椭圆形，具有多形性。病毒有包膜，包膜上存在棘突，整个病毒像日冕，不同的冠状病毒的棘突有明显的差异。在冠状病毒感染细胞内有时可以见到管状的包涵体。冠状病毒的伪彩色结构图那么要想了解此次病毒的真面目就需要用电镜进行观察。近日国家病原微生物资源库发布了由中国疾病预防控制中心病毒预防控制所成功分离的我国第一株病毒（新型冠状病毒武汉株01）的电镜照片。图中黑色箭头所示的位置就是所说的病毒，可以看出，病毒的大小约为100纳米，同时可以看出，病毒形态成圆形，在病毒的表面围绕着一圈突刺蛋白（Spike protein），像一个皇冠。正因为有此形态，此类病毒被划分为冠状病毒（目前病毒的分类经常是根据病毒的型态进行分类的）。新型冠状病毒武汉株01的电镜照片那么得到以上的病毒的电镜照片需要经过那些操作呢？首先因为这个是一张透射电镜（TEM）的照片，拍摄此类透射电镜照片的步骤是：（1）从感染新型冠状病毒的病人的人气道上皮细胞培养液中离心，取上清液得到含有病毒的液体；（2）用2%多聚甲醛灭活；（3）用2.5%戊二醛固定在支持膜上（类似于载玻片），用一系列乙醇脱水处理；（3）包埋在超薄树脂中，制作成切片；（4）透射电镜进行观察。那么为什么称这次的病毒为新型冠状病毒呢？这是因为此次发现的病毒与之前发现的冠状病毒在RNA序列上有一些不同（此次武汉发现的新型冠状病毒已经被命名为 2019-nCoV）。目前发现该病毒有30473个碱基对。 这些碱基对的确定可以帮助开发快速分子检测方法，如PCR（polymerase chain reaction）方法。我们知道新型冠状病毒是RNA病毒，它的蛋白结构还没有确定出来，确定它的蛋白结构需要用到冷冻电镜技术，这种技术需要将生物样品冷冻在-180℃左右的液氮环境中，在毫秒时间内把样品内部的水分冷冻成玻璃态，从而保存了样品的天然形貌，使得科研人员能够观测到蛋白质的细微结构。随着技术的突破，现在的分辨率已经达到了原子级别，通过冷冻电镜从各个方向上照射样品，获取其三维结构。例如下图，为2019年10月18日饶子和灯研究团队发表在Science期刊的非洲猪瘟病毒的三维蛋白结构。非洲猪瘟病毒的三维蛋白结构[1]虽然现在还没有完全解析出新型冠状病毒的三维蛋白结构。但是，饶子和等团队已经发布了新型冠状病毒3CL水解酶高分辨晶体结构。希望能够为科技工作者、特别是从事药物研发的科技人员提供有用的支持，尽快研制出更好的抗新型肺炎的药物。新型冠状病毒3CL水解酶高分辨晶体结构最后，在全国预防新型冠状病毒的攻坚战期间，建议民众保持良好的卫生习惯，勤洗手、注意饮食休息，保持室内清洁与通风，避免去人多聚集的公共场所，如果必须外出，请佩戴N95口罩或者外科医用口罩进行防护。祝愿各位能够早日战胜此次新型冠状病毒引起的肺炎疾病的战役。[1] Architecture of African Swine Fever Virus and implications for viral assembly