真蛋白

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真蛋白相关的耗材

  • 白蛋白、IgG、IgA、转铁蛋白、触珠蛋 白、抗胰蛋白酶和纤维蛋白原去除色谱柱
    安捷伦蛋白质分级分离系统和蛋白质组学试剂 生物样品的LC/MS 分析 电泳分析的准备 生物标志物研究的样品制备 仪器和工作流程验证 经济实惠的免疫去除 样品脱盐、浓缩和分馏为了更方便地对生物样品(如血清、血浆和脑脊液(CSF))中的蛋白质进行分离和鉴定,安捷伦的多重亲和去除系统(MARS)用色谱方法去除生物样品中存在的干扰性高丰度蛋白。这些高丰度蛋白的去除,改善了后续对样品进行的液/质分析和电泳分析,有效地扩展了动态范围。针对样品的馏分和脱盐,安捷伦设计了mRP-C18 高回收率蛋白柱,可以用一个简单的步骤同时完成脱盐、浓缩和分馏,极高的样品回收率可以与常规RP HPLC 柱媲美,后者与LC/MS 分析完全兼容。另外,安捷伦还提供生物标志物研究中样品制备和其它蛋白质组学应用的验证试剂,包括复杂标准品和蛋白质组学级胰蛋白酶。为便于使用,这些试剂均与安捷伦LC/MS 方法完全兼容,无需任何额外的样品预处理。我们的定制配置还可以满足您的大体积进样需求和定制其他色谱柱规格。多重亲和去除系统用安捷伦的多重亲和去除系统可以对血清、血浆和其它体液中高价值的低丰度蛋白和生物标志物进行鉴定和表征。多重亲和去除系统能够可重现地、特异地去除人的生理体液中多达14 种高丰度蛋白,和小鼠生理体液中3 种高丰度蛋白。多重亲和去除系统可以使用各种液相柱规格和离心小柱。安捷伦多重亲和去除系统与安捷伦优化的缓冲液、方便的离心过滤膜和浓缩器结合在一起,形成了一个自动化的一体式蛋白去除解决方案,可以与大多数液相色谱仪(色谱柱)和台式离心机(离心小柱)兼容。用多重亲和去除系统净化的样品适用于下游的各种分析,如二维凝胶电泳、LC/MS 和其它分析技术。订货信息:
  • SiR活细胞微管蛋白试剂盒
    SiR微管蛋白试剂盒SiR-tubulin是一种具有荧光性、细胞通透性和高度特异性的微管探针包装:试剂盒含50 nmol SiR-tubulin和1 umol维拉帕米分类:细胞骨架探针,生物成像探针,产品,SiR探针介绍:SiR-tubulin基于微管结合药物多烯紫杉醇。SiR-tubulin具有荧光性、细胞通透性和对微管的高度特异性。Sir-tubulin染色内源性微管不需要基因操作或过度表达。它在远红光中的发射最大限度地降低了光毒性和样品的自身荧光。SiR-tubulin与GFP和/或m-cherry荧光蛋白兼容。它可以用标准的Cy5滤光器成像。sir -微管蛋白可用于活细胞和组织的宽视野、共聚焦、SIM或STED成像。探针数量允许50 - 200个染色实验。*基于以下条件:0.5 - 1ml染色液/ 0.5 - 1um探针浓度的染色实验。染色实验的数量可以通过减少体积或探针浓度来进一步增加。备注:Sir探针的染色效率因细胞类型和/或生物体而异。观察到弱染色的一个主要原因是样品中流出泵的活性。加入广谱外排泵抑制剂,如维拉帕米,一般对信号强度有积极影响。维拉帕米使用指南如果您的样品荧光信号较弱,建议在维拉帕米存在的情况下重复染色。将管中的内容物溶解在100 μl DMSO中,制备10 mM(1000倍)的原液。将Verapamil DMSO原液添加到最终浓度为10 μM的染色液中,按照SiR探针的指示培养细胞或样品(详细染色方案请参考SiR探针的数据表)。重要提示:维拉帕米不是Spirochrome产品,每笔订单都是免费添加的。上述条件是一个建议的起点,因为维拉帕米的效果可能因所使用的细胞类型或生物体而异。为了优化弱染色样品的染色效率,需要进行不同浓度的维拉帕米和SiR-probe的小规模实验。作为一种外排泵抑制剂和钙通道抑制剂,维拉帕米可能对活样品有副作用。
  • MassPREP糖蛋白分析包
    MassPREP糖蛋白分析包1、使用RapiGest SF表面活性剂优化蛋白质的去糖基化反应2、使样品操作最少化3、有效的脱盐/样品净化方法4、与MALDI质谱分析和其它糖苷分析技术兼容5、有助于分离2-AB标记糖苷糖基化(Glycosylation)是真核蛋白质最重要的翻译后修饰(PTM:post-translational modification)类型之一。执行有效的样品去糖基化和样品制备是成功进行高灵敏的糖苷分析的关键点。此外,对糖蛋白释放的2-AB标记糖苷进行制备和纯化也是成功分析的一个重要步骤。MassPREP糖蛋白分析包,提供简单而耐用的样品制备方法,且并不牺牲样品回收率。如下图所示,在使用了MassPREP糖蛋白分析包之后,未标记的糖苷或2-AB标记糖苷能够用MALDI-MS或配备荧光检测器的LC进行成功分析。对来自糖蛋白的组分进行样品制备获得纯化的2-AB标记糖苷对天然和2-AB标记IgG糖苷进行MALDI质谱分析所得的质量轮廓图MassPREP糖蛋白分析包及配件产品描述 规格/数量 部件号MassPREP糖蛋白分析包(包括:MassPREP HILIC uElution样品处理板、RapiGest SF,以及MassPREP MALDI Matrix DHB) — 186002817MassPREP HILIC μElution样品处理板 96孔板 186002780RapiGest SF 1mg样品瓶 186001860

真蛋白相关的仪器

  • 岛津集团发布新型PPSQ-51A单反应器蛋白测序仪和PPSQ-53A三重反应蛋白测序仪。 新PPSQ-51A / 53A蛋白质测序仪采用岛津SPD-M30A光电二极管阵列检测器,配有新型毛细管流通池,灵敏度是原型号标准检测池的10倍,能进行较长序列的蛋白质研究。 主要特点:1、在等度洗脱模式下进行PTH-氨基酸的分析,等度序列分析提供更稳定的保留时间。这意味着可以使用色谱减法取消在以前的周期中检测到的峰,方便用户识别正确的氨基酸。在等度洗脱模式下进行PTH-氨基酸分析也使实验室通过流动相回收减少废液的浪费,降低运行成本。2、操作简单,专业的蛋白质测序仪将对反应单元和高效液相色谱分析单元提供控制功能,便于进行序列分析。3、新PPSQ软件可配置为满足实验室的各种需要,无论是监管、研究和开发,还是学术。该软件符合FDA 21 CFR Part 11指南对安全、用户管理和审计跟踪的要求。易于使用的数据分析功能,简化操作,数据处理和报告。这些功能允许色谱的后处理、多重色谱的叠加、色谱减法、和氨基酸序列的自动估计。此外,PPSQ-51A / 53A音序器提供定制的报告,并对数据进行快速、全面的的图形显示。拥有以前机型的客户(31A/33A/51B/53B)可以升级现有系统为相同灵敏度,并能拥有和PPSQ-51A / 53A一样的软件。升级包在有高层次的灵活性以及数据库的标准版和客户端服务器版本中都可以使FDA 21 CFR Part 11合规。
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  • 蛋白组学样本前处理工作站是一款具备高通量、高回收率、安全性能强、抗干扰能力强,适用范围广等优势,适用大队列样本的高通量处理设备,可实现质谱蛋白样本前处理的全自动化和标准化操作。蛋白组学样本前处理解决方案适用于血浆、血清、尿液、细胞、组织等类型样本从蛋白到多肽混合物的质谱检测前处理工作,试剂盒利用新型固相烷基化试剂SPA材料与蛋白的特异性共价反应,实现蛋白质的高效捕获,通过清洗磁珠表面,快速去除干扰物质,并进行原位固相酶解,获得蛋白酶解产物,仪器整合制冷模块、磁吸附模块、加热振荡模块、抓扳手,进而实现蛋白质组提取、还原、烷基化、酶解等流程自动化操作,提高蛋白质样品的处理效率和回收率。 优势特点高通量■96通道移液头,一次可处理最多96个样本,高效完成实验流程中吸废等步骤;■兼具8通道移液功能,可以实现试剂的精准分装;■ 全流程4-5小时可完成96个蛋白样本的前处理(具体时间根据具体实验流程);自动化程度高■ 整合抓板手,用于对标准SBS板子的转移;■ 整合蛋白前处理所需的试剂制冷模块、磁吸附模块、加热振荡模块等功能模块;■均一化操作,减少实验过程中的误差,提高准确性和稳定性;灵活性强■ 盘面包含18个SBS标准盘位,除功能模块外,有15个盘位放置试剂和耗材;■开放式平台,配有多样化适配器,可适配多种不同品牌试剂耗材;■软件界面人性化设计,拖拽式布局,操作简单,每个步骤可独立进行参数设置,实验流程可进行存储,按键式启动运行;安全性■可配置避光外罩,搭配紫外消毒灯;■可根据实验需求选配正、负压HEPA过滤系统,有效避免交叉污染; 数据测试样本批内测试数据材料:293T 细胞实验方法:手工操作3 组,仪器操作3 组Q Exactive质谱结果如下:表1:手工操作和仪器操作后蛋白数及零漏切率对比图1 Venn diagram(蓝色:手工;绿色:仪器)试验总结手工操作和仪器操作蛋白样本预处理后可检测到的蛋白数及零漏切率基本一致,达到预期要求;手工操作与仪器操作蛋白种类皮尔斯相关系数大于0.97,与预期一致;样本批间测试数据图2 96孔板检测示意图如图2所示共处理96个样品,分三组进行实验,随机选取36个样品进行Q Exactive质谱检测,结果如下:图3 36个样本检测蛋白数(个)图4 36个样本零漏切率(%)图5 随机样品日间比较实验总结36个随机样本检测蛋白数3074±89个,零漏切率78.32±2.66%,样本预处理的结果正常且稳定;36个样品的皮尔斯相关系数及日间随机样品皮尔斯相关系数均介于0.955-0.989之间,达到指标要求,具有较好的均一性。 应用领域临床诊断/用药指导/病理机制研究/疾病标志物的发现/药物机理研究特别说明,此页面中所有展示的图片和信息仅供参考。
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  • 仪器简介:CEM公司的SprintTM真蛋白质快速测定仪结合生物科学与食品科学技术,进行快速精确的蛋白质测定。该系统使用蛋白质氨基酸分子标签技术区分及测量蛋白质含量(而非氮元素),因此你不必为待检样品中添加过量含氮物质或被含氮物质污染所造成的数据失真而担心。技术参数:1.测试方法:CEM iTAG蛋白质标签技术。2.蛋白测定范围:0.01-99.99%,样品范围不受性状局限。3.测试时间:2分钟4.数据输入:键盘菜单驱动软件5.显示:彩色VGA显示屏(分辨率800*640)6.数据接口:2个串行口RS232,9针打印机,计算机与条码读取器,4个USB接口。标准打印输出:内置打印输出。7.仪器尺寸:分析仪尺寸:39.4cm*34cm*42cm8.反应支架尺寸:35cm*14cm*7cm.9.仪器重量:分析仪重量:10kg10.反应支架重量:1.1kg11.条码读取器:串行口,RS232 主要特点:1. 直接测量“真蛋白质”,而非总氮含量;2. 加入三聚氰胺时不会产生错误的蛋白质测量结果;3. 测量时间只需两分钟;4. 可用于所有类型样品检测(液体、固体、粉末状、奶油、肉类、坚果类、谷物、种子等); 5. 简单的全自动操作,无需有经验的化学家;6. 精确性和准确度高于常规凯氏定氮方法 7. 无需危险的化学试剂;8. 相比目前的检测系统,更低的操作成本;9. AOAC,AACC认可的检测方法.
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真蛋白相关的方案

真蛋白相关的论坛

  • 真核蛋白表达及纯化步骤有哪些?

    [font=宋体][font=宋体]真核蛋白表达系统是一种广泛应用的蛋白表达方式,通常利用酵母、昆虫或哺乳动物细胞作为宿主。这种表达系统所生成的蛋白与目标[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]具有极高的相似性,能诱导高效蛋白表达。那么,在实施真核蛋白表达时,有哪些关键的纯化步骤呢?接下来,我们将详细解析这一过程。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]首先,我们要明确真核蛋白表达的纯化步骤是至关重要的环节。这些步骤不仅关系到最终产品的纯度和产量,还直接影响其生物活性和应用价值。因此,选择合适的纯化方法对于整个实验的成功至关重要。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]真核蛋白表达及纯化步骤主要有以下几个方面:[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、重组质粒构建:将目的基因克隆进表达载体,常见的方法包括限制性切酶切割,基因合成等,根据连接酶说明,进行线性载体和目的基因片段的酶联,最后对质粒测序做好验证;[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、蛋白诱导表达:普适条件下查看蛋白是否表达,若不表达,更换载体,表达菌株等方法查看是否表达,如果表达,继续实验;[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、蛋白表达部位分析:分析蛋白是可溶性还是不溶性的表达,即在超声后上清表达还是沉淀表达;是否与你的目标蛋白表达部位相同,相同进行后续蛋白表达条件优化;[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、蛋白表达优化:优化诱导[/font][font=Calibri]IPTG[/font][font=宋体]浓度、诱导温度,进行放大培养;[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5[/font][font=宋体]、蛋白纯化:根据目标蛋白的性质进行样本处理,然后进行亲和纯化,获取目的蛋白。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]真核表达系统的选择与应用[/b][/font][font=宋体]酵母蛋白表达系统[/font][font=宋体]酵母真核蛋白表达系统有甲醇酵母表达系统,酿酒酵母表达系统,裂殖酵母表达系统以及克鲁维酸酵母表达系统等,其中最早应用于基因工程的酵母是酿酒酵母,但现在运用最广泛的酵母表达系统还是甲醇酵母表达系统中的毕赤酵母真核蛋白表达系统。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]哺乳动物细胞表达系统[/font][font=宋体][font=宋体]哺乳动物细胞表达系统是真核表达系统中唯一可以表达复杂蛋白的系统,它能够指导真核表达蛋白进行正确折叠,提供复杂的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]型糖基化和准确的[/font][font=Calibri]O[/font][font=宋体]型糖基化等多种翻译后加工功能,所以它和昆虫酵母系统比较更具有发展潜力,哺乳动物细胞真核表达的蛋白与天然真核表达蛋白的结构、糖基化类型和方式几乎相同且能正确组装成多亚基蛋白[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]但成本较高也一定程度上减缓了它的发展速度。哺乳动物细胞表达系统主要是通过改造宿主细胞来提高外源蛋白的表达效率,常用的宿主细胞有[/font][font=Calibri]CHO[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]COS[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]BHK[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SP2 /0N[/font][font=宋体]等,哺乳动物转染方法[/font][font=Calibri]*[/font][font=宋体]有脂质体转染法,电穿孔法以及病毒转染等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-techniques][b]蛋白纯化技术[/b][/url]:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-techniques[/font][/font][font=Calibri] [/font]

  • 【原创大赛】饲料中真蛋白的测定

    【原创大赛】饲料中真蛋白的测定

    ps:在论坛上找了半天没找到适合这篇文章的地,暂且先放这吧。饲料中真蛋白的测定方法1.前言饲料作为畜牧养殖生产中的重要生产资料,其营养价值的高低直接影响到畜牧养殖的效益,而饲料中蛋白质的含量是一项重要的指标,饲料中粗蛋白质包括真蛋白质和非蛋白质两部分含氮物质,后者主要包括游离氨基酸、硝酸盐、铵盐等,故不能反映出饲料蛋白质对动物的真正营养价值。有些不法生产商故意添加硫酸铵、尿素等非蛋白质来提高产品的粗蛋白含量,导致部分养殖场户存在一个误区,认为标签上标注的粗蛋白质高,营养价值就高,从而造成养殖效益的低下。本文在凯氏定氮方法的基础上进行相应的前处理从而达到测定真蛋白的目的。蛋白质经沸水提取并在一定碱性条件下,能与硫酸铜发生盐析作用而析出沉淀,此沉淀物不溶于热水,而非蛋白氮则易溶于水,用热水洗沉淀,将水溶性含氮物洗去,剩下的沉淀物再用凯氏定氮法测定,得出真蛋白质的含量。2.实验部分2.1 仪器与试剂粉碎机、40目分样筛、分析天平(感量0.1mg)、烧杯250ml、玻璃棒、漏斗(直径10cm)、定性滤纸(中速,12.5cm,15cm)、可控温干燥箱、K1100F全自动凯氏定氮仪、SH420石墨消解炉、可控温电炉浓硫酸(98%)、硫酸铜(分析纯)、硫酸铜溶液(10%)、硫酸钾、氢氧化钠溶液(40%)、氢氧化钠溶液(2.5%)、硼酸(20g/L,按混合指示剂:硼酸=1:100加入指示剂)、甲基红-溴甲酚绿混合指示剂[font=Times New Roman

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  • 张锋《自然》重磅:首次在真核生物中找到类Cas蛋白
    近日,《自然》杂志刊登张锋团队新研究成果,研究者首次在真核生物中找到受RNA引导的核酸内切酶Fanzor(Fz),并可组装能对人类基因组进行编辑的类CRISPR/Cas系统,经初步改造编辑活性可达18.4%。该蛋白的真核起源和较小体积,都预示着它可能具有比目前CRISPR/Cas更广阔的应用场景。论文题图毫不夸张地说,CRISPR/Cas的出现为生物学发展带来了巨大的变革,起源于原核生物的CRISPR也让人好奇,是否在真核生物中也存在类似的系统。2021年,张锋团队在《科学》发文,他们发现了一种类CRISPR系统OMEGA(obligate mobile element–guided activity)。OMEGA系统由转座子末端转录的非编码RNA(ωRNA)和内切酶组成,其中3种转座子编码蛋白IscB、IsrB、TnpB是天然存在的RNA引导的核酸酶,且IscB和TnpB分别为Cas9和Cas12的可能祖先。而早在2013年,Fanzor蛋白就被报道为一种真核TnpB-IS200/IS605样蛋白,这不由得让人怀疑,Fanzor就是那个我们还未知的真核生物中的Cas。经公开遗传数据库搜索,研究者发现Fanzor蛋白广泛存在于真菌、原生生物、节肢动物、软体动物、巨病毒等物种,可分为Fz1和Fz2两种不同的独立起源,并发现了细菌TnpB向真核生物水平转移并进化为Fanzor的痕迹。与TnpB和Cas12的结构对比可以看出,Fanzor结构与它们非常相似,这无疑说明Fanzor可能具有类似的功能。Cas12、TnpB、Fanzor的结构对比研究者猜测,Fanzor可能以ωRNA 3端侧翼序列为向导RNA,在目标DNA序列执行切割功能。为此,他们构建了Fz OMEGA系统,并与质粒文库匹配进行切割实验。实验结果可见,不同Fanzor蛋白具有特定的切割模式,并具有针对双链DNA(dsDNA)的特异性。不同Fanzor蛋白具有特定的切割模式Fanzor表现出ωRNA引导的、TAM和靶序列依赖的dsDNA切割研究者在人类细胞中测试了Fz OMEGA的编辑效率,针对8个不同基因位点,4个Fanzor同源物中有3个表现出了可测量的编辑活性,效率最高达11.8%,总体水平与AsCas2f1相当。编辑效率最高达11.8%为提升编辑效率,研究者还尝试了修饰ωRNA和向Fanzor中引入突变。多方尝试之下,可将编辑效率最高提升至18.4%。不同修饰ωRNA(上)和Fanzor突变(下)后的编辑效率研究者还通过冷冻电镜技术分析了SpuFz1的结构,在2.7Å下可见典型的双球形结构,REC和WED结构域识别包含TAM的DNA双链,NUC和RuvC结构域则形成了类似Cas的沟槽,容纳ωRNA与DNA形成的异源双链。Fanzor结构最后,研究者还对SpuFz1的天然ωRNA结构进行了分析,确定其中tem2的区域是功能所不需的,去除后ωRNA总长为96nt,可令结构更紧凑、便于应用。ωRNA结构中tem2不影响活性不过,目前为止,研究者们还没有搞清楚Fanzor蛋白的生理功能,仅猜测与转座有关。Fanzor的真核生物起源和它相较Cas12等更小的大小,使得它有潜力成为新一代的基因编辑手段,但是它的天然功能使其可能面对在生物体内活性低、作用严重受控等问题。研究者认为,这可以通过基因工程改造来优化。今日,《自然》杂志刊登张锋团队新研究成果,研究者首次在真核生物中找到受RNA引导的核酸内切酶Fanzor(Fz),并可组装能对人类基因组进行编辑的类CRISPR/Cas系统,经初步改造编辑活性可达18.4%。该蛋白的真核起源和较小体积,都预示着它可能具有比目前CRISPR/Cas更广阔的应用场景。论文题图毫不夸张地说,CRISPR/Cas的出现为生物学发展带来了巨大的变革,起源于原核生物的CRISPR也让人好奇,是否在真核生物中也存在类似的系统。2021年,张锋团队在《科学》发文,他们发现了一种类CRISPR系统OMEGA(obligate mobile element–guided activity)。OMEGA系统由转座子末端转录的非编码RNA(ωRNA)和内切酶组成,其中3种转座子编码蛋白IscB、IsrB、TnpB是天然存在的RNA引导的核酸酶,且IscB和TnpB分别为Cas9和Cas12的可能祖先。而早在2013年,Fanzor蛋白就被报道为一种真核TnpB-IS200/IS605样蛋白,这不由得让人怀疑,Fanzor就是那个我们还未知的真核生物中的Cas。经公开遗传数据库搜索,研究者发现Fanzor蛋白广泛存在于真菌、原生生物、节肢动物、软体动物、巨病毒等物种,可分为Fz1和Fz2两种不同的独立起源,并发现了细菌TnpB向真核生物水平转移并进化为Fanzor的痕迹。与TnpB和Cas12的结构对比可以看出,Fanzor结构与它们非常相似,这无疑说明Fanzor可能具有类似的功能。Cas12、TnpB、Fanzor的结构对比研究者猜测,Fanzor可能以ωRNA 3端侧翼序列为向导RNA,在目标DNA序列执行切割功能。为此,他们构建了Fz OMEGA系统,并与质粒文库匹配进行切割实验。实验结果可见,不同Fanzor蛋白具有特定的切割模式,并具有针对双链DNA(dsDNA)的特异性。不同Fanzor蛋白具有特定的切割模式Fanzor表现出ωRNA引导的、TAM和靶序列依赖的dsDNA切割研究者在人类细胞中测试了Fz OMEGA的编辑效率,针对8个不同基因位点,4个Fanzor同源物中有3个表现出了可测量的编辑活性,效率最高达11.8%,总体水平与AsCas2f1相当。编辑效率最高达11.8%为提升编辑效率,研究者还尝试了修饰ωRNA和向Fanzor中引入突变。多方尝试之下,可将编辑效率最高提升至18.4%。不同修饰ωRNA(上)和Fanzor突变(下)后的编辑效率研究者还通过冷冻电镜技术分析了SpuFz1的结构,在2.7Å下可见典型的双球形结构,REC和WED结构域识别包含TAM的DNA双链,NUC和RuvC结构域则形成了类似Cas的沟槽,容纳ωRNA与DNA形成的异源双链。Fanzor结构最后,研究者还对SpuFz1的天然ωRNA结构进行了分析,确定其中tem2的区域是功能所不需的,去除后ωRNA总长为96nt,可令结构更紧凑、便于应用。ωRNA结构中tem2不影响活性不过,目前为止,研究者们还没有搞清楚Fanzor蛋白的生理功能,仅猜测与转座有关。Fanzor的真核生物起源和它相较Cas12等更小的大小,使得它有潜力成为新一代的基因编辑手段,但是它的天然功能使其可能面对在生物体内活性低、作用严重受控等问题。研究者认为,这可以通过基因工程改造来优化。参考资料:[1]Saito, M., Xu, P., Faure, G. et al. Fanzor is a eukaryotic programmable RNA-guided endonuclease. Nature (2023). https://doi.org/10.1038/s41586-023-06356-2[2]https://www.broadinstitute.org/news/researchers-uncover-new-CRISPR-like-system-in-animals-that-can-edit-the-human-genome
  • “乳品真蛋白检测技术研究与方法筛选”成果通过教育部鉴定
    4月23日,教育部组织同行专家,对中国农业大学完成的“乳品真蛋白检测技术研究与方法筛选”项目进行了成果鉴定。   课题负责人傅泽田教授向来自国家食品质量监督检验中心、农业部奶及奶制品质量监督检验测试中心、中国计量科学研究院、中国疾病预防控制中心营养与食品安全所、北京市理化分析测试中心、北京市食品安全监控中心和北京市营养源研究所等单位的专家进行了课题研究工作报告。食品学院侯彩云教授做了技术研究汇报。   据介绍,早在2004年“阜阳劣质奶粉事件”发生之际,该课题组就将研究重点瞄准了乳品中有可能非法添加的非乳成分检测技术,并针对现行国家标准中所存在的对其中的非蛋白含氮物无法有效鉴别的问题,将生鲜乳中真蛋白检测技术的研究纳入了由副校长傅泽田教授主持的国家“863”项目“生鲜农产品质量安全可追溯系统研究与示范”的研究内容。   2008年“三鹿肾结石奶粉事件”被曝光后,课题组第一时间积极与有关部门联系,得到了农业部农产品质量安监局相关部门的支持,及时推出了可以对乳品中真实的蛋白质含量进行测定的标准:NY/T 1678-2008。该标准是迄今国内外与“蛋白质”相关的标准中,唯一不会将三聚氰胺误判为“蛋白质”的标准。   课题组提出了一种在对乳品中的真蛋白进行测定的同时,可以对其中是否含有三聚氰胺的现象予以同步监测的方法。该方法无需对样品进行特殊的处理,较现行的三聚氰胺标准测定方法操作更加简便和有效,在非应急的正常生产过程中,也可以对乳品的质量安全进行实时风险评估。在此基础上,课题组提出了“真蛋白率”和“蛋白差”的概念,为间接测定乳品中的水解蛋白以及非蛋白氮含量、进一步规范乳品的生产提供了必要的技术保障。   专家们听取汇报后,观看了现场演示,认真审查了技术文件资料,经质询讨论,充分肯定了课题组所提出的乳品真蛋白三氯乙酸-双缩脲比色分析方法以及可同时测定乳品真蛋白和三聚氰胺的毛细管电泳分析方法,并一致认为课题组研制开发的乳品真蛋白数字分析与图像检测系统填补了国内外乳品领域空白,达到国际先进水平。鉴定委员会还建议课题组进一步开展深入研究,拓宽应用领域,加快成果的推广应用,为切实保障乳品质量安全奠定必要的技术基础。
  • 三氯氰胺问题溯源—关键控制因素真蛋白检测的缺失
    培安公司 1. 三聚氰胺-中国食品安全评估体系综合缺陷的爆发点 中国食品安全最近几年出现的一个最大的事故,全世界范围内都引起轰动,就是三鹿公司的三聚氰胺事件。回溯起因,三聚氰胺问题在中国至少存在了10年以上,从奶农开始到各地的收购站,再到中国政府部门以及所有的乳制品公司都逃不了干系。 三聚氰胺(Melamine)(化学式:C3H6N6),俗称密胺、蛋白精,是一种三嗪类含氮杂环有机化合物,被用作化工原料,可用于塑料及涂料工业,也可作纺织物防摺、防缩处理剂,对身体有害,不可用于食品加工或食品添加物。 一种主要用于工业,并且具有毒性的物资为何会出现在奶粉食品中呢?因它的性状是白色无臭无味粉末,与蛋白粉极为相似,且又价格低廉、易于生产购买。不法商贩为了追求更大利益,将三聚氰胺改名&ldquo 蛋白精&rdquo ,误导奶农向饲料和原料奶中添加。缺乏科学知识的奶农,并不懂得此事的后果,为了奶好卖而添加。多年来,由于三聚氰胺对成人肾脏的伤害没有明显广泛的临床症状,使之在乳品行业潜伏,成为一个乳品和饲料企业公开的行业秘密,一直得不到政府部门和厂家的重视。直到大规模的爆发婴幼儿肾结石病例,才东窗事发。此事产生的负面影响是恶劣且巨大的,造成的后果是人民付出巨大的健康代价,企业信用遭质疑,国家声誉损失惨重。一味把责任推给农民道德水准低的想法是非常片面的,而作为化学材料的三聚氰胺,一直都在各领域内使用。如何从根本上防止此类现象在中国再次发生,如何在复杂的各种因素相互影响的宏观系统内,找到造成严重后果的关键控制因素,是我们企业、学术、科技届和政府都必须要思考的一个课题。 追究出现三聚氰胺现象的原因,既是经济问题,更是体系问题。一方面,在于企业为了追求利益,散失了最起码的诚信和社会责任感;更重要的是,于中国食品安全质量控制体系中,相关法规存在三大直接先天性的重大缺陷: 1、中国牛奶里蛋白质含量标准脱离中国实际情况,一味迎合国外标准,规定得太高,高到比中国平均真正牛奶里蛋白质水平还高。这是因为,中国土地经过五千年的耕种养分缺失,导致草地营养含量和奶牛品质下降。与中国不同的是,美国和西方牛奶本身蛋白质含量就足够,企业不需要额外添加蛋白质来迎合标准。 2、蛋白质检测方法和相关法规存在缺陷,传统蛋白质检测方法是凯式定氮法,这种方法检测蛋白质是间接法,先测总氮含量,根据总氮含量再计算出蛋白质含量,而非直接测定蛋白含量。在奶源紧张遭抢购、原料奶粉暴涨近一倍的情况下,一些不法厂商就利用这个检测漏洞,加入高含氮量的三聚氰胺,骗过凯氏定氮法获得虚假的蛋白质含量,造成蛋白质检测值虚高,来蒙混过关。只要三聚氰胺含量添加到限量范围内,既不违背国家技术标准,又能节约成本。 3、牛奶生产涉及环节和监管机构复杂繁多,生产奶粉涉及奶牛饲养、中间商收购、乳品厂加工、中间商批发、终端商销售等环节,由农业、卫生、工商、质检等多个部门监管,这导致任何一个部门都无法对整个生产、销售链条全程监督。直到2009年3月,三聚氰胺事件爆发近半年后,国务院成立食品安全委员会,由卫生行政部门承担食品安全综合协调职责。 对中国来说,一切犯错误的理由都具备的时候,就出现了三聚氰胺事件。三聚氰胺是中国食品安全评估体系的综合缺陷的爆发点。问题是,为什么西方用凯式定氮法检测蛋白质多年也没有出问题,而在中国就出现了非常严重的安全事故?当然,我们会认为中国的企业家,如蒙牛的牛根生等,在早期市场经济环境下,往往通过恶劣竞争胜出,道德素质普遍偏低,思想上不能马上转型,与他们所应承担的社会责任不相匹配。加之奶农的科学知识水平低下,相关政府职能部门的缺失这些因素综合起来导致了这场恶劣事件的发生。而由于西方健全的商业法制系统和个人的法律意识,企业不敢冒这个风险添加三聚氰胺。 蛋白质检测方法的缺陷导致了致命的造假。在三鹿事件后经过反思,2008年9月14日起,检测项目中增加了三聚氰胺,成为乳制品必检项目。这种利用排他法来确保蛋白质含量的措施,虽然堵住了三聚氰胺添加到牛奶中的渠道,却并不能保证其他含氮量高的添加剂被加入。无疑不能解决根本问题。因为我们目的是为了检测蛋白质,而不是为了测三聚氰胺。这是一种舍本逐末的无奈之举,如果有未为列入检测范围的高含氮量添加剂出现,依然能骗过凯氏定氮法。 必须指出,从中央层面国家来看,非常重视食品安全,每次事故后都进行搞运动式的大量投资,而食品安全体系不完善的客观原因造成收效甚微,造成这些投资大量浪费,很多地方上连耗材都用不起。反问我们的专家系统,有没有责任帮国家和社会找到并建立更有效管理宏观经济的方法和勇气? 我们认为,许多事故原因的专家分析都拘泥表层现象,用行政政策取代科学和法制精神,结果治标不治本。目前,中国食品安全体系已经到了一个关键时刻,一个需要反省传统方法和思路,并从思想上转变的创新时刻。食品安全评估应该从宏观控制系统中找到关键控制因素,利用巧实力进行安全质量管理。改变食品安全风险管理思路已经到了一个刻不容缓的时刻,我们必须思考如何建立具有中国特色的食品安全体系,如何建立更开放的专家体系,如何引进更深刻的全新思想概念。否则,中国的食品安全质量体系就会形成安全事故越多,投资越大,成本越高,成效越微这样的劳民伤财的恶性循环。 2. 非蛋白氮&mdash 传统蛋白质表征方法的本质缺陷 检测蛋白质含量的传统和现行标准方法依然是凯式定氮法和杜马斯燃烧定氮法,即还原无机氮或单质氮,用还原后无机氮或单质氮元素含量表征氨基酸,并反推蛋白质含量。在没有人往被测物里人为添加三聚氰胺等无机氮的前提下,传统方法是可行的。但是,如果有人就把无机氮加到系统中去,干扰反推法检测蛋白质的含量,因为含氮量的提高有助于蛋白质含量反推结果的提高,会导致蛋白质含量的虚高。 1.凯氏定氮仪:这种方法是Mr. Johan Kjeldahl在1883年发明的。凯氏定氮法,即采用化学方法,样品消解后含氮化合物转化成氨气,被吸收后经滴定后,测定出总氮元素含量,后经换算转化成蛋白质含量,由于不同的氨基酸序列,凯氏定氮法需要许多不同的校正因子。并且需要使用浓硫酸和较长时间的加热。所以造成了凯氏定氮法只能粗略的测量总蛋白质含量。更致命的缺陷是,测总氮指标后再换算成蛋白指标,造成非蛋白氮会干扰测定的漏洞和机会。 2.杜马斯燃烧定氮法:样品经完全燃烧后转变为氮气,后经测定出的总氮含量后转化为蛋白质含量,步骤是:燃烧&rarr 还原&rarr 净化&rarr 检测,问题依然在于只测总氮指标后再换算成蛋白指标,非蛋白氮会干扰测定,造成蛋白含量值虚高。 无机氮或单质氮在蛋白质里面是不存在的。只有把他烧完以后,有机物质经氧化还原后才会出现无机氮或单质氮。检测蛋白质这些传统方法如凯氏定氮、杜马斯定氮、都是需将蛋白质里面的有机氮经过还原转化为无机氮或单质氮元素来定量,造成不法商贩只要把无机氮或单质氮加进去以次充好,反正用反推法算出来就变成蛋白质含量了。都是以无机氮或单质氮含量来反推蛋白质含量,并不能分辨氮的来源。 无机氮或单质氮&ne 蛋白质 蛋白质中含有氮,不等价于测出的氮都是蛋白质中的氮。所以,用无机氮或单质氮来表征蛋白质含量是有问题的。只要无机氮或单质氮反推法依然是现行的蛋白质测试标准,就会形成一个开放性的动态的系统,利用反推原理,在这个动态系统中,在利益驱使下,不断有人往里面加各种含氮化合物,提高总氮含量,没完没了,防不胜防。 传统蛋白质测定一直采用凯氏定氮法。该法通过氧化还原反应,氧化低价氮为氨盐,通过标定氨盐中总氮元素的量进而换算成蛋白质的含量。凯氏定氮主要针对有机氮化合物,包括蛋白质、游离氨基酸、核酸、尿素等N3-化合物。检测过程中非蛋白氮同样被消化成氨盐,不能反应真实的蛋白质含量,使检测结果虚高,造成严重的国家食品安全的信用危机。只有真正基于蛋白质结构的真蛋白检测方法才能这个解决问题,才能从源头上杜绝再次出现三聚氰胺或其他非蛋白氮事件。寻找一个真蛋白的测定方法迫在眉睫。 3. 蛋白质的组成结构 事实上,蛋白质的基本组成结构是多肽,而多肽的基本组成是氨基酸分子,当然组成氨基酸的主要元素为碳、氢、氧、氮等元素。所以,从根本上说,蛋白质是由氨基酸组成,不是由无机氮或单质氮组成,无机氮或单质氮在蛋白质里面是不存在的。 蛋白质的组成是由氨基酸通过肽键连接而成的长链。组成蛋白质的常见氨基酸有20种。组成蛋白质的主要元素:C、H、O、N、S。蛋白质的含氮量约为16%。凯氏定氮和杜马斯燃烧法都是基于蛋白质的含氮量来计算的。目前,实践经验已经证明了这个方法的缺陷,并让我们付出了惨痛的代价。 20种常见的氨基酸 天冬氨酸 Asparagine 丙氨酸 Alanine 精氨酸 Arginine 天冬酰胺 Aspartate 胱氨酸 Cystine 酪氨酸 Tyrosine 谷氨酰胺 Glutamate 甘氨酸 Glycine 组氨酸 Histidine 异亮氨酸 Isoleucine 亮氨酸 Leucine 赖氨酸 Lysine 苯丙氨酸 Phenylalanine 蛋氨酸 Methionine 脯氨酸 Proline 丝氨酸 Serine 苏氨酸 Threonine 缬氨酸 Valine 色氨酸 Tryptophan 谷氨酸 Glutamine 4. 回到氨基酸的蛋白质表征方法&mdash 关键控制因素事实证明,凯氏定氮的总氮(无机氮或单质氮),不能作为蛋白质表征的关键因素,继续下去,后患无穷,如果能找到以通过氨基酸为表征的原理测试蛋白质,以这个点为中心,进行宏观控制,这样就从本质上,杜绝了加三聚氰胺的风险。蛋白质是由氨基酸组成的,找到特征氨基酸标示,进行分子级别的身份证明,根据氨基酸的含量反推蛋白质的含量,从源头上,使加任何东西都没有用,包括添加皮革边角料,也都没有用。所以,如果找到一个以氨基酸为基础的方法,以氨基酸标示蛋白质。国家蛋白质检测标准建立在这个基础上,就不会有厂家再去加不需要加的东西,因为以特征氨基酸为表征蛋白质含量的时候,即使添加类似三聚氰胺的无机氮,也起不到提高蛋白质含量的作用。这是利国利民的、很有意义的事情。找到这个关键因素进行控制,今后没有人往食品里添加三聚氰胺,因为加了对检测结果也毫无影响。 解决检测漏洞最根本的办法是,检测牛奶中蛋白质的真正含量。为了解决以上这个问题,我们提出并研发了以特殊氨基酸作为蛋白质表征的iTAGTM的标签技术,iTAGTM的标签技术的核心,是基于用特殊氨基酸作为蛋白质的表征的原理。 iTAGTM的标签技术,直接检测真蛋白质含量,而非总氮含量传统的蛋白测定方法,通过iTAGTM标签技术实现了对真蛋白含量的测定,避免了非蛋白氮添加物、残留物对于测试结果的影响。使得蛋白测定结果更为科学可信。例如三聚氰胺、尿素、皮革水解蛋白等非法添加物不会造成测定结果虚高。 这和国家整体的思路有关系,如果中国食品安全质量控制体系的整体思路,回归到从复杂宏观系统找到并建立关键控制因素,如果以氨基酸为标示蛋白质的方法得到推广普及,从而今后没人有必要向牛奶中加非蛋白氮的物质,中国人民今后就不会受到三聚氰胺的困扰。用特殊氨基酸作为蛋白质的表征,这是我们研发iTAGTM的标签技术的理念。 5. 真蛋白质测定技术从根本解决三聚氰胺皮革奶的问题 蛋白质是由氨基酸组成的,不是由无机氮或单质氮组成的。iTAGTM标签技术是直接测量法,用氨基酸表征蛋白质,根据氨基酸含量反推蛋白质含量,非常精确。目前,iTAGTM标签技术非常成熟,与传统方法有本质的区别。目前凯氏定氮法和杜马斯燃烧定氮法都无法排除非蛋白氮的干扰,无法直接测定真实蛋白质含量。iTAGTM标签技术彻底超越了用无机氮或单质氮表征蛋白质含量,即凯式定氮法所出现的问题。 如果在中国采用这种欧美非常流行的方法检测真蛋白质,就不会出现以前企业为提高总氮含量,而往牛奶中添加三聚氰胺或皮革奶的问题,因为往牛奶中添加三聚氰胺只是提高假蛋白的含量,不会提高真蛋白质数据值。如果中国食品安全质量控制体系中检测蛋白质时,以氨基酸为标示的方法得到推广普及,中国人民就不会受到三聚氰胺皮革奶等的困扰。 CEM特殊配方的蛋白质标签技术iTAGTM标签技术,基于传统AOAC、AACC方法 Method 46-14B的技术突破,试剂经改性优化后具备更高的目标性和抗干扰能力,可直接区分及测量蛋白质含量(而非总氮元素),不受样品中过量含氮物质添加或被含氮物质污染所造成的结果失真的影响。iTAGTM 标签技术,直接标定蛋白质中的氨基酸,该技术优化了目标性和针对性,几乎没有干扰物质,因此结果更精确,重复性和再现性更好,优于并超越了传统标准的结果。绿色iTAGTM标签技术,直接准确检测真实蛋白质含量,不受非蛋白氮干扰,安全性更高、目标性更强、所以准确性更好。iTAGTM标签技术快速、安全、环保! iTAGTM 标签技术结合生物与食品技术,进行快速精确的蛋白质测定,可在2min得到准确的结果,精确度达到0.01%。当添加小麦面筋蛋白时不会产生蛋白质测量错误结果,加入三聚氰胺时也不会产生错误结果; iTAGTM标签技术解决了凯氏定氮检测缺陷,即非蛋白氮干扰,区别蛋白质与非蛋白氮的意义在于可以获得精确的蛋白质含量。这对需要进行准确蛋白质检测的行业如食品、饲料和蛋白研究领域具有极大的应用价值。 iTAGTM 标签技术覆盖AOAC 967.12 ,适合分析:乳品(成品或半成品)蛋白、巧克力饮料、脱脂奶及冰激淋等。 另外,iTAGTM 标签技术也符合美国联邦法规(CFR)Title 47。iTAGTM 标签技术可用于所有食品中蛋白质含量的检测,如乳制品、肉制品、粮油制品、果蔬、种子、坚果等。适合分析:谷粒、油籽、豆类、饲料(包括草料)、动物制品、乳制品等。 iTAGTM技术与凯氏法结果平行性对比 iTAGTM技术与凯氏法测试结果对比 Milk Run Sprint Kjeldahl 1 3.13 3.15 2 3.12 3.16 3 3.12 3.13 4 3.12 3.17 5 3.12 3.12 6 3.13 3.18 7 3.12 3.138 3.12 3.16 Average3.12 3.12 Std dev 0.005 0.017 % RSD 0.1% 0.5% Milk (Sample spiked with 0.3g melamine/100 g) RunSprint Kjeldahl 1 3.12 4.53 2 3.13 4.44 3 3.12 4.37 4 3.12 4.40 5 3.14 4.44 6 3.12 4.32 7 3.12 4.41 8 3.13 4.35 Average 3.14
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