血清细胞囊泡

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血清细胞囊泡相关的耗材

  • 昆虫细胞专用胎牛血清
    Hyclone是美国GE公司的细胞培养产品的品牌。Hyclone胎牛血清（Foetal bovine serun，FBS）原料是来源于澳大利亚，美国，加拿大和南美洲的高质量血源，即Hyclone胎牛血清南美，Hyclone胎牛血清澳洲，Hyclone胎牛血清北美。Hyclone公司拥有深厚的生产高标准血清的工业经验。为了获得高等级参数指标的胎牛血清，Hyclone采用了非常严格的质量控制体系。HycloneSH30070.03，昆虫细胞专用胎牛血清；美国源，Hyclone公司zui好的一款血清，新开学之际，素尔优惠多多，素尔拥有自己的进口渠道，严格控制渠道，提供原装品SH30070.03血清，美同达公司可批发供应，全国各地均可发货！产品名称：昆虫细胞专用胎牛血清货号：SH30070.03品牌：Hyclone公司级别：特级规格：500ML内毒素含量: ≤10 EU/ml血红蛋白含量: ≤10 mg/dl有效期：五年储存温度：-20°C运输温度：充足干冰运送库存状态：素尔现货素尔生物作为国内几大血清供应商之一，以每年5000-10000瓶的量为各大实验室提供性价比高、品质卓越的动物血清制品，主要客户群：高校生物实验室、中科院系统、制药企业、干细胞治疗等等，作用：细胞珠的保藏、胚胎细胞、细胞融合组织器官培养及单抗制备。HycloneSH30070.03，昆虫细胞专用胎牛血清，是比较高端产品之一，相对价格较高，等级也高，用来培养娇贵细胞、昆虫细胞、内皮细胞、干细胞等。
    供应商： 北京美同达科技有限公司
    品牌： Hyclone
    价格： 面议
  • 山富 胎牛血清替代品XerumFree 细胞工厂
    XerumFree 是完全无动物成分的血清替代品，作为培养基添加剂用 于广泛的细胞培养，包括原代细胞培养。 XerumFree 化学成分明 确，只含有合成重组或植物来源的高度纯化的化学品，无批次之间 差异 。使用 XerumFree 替代胎牛血清（FBS）实验重复性好，也 不需要昂贵的批次检测和存储。 XerumFree 优势 • 1 化学成分明确，无批次差异 • 2 不含可能影响实验的激素和生长因子，无未知血清成分。 • 3 安全使用，无风险。不含任何潜在致病成分。 • 4 操作方便，只需将产品添加到培养基中，操作与血清类似。无需解 冻或重建。 • 5 在荷兰生产，符合 cGMP。cGMP 是美国食品和药物管理局制定的 质量体系，保证产品符合 FDA 标准。生产设施获得荷兰政府认证允 许生产医学产品。生产设施有大批量生产经验，是荷兰卫生部认证的 药物控制和科研实验室。 • 6 不同细胞株不需要特殊的 XerumFree 产品。
    供应商： 上海山富科学仪器有限公司
    品牌： 山富
    价格： 面议
  • 华龛生物 细胞外泌体
    外泌体（Exosomes)是细胞外囊泡的一种，粒径大小在 30-150nm。目前主要应用于疾病治疗、药物载体、疾病诊断等。• 华龛生物生产的3D ExoTrix细胞外泌体产品在3D仿生培养环境中获得，质量高，产量大• 采用自动化、规模化、标准化的3D FloTrix® 干细胞大规模扩增培养工艺实现封闭式培养、自动化收集，单批次可实现1013个外泌体收获，同时避免了人工操作增加染菌风险• 外泌体高表达TSG101、CD81和CD63，电镜结果显示外泌体结构完整，为经典外泌体结构
    供应商： 北京华龛生物科技有限公司
    品牌： 华龛生物
    价格： 面议
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血清细胞囊泡相关的仪器

  • CellStream高灵敏度可视化流式细胞仪 400-886-5615
    历经多年的发展，流式细胞技术被广泛用于免疫学、血液学、肿瘤学、药理学、细胞生物学及医学检验等诸多领域，扮演着愈加重要的角色，极大的推动了基础研究与临床实践的发展。默克顺势而为，近期推出了新的CellStream流式细胞仪系统，那么新在哪里呢？ 一、特点优势 极高的荧光灵敏度检测和区分细胞亚群 精确绝对计数，兼具单管和高通量上样系统 升级灵活，适应当前和未来的需要 直观易操作的软件，加快数据的发现 二、技术革新 该流式细胞仪最高可配置高达7根激光，22个检测通道以满足科研人员深入研究的需要，它使用基于时间延迟积分CCD（TDI-CCD）的检测器进行检测，快速捕获细胞图像并将其转换为高灵敏度的荧光数据进行数据发现，其独特的光学系统和设计为研究人员在分析细胞和亚微米粒子时提供了无与伦比的灵敏度和灵活性。 三、应用创新 这个新系统可以用于广泛的研究领域，包括细胞外囊泡研究和外泌体，它可以识别其他细胞仪上看不到的小群体。同时，该系统独特的液流技术使其具备精确细胞计数功能，易于在实验室中直接升级。 默克生命科学应用解决方案业务部门负责人Jean-Charles Wirth提到：“研究人员在实验室和研究能力方面越来越需要更强大的能力和灵活性。”我们的新型流式细胞仪系统提高了检测灵敏度，允许科学家根据他们在免疫学、癌症研究和许多其他领域的需要来定制仪器。 四、应用举例 CellStream在细胞外囊泡（EV）检测中的应用 细胞外囊泡（EV）作为细胞间通讯关键介质的重要性近年来引发热烈关注。EV是膜衍生结构，包括外泌小体、微囊泡和凋亡小体。 在以下研究中，分别在三台CellStream仪器上检测使用CD235ab-PE和CD41-APC荧光抗体标记的红细胞和血小板来源的EV。图（A）显示EV的圈门策略，利用该门识别 PE+和 APC+群体。（B）显示浓度梯度稀释下EV荧光散点分布。（C）显示浓度梯度稀释下EV平均荧光强度。（D）显示浓度梯度稀释下EV样品组、抗体对照组、Triton-X 100（TX）+ 抗体对照组、TX +EV对照组以及PBS对照组的颗粒浓度对比。（E）显示数据统计结果。 A: B:C: C: D: E: PE+ Objects/μL Dilution EVs Ave EVs SD Antibody Ave Antibody SD TX+Antibody Ave TX+Antibody SD TX+EVs Ave TX+EVs SD Buffer Ave Buffer SD 1:60 2442 546 160 54 55 28 30 8 5 4 1:120 1199 89 99 49 17 7 13 5 19 1 1:240 566 39 44 22 15 9 9 3 17 1 1:480 235 43 64 108 18 14 13 9 9 1 1:960 154 21 32 37 10 5 10 5 15 2 APC+ Objects/μL Dilution EVs Ave EVs SD Antibody Ave Antibody SD TX+Antibody Ave TX+Antibody SD TX+EVs Ave TX+EVs SD Buffer Ave Buffer SD 1:60 1629 316 9 2 9 9 3 0 1 1 1:120 798 187 4 1 2 1 1 1 0 0 1:240 386 56 2 1 2 1 1 0 0 0 1:480 172 50 2 3 1 1 1 1 0 0 1:960 109 33 1 1 0 0 1 0 0 0 点击这里查看更多详情
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    厂商： 默克化工技术（上海）有限公司
    品牌： 默克/Merck
    型号： CellStream
    价格： 50万 - 100万元
  • CHOZN® CHO K1宿主细胞株 400-622-8982
    CHOZN CHO K1是一种悬浮培养细胞株，适于在化学成分限定培养基中生长以表达重组蛋白。本细胞株附有完整的可追溯文件，并在动态药品生产管理规范（cGMP）的条件下储存。几种符合cGMP规范生产的化学成分限定的培养基可以用于CHOZN CHO K1细胞株的培养。特点与优点：- 悬浮培养- 无血清生长- 复苏、培养和转染的详细方案- 可提供完整的可追溯性和细胞株文档 了解更多，e.g., 细胞株来源，细胞生产与产量，产品组件等，可参见本页面核心参数 – 样本下载中的资料手册。
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    厂商： 默克工艺解决方案
    品牌： 默克/Merck
    型号： CHO细胞平台 - 宿主细胞株
    价格： 面议
  • 细胞外囊泡提取仪 400-860-5168转2623
    ExoDiscoveryTM产品简介ExoDiscoveryTM是一种易于操作的台式仪器，用于从生物液体样品中快速无标签分离纳米级细胞外囊泡(ev)。你可以选择并放置一个一次性的光盘盒，ExoDiscTM到ExoDiscoveryTM系统。每个药盒包含一个优化的方案，从细胞培养上清或体液(如血浆、血清、尿液、脑脊液等)中分离细胞外囊泡，包括外泌体。每个ExoDiscTM可以在10分钟内从生物样本中分离出ev。完整的ev可以很容易地从光盘中取出，并可用于下游分析，如NTA、SEM、TEM、westernblotting、ELISA、qPCR的DNA/RNA准备或测序。ExoDiscoveryTM利用流体辅助分离技术(FAST)的专利技术，可以简单、快速、温和地分离完整的EV，并获得高产量和高纯度，使精准科学应用于精准医学。原理ExoDiscTM是一种离心式微流控装置，配有六个纳滤膜，可进行六个独立的隔离。放置每一个纳滤器是为了使液体通过膜的方向垂直于旋转圆盘所施加的离心力。这被称为切向流过滤(或错流过滤)，它适用于具有许多小颗粒的流体的高级过滤设备。显著减少堵塞有助于更快的过滤，具有高回收率和纯度。FASTTM(流体辅助分离技术)过滤技术的专利技术大大降低了施加在纳滤器上的压力，使其能够温和(规格参数1.尺寸，重量：29.5 x 54.5 x 55 (cm) 11.6 x 21.4 x 21.6 (in)，40kg2.分离时间：10 ~ 40 min3.压力范围：330W (100~240V, 50~60Hz)4.Max. G-force：5005.试样室数量：66.Purity (107 particles/μg protein)：50.5 ± 16.37.Total RNA (ng/μL)：46.3 ± 7.38.自动化:全自动化9.CPU: Proprietary Programmable System-on-Chip推荐文献列表1：Urine-based Liquid Biopsy: Non-invasive and Sensitive AR-V7 Detection in Urinary EVs from2：“Fully Automated, Label-Free Isolation of Extracellular Vesicles from Whole Blood for CancerDiagnosis and Monitoring”, Theranostics 2019 9(7) : 1851-18633：“Urine-based Liquid Biopsy: Non-invasive and Sensitive AR-V7 Detection in Urinary EVs fromPatients with Prostate Cancer”, Lab Chip 2019 19(1) : 87-974：“FAST : Size-selective, Clog-free Isolation of Rare Cancer Cells from Whole Blood at a Liquid-liquid Interface”, Anal Chem 2017 89(2) : 1155-1162推荐
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    厂商： 上海沃埃得贸易有限公司
    品牌： --
    型号： ExoDiscoveryTM
    价格： 18万 - 25万元
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  • 人类和猿类免疫缺陷病毒的负调节因子Nef会被分泌到细胞外囊泡或外泌体中
    细胞外囊泡（EVs）或外泌体在传染病和癌症的病理生理学研究中有重要意义。猿类免疫缺陷病毒（SIV）和人类免疫缺陷病毒（HIV）编码的负调节因子（Nef）在获得性免疫缺陷综合征（AIDS）的致病过程中起非常重要的作用，严重损害胞内运输体系。HIV-1的负调节因子Nef是否会被分泌到细胞外囊泡中，这个问题一直存在争议。人们对SIV负调节因子Nef与细胞外囊泡之间的联系，也一无所知。但是在来源于所培养细胞、经亲和层析纯化所得到的细胞外囊泡和来源于已感染SIV的猕猴的细胞外囊泡中，研究者都发现了SIV和HIV-1负调节因子蛋白。而且，含有Nef的细胞外囊泡是有生物学功能的，也就是说，这类细胞外囊泡能参与膜融合过程，将它们的内含物释放到受体细胞中。所以，这些细胞外囊泡能将负调节因子Nef传递到受体细胞，这意味着负调节因子Nef很容易进入外泌体的生物发生途径，HIV病毒体可以细胞质膜处完成组装。这揭示了慢病毒影响未感染细胞和不可感染细胞（即不含CD4的细胞）的一个新机制。
  • 使用台式MALDI-TOF MS 分析癌细胞细胞外囊泡化疗耐药
    癌细胞通过细胞外囊泡（EVs）与全身细胞相互作用。细胞外囊泡在体内循环并传递引起恶性表型的分子信息。通过同时培养大肠癌转移淋巴节细胞和5-氟尿嘧啶，我们建立了对化疗耐药性增强的细胞。将通过超速离心分离从该细胞的培养上清液中回收的细胞外囊泡，用作体液中循环的源于癌细胞的生物标志的模型。本文通过MALDI-TOF-MS测定了细胞外囊泡中蛋白质的差异表达，这是由于其母细胞的化疗耐药性增加的结果。
  • 细胞外囊泡和埃博拉病毒：一种新的免疫逃避机制
    在急性感染过程中，埃博拉病毒（EBOV）会引发从无症状表现到急性出血热等多种症状。而且，幸存者在无症状的恢复期也可能会传播病毒。在急性感染中，可能会发生细胞因子风暴（Cytokine Storm）和淋巴细胞凋亡，导致被感染者出现不可控的系统性炎症。近的研究证实，在感染过程中，埃博拉病毒蛋白VP40、糖蛋白（GP）和核蛋白（NP）会被装载到细胞外囊泡中。含有埃博拉病毒蛋白的细胞外囊泡已被证实能诱导受体免疫细胞凋亡，并且含有促炎性细胞因子。本篇文章中，研究者梳理了当前与埃博拉病毒相关的细胞外囊泡的研究现状，包括细胞外囊泡的生物发生机制、内含物以及它们对受体细胞的影响。另外，研究者讨论了埃博拉病毒所感染细胞产生的细胞外囊泡可能会引发的一些影响，提出了有待解决的问题和未来的研究方向。
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  • 重磅发布：细胞外囊泡研究国际指南MISEV2023

    [align=center][img=,600,216]https://img1.17img.cn/17img/images/202403/uepic/0115a8aa-1863-4da0-bf05-5b02661ffb4e.jpg[/img][/align]近年来，细胞外囊泡 (Extracellular vesicles，EV)的研究热度正在持续增长，与EV相关的文献数量呈指数级增长，已成为生命科学和生物医学研究领域内的一大热点话题。前不久，国际细胞外囊泡学会（ISEV）发布了最新版的细胞外囊泡研究指南[color=#00b050][b]《Minimal information for studies of extracellular vesicles(MISEV2023): From basic to advanced approaches》[/b][/color]，在MISEV2014和MISEV2018版本基础上整合了来自ISEV专家工作组和1000多名研究人员的反馈意见，加强了研究设计和实验细节，并为新的应用领域提出了建议和指导。[color=#000000][b]MISEV2023重点对EV命名、样品收集和预处理、EV分离与浓缩、EV表征、EV研究技术方法、EV释放与摄取、EV功能研究、EV体内实验进行了介绍。[/b][/color]（文末附全文链接）[align=center][color=#c0504d][b][size=20px]关于ISEV和MISEV简介[/size][/b][/color][/align]MISEV指南由国际外囊泡协会(ISEV)编制，ISEV是研究和使用细胞外囊泡的科学家和临床医生的主要专业协会，通过其年会、专题研讨会和其他会议、同行评审期刊、在线学习平台以及与其他学会的合作，吸引了世界各地的不同研究人员群体。因此，ISEV具有独特的优势，可以指导制定和传播关于最佳实践指南和科学考虑的专家共识。MISEV 2014是ISEV发表的第一篇EV研究指南，旨在为EV研究提供可靠的支撑，MISEV 2018对EV研究发展过程中的方法和手段进行了深入的且批判性的评估，其中大部分内容至今仍然有效。而MISEV 2023与之前的版本一样，为EV研究人员提供了简明扼要的建议和指导，对 MISEV2018 中提出的要点进行了完善，并增加了对新发展领域的建议和指导。其目的是帮助EV研究和应用领域的从业人员针对每个EV来源、类型、研究问题或应用展开最佳实践。[align=center][b][size=20px][color=#c0504d]关于EV命名[/color][/size][/b][/align]MISEV 2023保留了MISEV 2018的EV定义，但删除了2018年使用的“自然释放”的用词（新定义：EV是指从细胞中释放出来的颗粒，由脂质双层分隔，并且不能自行复制，即不包含功能性细胞核），以避免排除了通过细胞培养生产的EV。一般来说，ISEV建议使用通用术语“EV”和该术语的扩展，而不是使用具有误导性的术语，如与难以确定的生物发生途径相关的“exosomes（外泌体）”和“ectosomes（核外颗粒体）”。这两个术语是与假定的生物发生途径有关，需要谨慎使用且需要有强有力的证据。术语“exosomes（外泌体）”是指通过多泡体（MVB）释放的来自细胞内部的EV，而术语ectosomes（核外颗粒体，又称微囊泡Microvesicle、微粒Microparticle）是指细胞膜出芽形成的EV。由于目前大多数EV分离技术不能富集由不同机制产生的EV，且没有外泌体、核外颗粒体或其他EV亚型的通用分子标记。因此，ISEV不鼓励使用基于生物发生的术语，除非对此类EV群体进行了专门的分离和表征。相关术语及定义：[align=center][img=,600,639]https://img1.17img.cn/17img/images/202403/uepic/dce5a128-4ecf-4c0c-ae0c-31e02862f1d1.jpg[/img][/align][align=center][b][size=20px][color=#c0504d]EV的收集和预处理[/color][/size][/b][/align]样本采集、预处理、储存等因素可能会对EV数量和质量造成影响，MISEV2023对需要注意的一些因素给出了建议。对于不同样本都适用的因素，给出了普适建议，另外也针对细胞培养物（cell culture‐conditioned medium，CCM）、细菌、血液、尿液、脑脊液、唾液、滑液、乳汁、实体组织共计9类EV来源样本的采集及处理给出了具体建议。[b]1.血液[/b]血液是EV研究中最常见的生物体液样本，但血液样本面临供体变化、分析前处理、血液中血细胞、血小板、脂蛋白及其他蛋白成分的影响。基于此，MISEV2023对血液样本的收集与处理给出了以下建议：? 相较于其他样本，供体对血液及血液EV的影响较大，因此当收集血液样本时，需详细的记录和报告。? 静脉采血应使用管径较大的采血针，以最大限度减少血小板活化和溶血。为减少细菌和皮肤细胞污染、避免组织因子介导的血小板活化，弃去少量抽到的血液是一种有效的做法（例如，人类抽血时丢弃前面的2-3 mL）。? 选用与下游分析兼容的采血管和抗凝剂。? 采血后，应避免过度摇晃和低温，并尽快处理为血浆或血清，以减少血小板激活和EV释放。? 制备血浆或血清时，应选择能够有效去除血小板但不影响EV的方法。若使用离心法，吸取上清时应从上向下吸上清液，并在沉淀上方保留一定量的血浆或血清，以免干扰沉淀导致血小板释放。? 血液EV的主要污染物/共分离物包括血小板、脂蛋白、溶血产物以及大量可溶性/聚集蛋白，检测时需说明任一污染物。[b]2.尿液[/b]尿液是继血液之后第二大用于EV研究的生物体液样本，可以通过非侵入性的方式连续获得大量样本。尿液EV (uEV)研究的挑战源于uEV的来源细胞不同，以及受到液体摄入量、采样时间、饮食、运动、年龄、性别、药物以及健康状况的影响。基于此，MISEV2023对尿液样本的收集与处理给出了以下建议：? 应使用无细胞尿液/无细胞的尿液生物库。? 在适当情况下，报告uEV污染物/共分离成分（THP、白蛋白、其他过滤到尿液中的蛋白）的去除方法和去除效果。? 为实现标准化，收集uEV和非EV尿液（如肌酐、PSA等）数据，用于估计绝对或相对排泄率。[b]3.细胞培养物[/b]MISEV2018针对CCM中提出的建议仍然有效，包括但不限于描述培养基的组成和制备，记录生产细胞的特征、细胞培养条件、物理或化学刺激物处理（如果有）、CCM收获的频率和时间间隔及方法、EV分离之前CCM的储存处理。如果细胞来源不是已建立的细胞系，则应报告采集和预培养条件，如酶消化。? 如使用血清或其他添加剂，需说明来源和用量。如果使用的添加剂已经去除了EV，需说明去除方法并评估去除程度（包括稀释，通过离心的方法去除EV时稀释可能是必要的）。? 应将非条件（空白）培养基作为对照进行处理和定性，以评估培养基本身对EV检测的影响。[b]4.细菌[/b]细菌EV和细菌来源的多样性，很难就样品类型、预处理、分离、收集和表征给出普适性建议。MISEV2023建议在处理细菌样本时需要注意以下事项：? 除其他培养参数外，细菌培养物收获时需说明细菌生长阶段。? 尽量缩短EV分离/浓缩前的储存时间，尤其是在样本未经过滤的情况下。? 当细菌EV样本来自体内或环境，应考虑宿主EV和环境中非目标EV的影响。? LPS（脂多糖）和LTA（脂磷壁酸）可分别作为革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的EV通用标志物，但在许多特定细菌物种中，该特定标志物仍然不可用。? 细菌EV的非囊泡共分离物可能包括毛、鞭毛、噬菌体和蛋白质、脂蛋白和核蛋白复合物。MISEV2023的建议旨在提高EV研究的严谨性、可重复性和透明度，帮助细胞外囊泡研究和应用领域的从业者根据EV来源、EV类型、研究内容、应用方向选择或制定最佳实践方案。[color=#191b1f]需要说明的是，[/color]MISEV2023的内容建立在MISEV2014和MISEV2018的基础之上，前两份指南中的指导建议很大程度上仍然有效，读者在参阅MISEV2023时应结合之前的文件。[color=#191b1f]下表列出了可供参考的文章：[/color][align=center][img=1.png,600,330]https://img1.17img.cn/17img/images/202403/uepic/1b5a57a4-f9c7-4abe-ac48-423a3c72de9f.jpg[/img][/align]参考：1.[i]权威发布！细胞外囊泡研究国际指南MISEV2023[/i] 2.[i]干货分享|外泌体研究红宝书—MISEV 2023解读（一）[/i] 3.[i]MISEV2023解读：全面认识细胞外囊泡[/i]附全文：[img]https://img1.17img.cn/17img/images/202101/pic/80056faa-b411-482e-9e52-14210fe10051.gif[/img][url=https://img1.17img.cn/17img/files/202403/attachment/07210f6f-ba10-4594-a029-01fcb39d3d64.pdf]J of Extracellular Vesicle - 2024 - Welsh - Minimal information for studies of extracellular vesicles MISEV2023 From.pdf[/url][来源：仪器信息网] 未经授权不得转载[align=right][/align]

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  • 小贝倾情助力细胞外囊泡研究 ——贝克曼库尔特“细胞外囊泡专题研讨班”纪实
    最近，小贝家分别在北京和广州举办了“细胞外囊泡专题研讨班”，获得老师和同学们空前热情的参与，有的甚至千里迢迢、不远万里专程参加。是什么引起大家如此高涨的参与热情呢？当前研究的热点——外泌体。对于外泌体（又称细胞外囊泡，Extracellular Vesicles），相信大家都不陌生，它是指细胞膜上脱落或由细胞分泌的，具有双层膜结构囊泡状异质性群体，包括外泌体（Exs）、膜微粒（MP）和微囊泡(EVs)。细胞外囊泡和细胞内囊泡，有着相似的磷脂双分子层结构，包含有蛋白和核酸等生物大分子，大小在40nm-1000nm，是细胞进行物质运输、信号转导、实现生理功能的重要工具。细胞外囊泡广泛存在于细胞培养上清及各种体液，参与细胞间通讯、细胞迁移和免疫调节等多种反应。囊泡水平升高与糖尿病、艾滋病以及癌症等疾病相关，有望成为这类疾病的诊断及评估疾病预后标志物。如今，越来越多的研究者开始着眼于对细胞外囊泡进行准确的定型和定量研究。2013年10月7日，诺贝尔生理学或医学奖授予了发现细胞囊泡运输调控机制的三位科学家。外周血中有着大量的外泌体，来自不同的细胞。另外，外泌体和肿瘤微环境、肿瘤细胞迁移有着神秘联系。对于这些未知的领域，目前还缺乏研究，主要原因在于对于这种200nm以下颗粒的检测，显微镜显得力不从心，电镜又高不可及。因此强大的工具和完美的解决方案的显得尤其重要。有鉴于此，我们有幸邀请到了来自 Beth Israel Deaconess Medical Center and Harvard Medical School的Vasilis Toxavidis和John Tigges——两位有着丰富的流式细胞术和外泌体研究经验的学者，请他们和国内的学者进行外泌体研究的交流，分享经验。8月24日，首都北京，骄阳似火，然而参加“贝克曼库尔特细胞外囊泡专题研讨班-北京站”活动的老师和同学，有着胜似骄阳的热情，有图为证。现场不得不临时加座，才能满足大家学习和交流的热情。8月29日，羊城广州，骤雨初歇，寒潮来袭，公路上随处可见台风肆略的痕迹，这些却丝毫没有阻挡来自全国各地的40多位老师的脚步。大家齐聚中山大学，热情参与我们广州站的活动。两场研讨班，早上均为报告部分。Vasilis Toxavidis和John Tigges从理论角度讲述了外泌体检测的问题、误区和解决方案；从散射光检测原理、流式细胞仪硬件、再到样本制备，系统的阐述了外泌体的检测，并以实例讲述了心肌细胞源外泌体和红细胞源外泌体的研究结果，提出了Nano Flow Cytometry（NanoFACS）的概念。首先，来自美国哈佛干细胞研究所资源总监、哈佛医学院贝斯以色列女执事医疗中心流式技术平台负责人Vasilis Toxavidis先为大家做了流式分析EVs的技术原理、硬件可行性等方面的报告。Vasilis以MoFloXDP和CytoFLEX为教学案例，深入浅出地讲解，时时博得与会者的掌声，给大家提供了流式在微颗粒检测研究的新思路。随后，美国哈佛医学院贝斯以色列女执事医疗中心外囊泡检测中心主任John Tigges进一步介绍了利用流式细胞术研究细胞外囊泡， 并结合HF患者EVs检测案例，抽丝剥茧，逐一分析如何解决细胞外囊泡检测中问题、缺陷，阐述EVs在疾病研究中的实际意义，使大家茅塞顿开。其幽默的演讲风格也深受老师们喜爱，引得台下提问连连，将整个研讨会推上了小高潮。接着，来自贝克曼库尔特生命科学部的霍德华，讲述了贝克曼库尔特的超高速离心机——Optima XPN在样本制备和外泌体获取方面的完整工作流程。超速离心分离，是从生物体液和细胞培养样品中分离纯化外泌体的黄金标准，可以准确地重复获取外泌体，同时最大限度减少蛋白质聚集体和其他膜离子的共纯化。上午的理论部分结束后，大家对细胞外囊泡检测，超离技术助力样本采集和精准流式技术助力囊泡研究有了全面、清晰、深刻的认识。北京站的实验操作部分，在中科院过程工程研究所的、阵容强大的三台CytoFLEX流式细胞分析仪旁展开。John Tigges和Vasilis Toxavidis现场演示了如何在CytoFLEX上进行外泌体的检测。利用CytoFLEX的WDM技术和灵活的滤光片调整特点，John Tigges轻松实现200nm以下的颗粒检测，并找到外周血中神秘的外泌体。CytoFLEX使用VSSC检测Megamix-Plus微球结果及线性表现：CytoFLEX检测血液中的细胞外囊泡结果：由于FAPD的优势CytoFLEX对颗粒大小的检测保持很好的线性。出众的分辨率不仅能将噪音与细胞外囊泡很好的分开，而且还可以对外囊泡群体进行细分，分别研究其抗体表达情况。广州站的实践操作部分在中山大学北校区医学院实验室进行。大家在两位美国专家的指导下，领略了MoFloAstrios EQ和CytoFLEX精准检测细胞外囊泡的神奇魅力。EVs的大小通常只有40nm-100nm，超出传统流式的检测范围。但MoFlo Astrios EQ的增强型双前向角设计和CytoFLEX的雪崩光电二极管以超高的分辨率和灵敏度，有效地区分噪音信号和检测囊泡。连续五轮操作培训，让操作者切身感受了一把迅速快捷、多参数细胞外囊泡检测。两场培训班内容丰富、实用，而又易于理解。到会的老师和同学纷纷表示获益匪浅。贝克曼库尔特的超高速离心机（Optima XPN）和超灵敏流式细胞仪（CytoFLEX）实现了双剑合璧，为科研工作者提供了完美且可行的外泌体检测解决方案。* 本产品仅用于科研，不用于临床诊断。(此项活动得到中国科学院过程工程所和中山大学的大力协助，特此表示感谢！)
    时间： 2017-09-11
    作者： 贝克曼库尔特
  • 细胞外囊泡又双叒叕大显身手！
    “学科交叉点往往就是科学新的生长点、新的科学前沿，这里最有可能产生重大的科学突破，使科学发生革命性的变化。同时，交叉科学是综合性、跨学科的产物，因而有利于解决人类面临的重大复杂科学问题、社会问题和全球性问题。”--中国科学院院刊 细胞外囊泡（EVs）作为递送载体，已被广泛应用于生化工程学、生物医学工程学、纳米材料学、分子影像学等交叉学科中。通过交叉学科的火花碰撞，利用前沿新技术，提高疾病治疗效果，造福广大病患。本文与您分享EV递送纳米抗氧化剂等应用案例，拓展您的课题研究思路。巨噬细胞EV参与“免疫调控-化学动力-乏氧激活 ”多级联动 2022年3月，深圳市第二人民医院李维平团队联合中国科学院大学化学工程学院魏炜团队共同发表题为“Exploration and functionalization of M1-macrophage extracellular vesicles for effective accumulation in glioblastoma and strong synergistic therapeutic effects”于《Signal Transduction and Targeted Therapy》期刊（IF：18.19）。 被称为“终结者”的胶质母细胞瘤（GBM）是颅内神经系统最常见的恶性肿瘤。临床治疗GBM以外科手术为主，辅助放化疗，但效果收效甚微。难以穿透的血脑屏障 （BBB） 阻止药物进入中枢神经系统，使得治疗难度雪上加霜。因此，亟需更为有效的药物递送策略。 研究人员利用M1型巨噬细胞来源细胞外囊泡（M1EVs），使其膜被两种疏水剂功能化：化学激发源CPPO（C）和光敏剂Ce6（C），并装载亲水缺氧激活原药AQ4N（A），构成的CCA-M1EVs可穿过BBB，并可趋化富集在GBM部位，通过调控巨噬细胞表型实现GBM微环境免疫调控，增加过氧化氢（H2O2）水平。H2O2和CPPO之间可进行反应，产生的化学能量进一步激活Ce6，产生大量活性氧，实现化学激发的光动力疗法（CDT）。由于该反应消耗氧气，肿瘤缺氧的加剧也导致无毒的 AQ4N 转化为有毒的 AQ4 用于化疗。因此，CCA-M1EVs在GBM中实现了免疫调控-化学动力-乏氧激活的多级联动协同作用，发挥了强大的治疗效果。 研究人员利用全自动Digital Western检测M1巨噬细胞和M1EV中CD9、CD81、ALIX、TSG101、iNOS、F4/80和GAPDH的蛋白水平（如上图b所示）。EV递送纳米抗氧化剂 2021年来自中科院过程所魏炜团队，联合上海交大医学院附属同仁医院等多家单位，共同发表题为“In situ growth of nano-antioxidants on cellular vesicles for efficient reactive oxygen species elimination in acute inflammatory diseases”于《Nano Today》期刊（IF：20.72）。 临床上常见的急性炎症疾病，有急性肠炎和急性肝损伤等等。病情严重的患者，会出现脏器功能紊乱甚至器官衰竭。急性炎症过程中，会产生大量的活性氧自由基（ROS）。ROS会引起细胞膜脂质过氧化，导致细胞膜通透性改变和进一步DNA损伤，进而引起器官功能障碍。ROS大量产生是体内炎症发生发展过程中的一个重要环节，因此需要高效手段，将药物富集在炎症部位，然后消灭ROS。 纳米抗氧化剂，例如氧化铈、氧化钼和氧化锰，可借助其催化活性清除ROS，以此减少ROS引发的组织损伤，并控制疾病进展。然而，这些纳米抗氧化剂在炎症组织中的蓄积量较低。研究人员利用红细胞囊泡递送纳米抗氧化剂，效果显著。该项研究的另一亮点是研究人员将具有组织修复功能的干细胞外泌体融合（ReMeV），并在此基础上原位生长氧化铈（shi）纳米晶体（Ce-ReMeV），用于重症急性肠炎和急性肝损伤的治疗，在有效清除ROS同时，还能修复受损组织和器官，在小鼠模型上取得了满意的效果。 研究人员利用全自动Digital Western检测外泌体 Marker（CD9）、外泌体和红细胞Marker（TSG101、HSP70）以及MSC生长因子（HGF）（如上图c所示）。每个样品仅需3μL。全自动Digital Western，为何备受大家的喜爱？ 传统Western Blot（WB）属于劳动密集型技术，时间长、步骤冗长、人为操作引入过多误差，最终导致数据质量低......最重要的是实在太影响心情！图片取材于网络 全自动Digital Western技术平台的横空出世，一扫传统Western带给广大科研工作者的阴霾，每一天都是做WB的良辰吉日，让您从此享受WB！节省出大量宝贵时间去专注于阅读、思考、交流、仰望天空、参与社团、思考人性、（校园恋爱）等更有价值的事务。全自动Digital Western检测全流程（上样后，剩下的一切都交给她，一顿晚饭的功夫拿到结果） 全自动数字式Western，带给您的仅仅是3 μL超微量的上样量？3小时出结果？全程自动化标准化？更重要的是真正数字化的高质量数据和全膜结果，让您的数据不被质疑！撤稿？不存在的！扫码索取全自动Digital Western产品资料解放双手，从此爱上WB，告别实验Emo！
    时间： 2022-04-11
    作者： ProteinSimple: a Bio-Techne brand
  • 重磅发布：细胞外囊泡研究国际指南MISEV2023
    近年来，细胞外囊泡 (Extracellular vesicles，EV)的研究热度正在持续增长，与EV相关的文献数量呈指数级增长，已成为生命科学和生物医学研究领域内的一大热点话题。前不久，国际细胞外囊泡学会（ISEV）发布了最新版的细胞外囊泡研究指南《Minimal information for studies of extracellular vesicles(MISEV2023): From basic to advanced approaches》，在MISEV2014和MISEV2018版本基础上整合了来自ISEV专家工作组和1000多名研究人员的反馈意见，加强了研究设计和实验细节，并为新的应用领域提出了建议和指导。MISEV2023重点对EV命名、样品收集和预处理、EV分离与浓缩、EV表征、EV研究技术方法、EV释放与摄取、EV功能研究、EV体内实验进行了介绍。（文末附全文链接）关于ISEV和MISEV简介MISEV指南由国际外囊泡协会(ISEV)编制，ISEV是研究和使用细胞外囊泡的科学家和临床医生的主要专业协会，通过其年会、专题研讨会和其他会议、同行评审期刊、在线学习平台以及与其他学会的合作，吸引了世界各地的不同研究人员群体。因此，ISEV具有独特的优势，可以指导制定和传播关于最佳实践指南和科学考虑的专家共识。MISEV 2014是ISEV发表的第一篇EV研究指南，旨在为EV研究提供可靠的支撑，MISEV 2018对EV研究发展过程中的方法和手段进行了深入的且批判性的评估，其中大部分内容至今仍然有效。而MISEV 2023与之前的版本一样，为EV研究人员提供了简明扼要的建议和指导，对 MISEV2018 中提出的要点进行了完善，并增加了对新发展领域的建议和指导。其目的是帮助EV研究和应用领域的从业人员针对每个EV来源、类型、研究问题或应用展开最佳实践。关于EV命名MISEV 2023保留了MISEV 2018的EV定义，但删除了2018年使用的“自然释放”的用词（新定义：EV是指从细胞中释放出来的颗粒，由脂质双层分隔，并且不能自行复制，即不包含功能性细胞核），以避免排除了通过细胞培养生产的EV。一般来说，ISEV建议使用通用术语“EV”和该术语的扩展，而不是使用具有误导性的术语，如与难以确定的生物发生途径相关的“exosomes（外泌体）”和“ectosomes（核外颗粒体）”。这两个术语是与假定的生物发生途径有关，需要谨慎使用且需要有强有力的证据。术语“exosomes（外泌体）”是指通过多泡体（MVB）释放的来自细胞内部的EV，而术语ectosomes（核外颗粒体，又称微囊泡Microvesicle、微粒Microparticle）是指细胞膜出芽形成的EV。由于目前大多数EV分离技术不能富集由不同机制产生的EV，且没有外泌体、核外颗粒体或其他EV亚型的通用分子标记。因此，ISEV不鼓励使用基于生物发生的术语，除非对此类EV群体进行了专门的分离和表征。相关术语及定义：EV的收集和预处理样本采集、预处理、储存等因素可能会对EV数量和质量造成影响，MISEV2023对需要注意的一些因素给出了建议。对于不同样本都适用的因素，给出了普适建议，另外也针对细胞培养物（cell culture‐conditioned medium，CCM）、细菌、血液、尿液、脑脊液、唾液、滑液、乳汁、实体组织共计9类EV来源样本的采集及处理给出了具体建议。1.血液血液是EV研究中最常见的生物体液样本，但血液样本面临供体变化、分析前处理、血液中血细胞、血小板、脂蛋白及其他蛋白成分的影响。基于此，MISEV2023对血液样本的收集与处理给出了以下建议：• 相较于其他样本，供体对血液及血液EV的影响较大，因此当收集血液样本时，需详细的记录和报告。• 静脉采血应使用管径较大的采血针，以最大限度减少血小板活化和溶血。为减少细菌和皮肤细胞污染、避免组织因子介导的血小板活化，弃去少量抽到的血液是一种有效的做法（例如，人类抽血时丢弃前面的2-3 mL）。• 选用与下游分析兼容的采血管和抗凝剂。• 采血后，应避免过度摇晃和低温，并尽快处理为血浆或血清，以减少血小板激活和EV释放。• 制备血浆或血清时，应选择能够有效去除血小板但不影响EV的方法。若使用离心法，吸取上清时应从上向下吸上清液，并在沉淀上方保留一定量的血浆或血清，以免干扰沉淀导致血小板释放。• 血液EV的主要污染物/共分离物包括血小板、脂蛋白、溶血产物以及大量可溶性/聚集蛋白，检测时需说明任一污染物。2.尿液尿液是继血液之后第二大用于EV研究的生物体液样本，可以通过非侵入性的方式连续获得大量样本。尿液EV (uEV)研究的挑战源于uEV的来源细胞不同，以及受到液体摄入量、采样时间、饮食、运动、年龄、性别、药物以及健康状况的影响。基于此，MISEV2023对尿液样本的收集与处理给出了以下建议：• 应使用无细胞尿液/无细胞的尿液生物库。• 在适当情况下，报告uEV污染物/共分离成分（THP、白蛋白、其他过滤到尿液中的蛋白）的去除方法和去除效果。• 为实现标准化，收集uEV和非EV尿液（如肌酐、PSA等）数据，用于估计绝对或相对排泄率。3.细胞培养物MISEV2018针对CCM中提出的建议仍然有效，包括但不限于描述培养基的组成和制备，记录生产细胞的特征、细胞培养条件、物理或化学刺激物处理（如果有）、CCM收获的频率和时间间隔及方法、EV分离之前CCM的储存处理。如果细胞来源不是已建立的细胞系，则应报告采集和预培养条件，如酶消化。• 如使用血清或其他添加剂，需说明来源和用量。如果使用的添加剂已经去除了EV，需说明去除方法并评估去除程度（包括稀释，通过离心的方法去除EV时稀释可能是必要的）。• 应将非条件（空白）培养基作为对照进行处理和定性，以评估培养基本身对EV检测的影响。4.细菌细菌EV和细菌来源的多样性，很难就样品类型、预处理、分离、收集和表征给出普适性建议。MISEV2023建议在处理细菌样本时需要注意以下事项：• 除其他培养参数外，细菌培养物收获时需说明细菌生长阶段。• 尽量缩短EV分离/浓缩前的储存时间，尤其是在样本未经过滤的情况下。• 当细菌EV样本来自体内或环境，应考虑宿主EV和环境中非目标EV的影响。• LPS（脂多糖）和LTA（脂磷壁酸）可分别作为革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的EV通用标志物，但在许多特定细菌物种中，该特定标志物仍然不可用。• 细菌EV的非囊泡共分离物可能包括毛、鞭毛、噬菌体和蛋白质、脂蛋白和核蛋白复合物。MISEV2023的建议旨在提高EV研究的严谨性、可重复性和透明度，帮助细胞外囊泡研究和应用领域的从业者根据EV来源、EV类型、研究内容、应用方向选择或制定最佳实践方案。需要说明的是，MISEV2023的内容建立在MISEV2014和MISEV2018的基础之上，前两份指南中的指导建议很大程度上仍然有效，读者在参阅MISEV2023时应结合之前的文件。下表列出了可供参考的文章：参考：1.权威发布！细胞外囊泡研究国际指南MISEV2023 2.干货分享|外泌体研究红宝书—MISEV 2023解读（一） 3.MISEV2023解读：全面认识细胞外囊泡附全文：J of Extracellular Vesicle - 2024 - Welsh - Minimal information for studies of extracellular vesicles MISEV2023 From.pdf
    时间： 2024-03-21
    作者： Ev
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