人载脂蛋白

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  • 脂蛋白脂肪酶 (from Pseudomonas sp.) lyophilized 10,000 U/vial for biochemistry EC 3.1.1.34
    脂蛋白脂肪酶 (from Pseudomonas sp.) lyophilized 10,000 U/vial for biochemistry EC 3.1.1.34
    供应商： 默克化工技术（上海）有限公司
    品牌： 默克
    价格： 面议
  • 游离DNA样本保存管品牌：广东国盛医学科技有限公司
    01 什么是冠心病?冠状动脉粥样硬化性心脏病简称为冠心病(CHD)，是一种缺血性心脏病。冠状动脉(冠脉)是向心脏提供血液的动脉，当冠状动脉发生粥样硬化引起管腔狭窄或闭塞，导致心肌缺血、缺氧或坏死而出现胸痛、胸闷等不适，这种心脏病为冠心病。02 冠状动脉为何会发生粥样硬化？ 冠心病是由冠状动脉壁上的斑块积聚引起的。斑块由胆固醇和动脉中的其他物质沉积物组成。斑块积聚导致动脉管腔不断变窄，而这可能部分或完全阻塞血流。这个过程叫做动脉粥样硬化。 斑块积聚过多，动脉管腔变窄会使血液难以通过。当心肌无法获得足够的血液时，就可能会导致胸痛或不适，称为心绞痛。心绞痛是冠心病最常见的症状。此外，随着时间的推移，冠心病还可以削弱心肌，使心脏无法正常的泵血，导致心力衰竭，还可能导致不规则的心跳，也就是心律失常。 03 冠心病有哪些诱因？ 影响冠心病的危险因素有很多，主要分为传统危险因素和“新”危险因素 传统危险因素20世纪60年代Framingham等研究发现的危险因素，包括年龄、性别、遗传因素、吸烟、高血压、血脂异常、糖尿病、超重、肥胖、缺乏体力活动、精神压力大、不健康饮食和大量饮酒等。其中，除了年龄、性别和遗传因素属于不可控的危险因素外，其余都是可以控制的危险因素，也就是说绝大部分冠心病危险因素是可以通过生活方式或药物干预而控制。 o 年龄: 年龄增长会增加动脉损伤和狭窄的风险。o 性别: 通常男性的冠心病风险更高，但绝经后女性的风险也增加。o 遗传因素:心脏病家族史与冠心病高风险相关，特别是近亲患有早期心脏病。o 吸烟: 吸烟的人患心脏病的风险显著增加，二手烟也会增加冠心病风险。o 高血压:没有得到控制的高血压会导致动脉硬化和血管壁变厚，从而缩小血液流经的管腔。o 血脂异常：血液中高水平的胆固醇会增加斑块和动脉粥样硬化形成的风险。其中低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平高，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平低，都会促进动脉粥样硬化的发展。o 糖尿病: 糖尿病与冠心病风险增加有关。2型糖尿病和冠心病具有相似的危险因素，如肥胖和高血压。o 超重或肥胖: 体重过重通常会加重其他危险因素。 “新”的危险因素 随着研究进展，学者发现还有一些危险因素，包括睡眠呼吸暂停、高敏C反应蛋白水平升高、高甘油三酯血症、同型半胱氨酸血症、子痫前期、自身免疫性疾病等，都是冠心病的危险因素。 04 脂蛋白与冠心病的关系 脂蛋白是在循环中运输脂质的复杂颗粒。尽管血脂异常与冠心病（CHD）风险的相关性已经为我们所熟知，但与脂蛋白（转运脂质）特征的相关性尚不清楚。最近的证据表明，这些相关性可能更直接地由含载脂蛋白B (ApoB) 的脂蛋白颗粒的总循环浓度所驱动。 尽管总ApoB水平能很好地预测冠心病（CHD）风险，但含ApoB的颗粒在不同类别之间存在很大差异。极低密度脂蛋白(VLDL)、中密度脂蛋白(IDL)和低密度脂蛋白(LDL)因大小和脂质组成而在不同类别之间和不同类别内变化。尽管在这一领域进行了大量研究，但这些不同的脂蛋白特征与冠心病风险的相关性仍不清楚。 近日，一项由英国牛津大学研究团队开展的研究成果发布在心血管疾病领域权威杂志JAHA上。这是为数不多的评估脂蛋白颗粒浓度、大小和成分与冠心病风险之间单独关联的大规模研究之一。该研究分析了英国生物库内89422名参与者（英国生物库是一项针对50万成年人的前瞻性研究），他们的血浆脂蛋白和载脂蛋白水平通过核磁共振波谱测量获得。受试者基线时没有冠心病。研究人员发现冠心病风险与极低密度脂蛋白(VLDL)、中密度脂蛋白(IDL)和低密度脂蛋白(LDL)浓度呈正相关，与高密度脂蛋白呈负相关，每增加一个SD的风险比(99%CI)分别为1.22(1.17-1.28)、1.16(1.11-1.21)、1.20(1.15-1.25)和0.90(0.86-0.95)。极低密度脂蛋白(VLDL)的较大亚类与冠心病风险的相关性较低，但这种相关性并没有因LDL或高密度脂蛋白大小而发生实质性变化。 考虑到脂蛋白颗粒浓度，脂质组成(包括胆固醇)与冠心病风险没有很强的相关性，除了LDL颗粒中的甘油三酯。载脂蛋白B与LDL浓度高度相关(r=0.99)，但在调整载脂蛋白B后，极低密度脂蛋白和高密度脂蛋白颗粒浓度仍与冠心病风险密切相关。 这项大型研究量化了核磁共振测量的脂蛋白特征与冠心病风险之间的关系。冠心病风险与颗粒浓度关系最为密切，单独测量脂蛋白浓度可能比测量载脂蛋白B更有价值，后者主要由LDL浓度单独决定。此外，有强有力的证据表明冠心病（CHD）与低密度脂蛋白颗粒的平均甘油三酯分子呈正相关，但在考虑脂蛋白浓度后，与总甘油三酯或其他脂质和脂蛋白组分呈正相关的证据很少。 05 国盛医学更加精准的血脂亚组分检测方案 血脂亚组分检测作为CVD精准诊断指标，美国已列入保险项目 （CPT编码 83701）。国盛微流控芯片HDL亚组分检测，全球领先的的国内独家产品，可以精细HDL亚组分型和快速简易，解决目前HDL难分离、重复性差等临床痛点，适用于心脑血管病早期筛查和疗效评估。
    供应商： 广东国盛医学科技有限公司
    品牌： 国盛医学
    价格： 面议
  • CHIRAL-AGP（酸糖蛋白）/CHIRAl-HSA（人血清白蛋白）手性色谱柱
    CHIRAL-AGP（酸糖蛋白）/CHIRAl-HSA（人血清白蛋白）手性色谱柱 &alpha -酸糖蛋白（AGP）是一种非常稳定的蛋白质，CHIRAL-AGP柱适用于反相色谱，在所有蛋白质键合手性柱中，具有最广泛的适用范围。其填料为美国药典USPL41指定填料。纤维二糖水解酶是CHIRAL-CBH柱的手性选择体。CBH是一宗非常稳定的酶，涂敷在5&mu m的球形硅胶颗粒上。CHIRAL-CBH柱应用于反相色谱， CHIRAl-HSA固定相：人血清白蛋白（HAS），蛋白质涂敷在5&mu m的球形硅胶颗粒上，部分货号：AGP 100.4 AGP 150.4 AGP 10.42 CBH 100.4 CBH 150.4 CBH 10.42 HSA 100.4 HSA 150.4 HSA 10.42 了解详情请登录北京绿百草网站：www.greenherbs.com.cn ,Tel:01051659766
    供应商： 北京绿百草科技发展有限公司
    品牌： 大赛璐
    价格： 面议
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人载脂蛋白相关的仪器

  • CM800全自动生化分析仪
    基本信息产品名称：CM800全自动生化分析仪注册信息：苏械注准20182400643测定原理：乳胶免疫比浊法，免疫比浊法，比色法测定方法：速率法，终点法，固定时间法测定项目数：同时最多检测69个项目分析速度：恒速800测/小时样本分注量：2.0μL～35.0μL（0.1μL步进）样本盘：137个样本位（含患者样本、校准、质控） 外圈：87个样本位 内圈：25个校准位、25个样本位试剂分注量：R1:20.0μL～300.0μL R2/R3/R4:0或20.0μL～300.0μL（1μL步进）试剂盘：试剂位：外盘有69个试剂位，内盘有45个试剂位 对应试剂瓶容量：20ML, 70ML制冷功能：冷却水循环制冷最小反应液量：180.0μL搅拌：搅拌强度可变，采用搅拌杆旋转方式进行搅拌反应温度：（37.0±0.3）℃恒温控制预热时间：不低于20分钟尺寸：1640mm(L)×940mm(W)×1215mm(H) 产品优势1、 高效的样本处理能力，恒速800T/h恒速，137个样本位，114个试剂位选配ISE模块200T/h165个石英玻璃比色杯，可单独更换，光学透性好，适合光学检测，可长期使用，节约保养及更换费用 2、 固体直热恒温系统—升温快、免维护采用固体直热恒温系统，加热速度快 ，减少仪器预热时间，恒温控制系统通过干式加热方式，使比色杯中的反应液恒定在37℃±0.2，免维护免保养，降低维护成本 3、 高效率3头搅拌棒—提高效率，避免交叉污染 3头搅拌，2重清洗，避免搅拌臂携带污染，降低对检测结果的影响。步进电机搅拌，保证转速准确、平稳，实时监测搅拌速度 4、 八阶温水清洗—效果更彻底智能全针立体清洗技术，彻底清洗加样针交叉污染小雨0.05%；前2阶为清洗液清洗，后4阶为纯水清洗，并具有防溢出功能，防止漫杯现象产生 5、 准确加样系统 180μL最小反应体积 2μL最小加样量高精密度注射器、内外壁抛光的加样针、变频液面检测技术，保证准确加样，CV≤2% 6、 智能在线装载系统检测过程中，试剂盒可以在线加载，智能按钮提示，并可转动试剂盘加载试剂。方便用户在测试过程中补充试剂，无需停机，提高仪器运行效率 临床应用主要用于辅助临床检测肝功能、肾功能、特种蛋白及风湿三项、糖代谢、血脂及心血管、胰腺炎、微量元素及电解质、心肌酶等相关疾病 检测项目肝功能总胆汁酸 TBAα-L-岩藻糖苷酸 AFU丙氨酸氨基转移酶 ALT天门冬氨酸氨基转移酶 AST碱性磷酸酶 ALPγ-谷氨酰基转移酶 GGT总蛋白 TP甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶 GPDA谷氨酸脱氢酶 GLDH白蛋白 ALB总胆红素 TB直接胆红素 DB前白蛋白 PA胆碱酯酶 CHE腺苷脱氨酶 ADA5’-核苷酸酶 5’-NT亮氨酸氨基肽酶 LAP单胺氧化酶 MAO 肾功能肌酐 CRE肌酐 CRE-E尿素 BUN尿酸 UAβ2-微球蛋白 β2-MG胱抑素C CysC中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白 NGAL微量白蛋白 mAlbN-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶 NAG 特种蛋白及风湿三项抗链球菌溶血素O ASO类风湿因子 RFC反应蛋白 CRP全量程C反应蛋白 CRP超敏C反应蛋白 hs-CRP降钙素原 PCT脑脊液与尿总蛋白 CSF视黄醇结合蛋白 RBP补体C3 C3补体C4 C4免疫球蛋白A lgA免疫球蛋白M lgM免疫球蛋白G lgG 糖代谢葡萄糖 GLU葡萄糖 GLU-HK葡萄糖 GLU-OX果糖胺 FMNβ-羟丁酸 D3-H糖化血红蛋白 HbA1c糖化白蛋白 GA乳酸 LAC 血脂及心血管甘油三酯 TG胆固醇 TCH高密度脂蛋白胆固醇 HDL-C低密度脂蛋白胆固醇 LDL-C载脂蛋白A1 ApoA1载脂蛋白B ApoB载脂蛋白E ApoE脂蛋白a Lp(a)同型半胱氨酸 HCY血管紧张素转换酶 ACE心型脂肪酸结合蛋白 H-FABP肌红蛋白 Myo心肌肌钙蛋白Ⅰ cTnI 胰腺炎淀粉酶 AMY脂肪酶 Lpsα-淀粉酶 α-Amylase 血栓及止血D-二聚体 D-Dimer 微量元素及电解质钙 Ca镁 Mg无机磷 P二氧化碳 CO2铁 Fe钠 Na氯 Cl钾 K不饱和结合铁 UIBC 心肌酶肌酸激酶 CK肌酸激酶MB同工酶 CK-MB乳酸脱氢酶 LDHα-羟丁酸脱氢酶 HBDH乳酸脱氢酶同功酶1 LDH1张经理 订购电话： 手机
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    厂商： 基蛋生物
    品牌： 未知
    型号： 800
    价格： 1 - 9999元
  • 人钙联蛋白（calnexin）ELISA试剂盒 400-860-5168转3826
    人钙联蛋白（calnexin）ELISA试剂盒用于体外定量检测体液，血清，血浆，细胞培养上清液，尿液，组织匀浆,心房水标本等中的钙联蛋白。
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    厂商： 量准（上海）医疗科技有限公司
    品牌： 量准/ELement
    型号： E10016-96T
    价格： 1800元
  • 膜蛋白转运追踪系统SURFE2R
    专门用于研究膜上的转运体、离子泵和离子通道研究的全自动设备。SURFE2R是一种小型的全自动化设备，一次记录一种膜样本。内置有控制电子部件、高精度液体加样枪和低噪音放大器。SURFE2R能够精确测量膜转运体蛋白质的活动和深度分析膜转运体蛋白质的功能。我们已验证，仅需少量的膜即可进行记录，膜的来源可以是活体组织、哺乳动物细胞、昆虫细胞、细菌、细胞器和脂蛋白体。单感受器芯片用于记录，它含有一薄层金电极，其表面镀有仿生涂层以便膜样本的贴附。同时，因为膜蛋白的活性课保持较长时间，同一个膜样本可以用于多个靶蛋白的研究。SURFE2R对各种各样的膜上的转运体、离子泵和离子通道进行高灵敏高效率的功能研究
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    厂商： 北京心动康达信息技术有限公司
    品牌： 未知
    型号： SURFE2R
    价格： 150万 - 250万元
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人载脂蛋白相关的试剂

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人载脂蛋白相关的方案

  • 人载脂蛋白H(Apo-H)检测试剂盒
    人载脂蛋白H(Apo-H)检测试剂盒人载脂蛋白H(Apo-H)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人载脂蛋白H(Apo-H)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人载脂蛋白H(Apo-H)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人载脂蛋白H(Apo-H)抗原、生物素化的人载脂蛋白H(Apo-H)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人载脂蛋白H(Apo-H)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度
  • 人载脂蛋白A5(apo-A5)检测试剂盒
    人载脂蛋白A5(apo-A5)检测试剂盒人载脂蛋白A5(apo-A5)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人载脂蛋白A5(apo-A5)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人载脂蛋白A5(apo-A5)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人载脂蛋白A5(apo-A5)抗原、生物素化的人载脂蛋白A5(apo-A5)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人载脂蛋白A5(apo-A5)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度
  • 人抗载脂蛋白抗体A1(Apo A1)检测试剂盒
    人抗载脂蛋白抗体A1(Apo A1)检测试剂盒人抗载脂蛋白抗体A1(Apo A1)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人抗载脂蛋白抗体A1(Apo A1)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人抗载脂蛋白抗体A1(Apo A1)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人抗载脂蛋白抗体A1(Apo A1)抗原、生物素化的人抗载脂蛋白抗体A1(Apo A1)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人抗载脂蛋白抗体A1(Apo A1)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度
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  • APOE（载脂蛋白E）不同表型分型

    APOE（载脂蛋白E）不同表型分型

    [align=center][b][font=宋体][font=Times New Roman]APOE[/font][font=宋体]（载脂蛋白[/font][font=Times New Roman]E[/font][font=宋体]）不同表型分型[/font][/font][/b][/align][b][font=宋体]背景[/font][/b][font=宋体][font=宋体]载脂蛋白Ｅ（[/font][font=Times New Roman]apolipoprotein E, ApoE[/font][font=宋体]）作为脂质转运蛋白和低密度脂蛋白受体的主要配体，在胆固醇代谢和心血管疾病中发挥重要作用。[/font][font=Times New Roman]ApoE[/font][font=宋体]有多种异构体，即 [/font][font=Times New Roman]ApoE2[/font][font=宋体]、 [/font][font=Times New Roman]ApoE3 [/font][font=宋体]和 [/font][font=Times New Roman]ApoE4[/font][font=宋体]，分别由[/font][font=Times New Roman]APOE[/font][font=宋体]的等位基因 ε[/font][font=Times New Roman]2[/font][font=宋体]，ε[/font][font=Times New Roman]3 [/font][font=宋体]和ε[/font][font=Times New Roman]4[/font][font=宋体]来编码；[/font][/font][font=宋体][font=Times New Roman]APOE4[/font][font=宋体]等位基因是阿尔茨海默病的主要危险因素，血清[/font][font=Times New Roman]ApoE[/font][font=宋体]增高与心血管疾病死亡率增加有关，而降低则与[/font][font=Times New Roman]AD[/font][font=宋体]相关死亡率增加有关；[/font][/font][font=宋体][font=宋体]这些研究发现是基于免疫法，如免疫透射比浊法。但基于免疫法的[/font][font=Times New Roman]apoE[/font][font=宋体]的研究数据差异较大；而基于[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]串联质谱法（[/font][font=Times New Roman][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS[/font][font=宋体]）的研究数据一致程度较高；[/font][/font][font=宋体][font=Times New Roman][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS[/font][font=宋体]在定义被分析物和抗干扰方面具有优势，且在血清载脂蛋白的绝对定量上已有较为成熟的应用。[/font][/font][b][font=宋体]实验方法[/font][font=宋体][font=Arial]1[/font][/font][font=Arial].[font=宋体]样品制备[/font][/font][font=宋体][font=Times New Roman]1.1 APOE[/font][font=宋体]混合轻标[/font][font=Times New Roman]mix[/font][font=宋体]线性[/font][font=Times New Roman]1[/font][font=宋体]溶液配制：[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]稀释剂：[/font][font=Times New Roman]0.1%SDC[/font][font=宋体]作为稀释剂[/font][/font][font=宋体][font=宋体]取浓度为[/font][font=Times New Roman]10 ng/[/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]L[/font][font=宋体]的[/font][font=Times New Roman]APOE1234[/font][font=宋体]各轻标肽段溶液[/font][font=Times New Roman]10 [/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]L[/font][font=宋体]至于离心管中（共[/font][font=Times New Roman]40 [/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]L[/font][font=宋体]），再加入[/font][font=Times New Roman]10 [/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]L[/font][font=宋体]稀释剂，混合成为[/font][font=Times New Roman]APOE[/font][font=宋体]混合轻标[/font][font=Times New Roman]mix[/font][font=宋体]线性溶液起始浓度最高点：[/font][font=Times New Roman]2 ng/[/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]L[/font][font=宋体]，共[/font][font=Times New Roman]50 [/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]L[/font][font=宋体]；[/font][/font][font=宋体][font=宋体]从[/font][font=Times New Roman]APOE[/font][font=宋体]混合轻标[/font][font=Times New Roman]mix[/font][font=宋体]线性溶液起始浓度[/font][font=Times New Roman]2 ng/[/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]L[/font][font=宋体]继续往下梯度稀释，[/font][font=Times New Roman]2000 pg/[/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]L[/font][font=宋体]、[/font][font=Times New Roman]1000 pg/[/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]L[/font][font=宋体]、[/font][font=Times New Roman]500 pg/[/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]L[/font][font=宋体]、[/font][font=Times New Roman]200 pg/[/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]L[/font][font=宋体]、[/font][font=Times New Roman]100 pg/[/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]L[/font][font=宋体]、[/font][font=Times New Roman]50 pg/[/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]L[/font][font=宋体]、[/font][font=Times New Roman]20 pg/[/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]L[/font][font=宋体]，以上[/font][font=Times New Roman]7[/font][font=宋体]各浓度点作为[/font][font=Times New Roman]APOE[/font][font=宋体]混合轻标[/font][font=Times New Roman]mix[/font][font=宋体]线性[/font][font=Times New Roman]1[/font][font=宋体]；[/font][/font][b][font=宋体][font=Times New Roman]1.2 APOE[/font][font=宋体]混合重标[/font][font=Times New Roman]mix[/font][font=宋体]溶液配制：[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]取浓度为[/font][font=Times New Roman]10 ng/[/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]L[/font][font=宋体]的[/font][font=Times New Roman]APOE1234[/font][font=宋体]各重标肽段溶液[/font][font=Times New Roman]10 [/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]L[/font][font=宋体]至于离心管中（共[/font][font=Times New Roman]50 [/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]L[/font][font=宋体]），再加入[/font][font=Times New Roman]50 [/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]L[/font][font=宋体]稀释剂，混合成为[/font][font=Times New Roman]APOE[/font][font=宋体]混合重标浓度最高点：[/font][font=Times New Roman]1 ng/[/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]L[/font][font=宋体]，共[/font][font=Times New Roman]100 [/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]L[/font][font=宋体]；[/font][/font][font=宋体][font=宋体]将[/font][font=Times New Roman]APOE[/font][font=宋体]混合重标浓度最高点稀释[/font][font=Times New Roman]10[/font][font=宋体]倍至终浓度为[/font][font=Times New Roman]200 pg/[/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]L[/font][font=宋体]作为混合重标[/font][font=Times New Roman]mix[/font][font=宋体]，共[/font][font=Times New Roman]500 [/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]L[/font][font=宋体]；[/font][/font][b][font=宋体][font=Times New Roman]1.3 [/font][font=宋体]配制[/font][font=Times New Roman]APOE[/font][font=宋体]混合线性标曲梯度：[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]稀释剂：[/font][font=Times New Roman]0.1%SDC[/font][font=宋体]作为稀释剂[/font][/font][font=宋体][font=宋体]取[/font][font=Times New Roman]APOE[/font][font=宋体]混合轻标[/font][font=Times New Roman]mix[/font][font=宋体]线性[/font][font=Times New Roman]1[/font][font=宋体]各浓度点[/font][font=Times New Roman]10 [/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]L+[/font][font=宋体]混合重标[/font][font=Times New Roman]mix10 [/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]L[/font][font=宋体]，加入[/font][font=Times New Roman]40 [/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]L[/font][font=宋体]稀释剂，涡旋混匀，总体积为[/font][font=Times New Roman]60 μL[/font][font=宋体]；[/font][/font][b][font=宋体][font=Times New Roman]2[/font][/font][font='Times New Roman'] [/font][font=宋体]仪器方法[/font][font='Times New Roman']2.1 [/font][font=宋体]质谱检测[/font][font=宋体]条件[/font][/b][font=宋体][font=Arial]Column:[/font][/font][font=宋体][font=Arial]ChromCore AQ C18 1.8 [/font][font=宋体]μ[/font][font=Arial]m[/font][font=宋体]，[/font][font=Arial]2.1[/font][font=宋体]×[/font][font=Arial]100 mm[/font][/font][font=宋体][font=Arial]Mobile Phase:[/font][/font][font=宋体][font=Arial]A) 0.1%FA-H2O[/font][/font][font=宋体][font=Arial]B) 0.1%FA-ACN[/font][/font][font=宋体][font=Arial]Gradient:[/font][/font][font=宋体][font=Arial]t (min)[/font][/font][font=宋体][font=Arial]%A[/font][/font][font=宋体][font=Arial]%B[/font][/font][font=宋体][font=Arial]0[/font][/font][font=宋体][font=Arial]95[/font][/font][font=宋体][font=Arial]5[/font][/font][font=宋体][font=Arial]1[/font][/font][font=宋体][font=Arial]90[/font][/font][font=宋体][font=Arial]10[/font][/font][font=宋体][font=Arial]10[/font][/font][font=宋体][font=Arial]80[/font][/font][font=宋体][font=Arial]20[/font][/font][font=宋体][font=Arial]10.5[/font][/font][font=宋体][font=Arial]60[/font][/font][font=宋体][font=Arial]40[/font][/font][font=宋体][font=Arial]11[/font][/font][font=宋体][font=Arial]10[/font][/font][font=宋体][font=Arial]90[/font][/font][font=宋体][font=Arial]13[/font][/font][font=宋体][font=Arial]10[/font][/font][font=宋体][font=Arial]90[/font][/font][font=宋体][font=Arial]13.5[/font][/font][font=宋体][font=Arial]95[/font][/font][font=宋体][font=Arial]5[/font][/font][font=宋体][font=Arial]15[/font][/font][font=宋体][font=Arial]95[/font][/font][font=宋体][font=Arial]5[/font][/font][font=宋体][font=Arial]Flow Rate:[/font][/font][font=宋体][font=Arial]0.3 mL/min[/font][/font][font=宋体][font=Arial]Temperature:[/font][/font][font=宋体][font=Arial]40 [/font][font=宋体]℃[/font][/font][font=宋体][font=Arial]Injection:[/font][/font][font=宋体][font=Arial]10 [/font][font=宋体]μ[/font][font=Arial]L[/font][/font][font=宋体][font=Arial]MS:[/font][/font][font=宋体][font=Arial]TSQ Altis[/font][font=宋体]三重四级杆质谱采用[/font][font=Arial]SRM[/font][font=宋体]模式进行检测，检测周期[/font][font=Arial]15 min[/font][font=宋体]；[/font][/font][font=宋体][font=Arial]Sample: [/font][/font][font=宋体][font=Arial]APOE[/font][font=宋体]（载脂蛋白[/font][font=Arial]E[/font][font=宋体]）[/font][/font][b][font=宋体][font=Times New Roman]2.2 APOE[/font][font=宋体]标样检测条件[/font][/font][/b][img=,526,]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/02/202302081625152027_6822_3237657_3.jpg!w658x478.jpg[/img][b][font=宋体][font=Times New Roman]3 [/font][/font][font=宋体]实验结果[/font][/b][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Times New Roman]3.1 APOE[/font][font=宋体]标样检测结果[/font][/font][/b][img=,552,]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/02/202302081625266439_6227_3237657_3.jpg!w690x380.jpg[/img][b][font=宋体][font=Times New Roman]3.2 APOE[/font][font=宋体]标样检测结果[/font][font=Times New Roman]-[/font][font=宋体]线性范围及内标重现性[/font][/font][/b][font=Calibri] [/font][img=,553,]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/02/202302081625429789_7475_3237657_3.jpg!w690x312.jpg[/img][b][font=宋体][font=Times New Roman]3.3 [/font][font=宋体]实际样品检测结果[/font][/font][/b][img=,552,]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/02/202302081625543206_6217_3237657_3.jpg!w690x318.jpg[/img][img=,553,]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/02/202302081626061074_8109_3237657_3.jpg!w690x317.jpg[/img][img=,553,]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/02/202302081626164568_1650_3237657_3.jpg!w690x269.jpg[/img][b][font=宋体][font=Times New Roman]4 [/font][font=宋体]讨论与总结[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]简单地说，本研究使用了[/font][font=Times New Roman]APOE1/2/3/4[/font][font=宋体]作为定量肽段，绝对定量方法使用合成的同位素标记肽作为内标物，检测样品中目标肽段的浓度；[/font][/font][font=宋体][font=宋体]结果表明，本实验室优化的前处理方法可尽可能实现该类肽段的释放，回收率达到[/font][font=Times New Roman]50-60%[/font][font=宋体]；[/font][/font][font=宋体][font=宋体]更重要的是，在实际样本的检测中，根据[/font][font=Times New Roman]APOE1/2/3/4[/font][font=宋体]四条肽段的出现情况，可以得出实际血浆提供者的[/font][font=Times New Roman]APOE[/font][font=宋体]基因型，此结果已经与基因检测结果进行核对，且成功率达到[/font][font=Times New Roman]100%[/font][font=宋体]；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]公司名称：[/font][/font][font=宋体][font=宋体]南京品生医疗科技有限公司[/font][/font][font=宋体][font=宋体]色谱柱信息：[/font][/font][font=宋体][font=Arial]ChromCore AQ C18 1.8[/font][font=宋体]μ[/font][font=Arial]m, 2.1[/font][font=宋体]×[/font][font=Arial]100mm[/font][/font]

  • 【分享】高密度脂蛋白胆固醇的检测方法及标准化研究进展

    众多流行病学研究证实，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平与动脉粥样硬化(AS)呈负相关。美国Framingham的研究显示，HDL-C每减少0.026 mmol/L(1 mg/dl)，冠心病(CHD)发生的风险将增加2%～3%。目前临床上已广泛采用HDL-C 众多流行病学研究证实，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平与动脉粥样硬化(AS)呈负相关。美国Framingham的研究显示，HDL-C每减少0.026 mmol/L(1mg/dl)，冠心病(CHD)发生的风险将增加2%～3%。目前临床上已广泛采用HDL-C下降作为CHD危险因素指标。低HDL-C是CHD的主要危险因素，而高HDL-C被认为是负危险因子，具有保护性。作者参考美国国家胆固醇教育计划(NCEP)有关文件及新近文献资料，对HDL-C检测方法及标准化问题作一简述。 一、HDL的生物化学 与乳糜微粒(CM)、极低密度脂蛋白(VLDL)和低密度脂蛋白(LDL)相比，高密度脂蛋白(HDL)是密度最大的脂蛋白(d=1.063～1.210kg/L)。其组分中蛋白质(Pro)、磷脂(PL)、胆固醇(chol)和甘油三酯(TG)各约占50%、25%、20%和5%。HDL中Pro主要是载脂蛋白(apo)AI和AII；chol占总胆固醇(TC)的25%～35%，酯化胆固醇(CE)和游离胆固醇(FC)之比约为3∶1。HDL可通过酶和受体的作用，将周围组织的chol移至肝脏降解处理，同时抑制细胞结合和摄取LDL-C，阻止chol在动脉壁的沉积，故HDL被认为是AS的预防因子。

  • 【分享】关于体检结果

    今天拿到体检表了，我看到了三个红色的触目惊心的向下的表示低于正常水平的箭头，一直有点发蒙！我是总胆固醇偏低、甘油三脂偏低、低密度脂蛋白偏低！ 三项低于正常。医师的建议是：血脂低：饮食全面、合理，增强体质，定期复查。难过了一会，上网查了一堆关于体检结果解读的内容，供大家了解。一般来说，血脂检查常需测定空腹血清的总胆固醇、甘油三酯和高密度脂蛋白－胆固醇(HDL-胆固醇)水平。在抽血前的最后一餐中，忌食高脂肪食物和饮酒，空腹12小时，抽取前臂静脉血。如果总胆固醇、甘油三酯高于正常水平，HDL-胆固醇低于0.90毫摩尔/升则可认为血脂异常。　为了进一步了解血脂生物节律的差异，应在1--8周内复查，结果仍属异常，即可确诊为高脂血症。吸烟、肥胖、糖尿病、肾病综合征、甲状腺功能减退和遗传因素等都可能是引起血脂异常的原因。因此，在发现自己血脂水平升高之后，应在医生的指导下做进一步的检查和治疗。　 1）除科研外，目前临床上常用的化验项目主要包括：总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白A、载脂蛋白B等6项。各级医院因医疗条件不同，以上项目不一定都能检查。　　 　　1. 在看化验单时最常遇到的问题是看不懂上面写的一些简写英文代号。在此，介绍一些化验单上多用的符号：　　① TC：代表血浆总胆固醇，也有用T-CHO代表血浆总胆固醇的。　　② TG: 代表甘油三酯： HDL-c代表血浆中高密度脂蛋白胆固醇。　　③ LDL－C：代表血浆中低密度脂蛋白胆固醇　　④ ApoA1：代表血浆中载脂蛋白A1。　　⑤ ApoB: 代表血浆中载脂蛋白 B。　　2. 看化验单时遇到的另一个问题就是这些指标的正常数值应该是多少。现介绍一般情况如下：　　① 总血浆胆固醇：3.36--5.78mmol/L(130--200mg/dl)。　　② 血浆甘油三脂：男性为0.45--1.81mmol/L(40--160mg/dl)；女性为0.23--1.22mmol/L(20--108mg/dL)；血浆中低密度脂蛋白胆固醇：0.9--2.19mmol/L(35--85mg/dL)；载脂蛋白A1：110--160mg/dL。　　③ 血浆中低密度脂蛋白胆固醇：＜3.12mmol/L(120mg/dL)；　　④ 载脂蛋白A1：110--160mg/dl；　　⑤ 载脂蛋白B：69--99mg/dl；　　 　　2）当发现血脂化验单上的以上数值超出正常范围时，首先应该检查一下血的样本是不是在空腹状态下采取的。一般要求病人在采血前一天晚10点钟开始禁食，于次日早上9点至10点钟采取静脉血。其次还应注意受试者的饮酒情况，因为饮酒能明显升高血浆中富含甘油三酯的脂蛋白及高密度脂蛋白浓度。再次，在分析结果时，应考虑到脂质和脂蛋白水平本身有较大的生物学波动，其中部分是由于季节变化、月经周期及伴发疾病等原因所导致。最后就要从临床角度寻找原因了，下面重点介绍一下总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白及载脂蛋白的临床意义。　　1. 总胆固醇的临床意义：① 增加见于胆道梗阻、肾病综 合征、慢性肾小球肾炎、淀粉样变性、动脉粥样硬化、高血压、糖尿病、甲状腺功能减退、传染性肝炎、门脉性肝硬化、某些慢性胰腺炎、自发性高胆固醇血症、家族性高a-脂蛋白血症、老年性白内障及牛皮癣等。② 减少见于严重贫血、急性感染、甲状腺机能亢进、脂肪痢、肺结核、先天性血清脂蛋白缺乏及营养不良。　　2. 甘油三酯的临床意义：① 增高见于高脂血症、动脉粥样硬化、冠心病、糖尿病、肾病综合征、胆道梗阻、甲状腺功能减退、急性胰腺炎、糖原累积症、原发性甘油三酯增多症。高密度脂蛋白胆固醇。② 减少的临床意义：提示易患冠心病。　　3. 低密度脂蛋白胆固醇增多的临床意义：　 提示易患动脉粥样硬化所导致的冠心病、脑血管病。　　4. 载脂蛋白的临床意义：ApoA、ApoA、ApoB可用于心脑血管风险度的估计，高密度脂蛋白ApoA；下降和ApoB增高在心脑血管病最为明显，还见于高脂蛋白血症和其他异常脂蛋白血症。　　最后需要说明，各个医疗单位由于使用的方法、实验的条件等差异，各项指标的正常值可能不完全相同。一般情况下，在化验单上都标有正常参考值，可对比测定的各项指标是否超过了正常范围。爱心提示：血脂低也是一个健康的指标。血脂低意味着很多慢性疾病的血脂是低的。代表这种病人的营养状况非常。低血脂既会降低血管壁的弹性，又可增加血管壁的脆性，以致当患者情绪激动、血压升高时很容易引起颅内血管破裂出血。可见血脂中的胆固醇和甘油三酯是维持人体健康不可缺少的物质，太高固然有害，过低也不利健康，因此正常人不可长期拒食所有含胆固醇的食物。

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  • 研究揭示仿生脂蛋白系统重塑肿瘤物理屏障增强T细胞浸润
    基于免疫检查点抑制剂（ICIs）的免疫治疗正在成为一种革命性的肿瘤治疗方案，仅适用于一小部分癌症患者。ICIs的临床反应主要依赖于肿瘤组织中浸润的效应T淋巴细胞（CTL）识别并杀死肿瘤细胞。然而，肿瘤组织中CTL浸润较为有限，且复杂的瘤内物理屏障严重阻碍CTL的浸润，削弱了ICIs的治疗效果。因此，如何重塑肿瘤内物理屏障以增强CTL的浸润成为提高ICIs介导的免疫治疗迫切需要解决的难题。　　1月29日，中国科学院上海药物所研究员张志文、李亚平，以及沈阳药科大学教授王思玲团队合作完成的最新研究成果，以Bioinspired lipoproteins of furoxans-oxaliplatin remodels physical barriers in tumor to potentiate T-cell infiltration为题，在线发表在《先进材料》（Advanced Materials）上。该研究提出并证实利用仿生脂蛋白系统高效递送一氧化氮（NO）供体-奥沙利铂前药，通过重塑肿瘤物理屏障促进CTL瘤内浸润、增强ICIs免疫治疗的新策略。 　　对乳腺癌及结肠癌的临床样本检测发现，肿瘤部位广泛存在各种细胞外基质组分但CD8+ T浸润严重缺乏。基于此，科研团队设计合成了一种细胞内还原响应的NO供体-奥沙利铂前药（FO），构建高效靶向瘤内各种基质细胞的仿生脂蛋白系统（S-LFO）。研究显示，S-LFO能够在肿瘤部位高效蓄积、渗透进入肿瘤深部区域，并可到达瘤内肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）、肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）和血管内皮细胞（ECs）等基质细胞。S-LFO处理后能够显著促进肿瘤血管正常化、灌注能力和血管密度，降低TAMs和CAFs的比例，清除Collagen、Fibronectin和chondroitin sulfate等主要细胞外基质成分，为促进CTL的瘤内浸润铺平了道路。进一步研究发现，S-LFO能够显著增加肿瘤部位CD3+CD8+ T细胞以及表达IFN-γ、Granzyme B亚型的比例，与对照组相比分别提高2.96、5.02和8.65倍，并显著促进CD8+ T细胞向瘤内4T1-GFP癌细胞区域的浸润和扩散能力，进而在胰腺癌PANC02、乳腺癌4T1和结直肠癌CT26等肿瘤模型中，与aPD-L1合用显著增强了抑制肿瘤生长和延长存活期的疗效。该策略为重塑肿瘤基质屏障提高CTL浸润增强ICIs的免疫治疗效果提供了新方法。　　　　　　　　　　研究工作得到国家自然科学基金、山东省自然科学基金和复旦-SIMM联合研究基金等的资助。　　论文链接
    时间： 2022-02-08
    作者： dahua1981
  • 全蛋白质组关联研究发现阿尔茨海默症发病新机制
    全球有3500万人深受阿尔茨海默症(AD)的困扰，但目前尚无临床有效的治疗手段。为了促进AD治疗手段的发展，研究者进行了大量的遗传学研究。已有研究者通过 GWAS鉴定出许多阿尔茨海默症风险基因，但这些风险基因是如何导致阿尔茨海默症的尚不十分清楚。全蛋白质组关联研究(Proteome-Wide Association Study, PWAS)通过蛋白质的功能变化将基因和表型联系起来，是一种新型的以蛋白质为中心的遗传关联研究方法，在人类遗传学研究领域具有广泛的应用前景。　　2021年1月28日，国际学术期刊Nature Genetics(IF=27.603)上报道了来自埃默里大学医学院题为“Integrating human brain proteomes with genome-wide association data implicates new proteins in Alzheimer’s disease pathogenesis”的研究文章。该团队运用全蛋白质组关联研究(proteome-wide association study，PWAS)，将阿尔茨海默症(AD)队列 GWAS结果与人脑蛋白质组进行了整合，旨在鉴定通过影响脑蛋白丰度而导致AD风险的基因，深入了解这些基因座如何影响AD的发病机制。　　研究结果　　1.PWAS鉴定出AD相关重要基因　　在发现阶段，作者收集到375例捐献者死后大脑的背外侧前额叶皮层(dPFC)样本，使用TMT质谱策略获得人脑蛋白质组数据。整合已有的AD GWAS结果与蛋白质组学结果，通过全蛋白质组关联研究(PWAS)鉴定出13个顺式调节脑蛋白水平的基因(图1，表1)。接下来，作者使用相同的AD GWAS数据与另一组独立的152例人脑蛋白质组数据整合分析，与前面发现的13个蛋白相比较，其中10个在PWAS阶段得到验证(表1)。　　图1 发现集AD PWAS曼哈顿图　　表1 AD PWAS鉴定13个重要基因　　2.重要风险基因COLOC和SMR分析　　为了研究调控脑蛋白的重要基因与AD是否存在因果关系，作者进行了贝叶斯共定位(COLOC)和孟德尔随机化(SMR)分析。首先，使用贝叶斯共定位(COLOC)检验发现13个基因中有9个符合因果关系。然后通过孟德尔随机化(SMR)分析，结果表明顺式调控蛋白丰度介导了这13个基因的遗传变异与AD的关联。总的来说，作者发现7个基因在COLOC和SMR / HEIDI分析的因果关系上具有一致的结果(CTSH，DOC2A，ICA1L，LACTB，PLEKHA1，SNX32和STX4)，另外有4个基因的因果关系在这两种分析中结果不一致( ACE，CARHSP1，RTFDC1和STX6)，EPHX2和PVR的结果不具备因果关系(表2)。　　表2 发现阶段AD PWAS中13个重要基因的 COLOC和 SMR分析3.确定11个AD PWAS重要基因　　通过验证队列重复和因果关系测试的结果，作者在13个通过PWAS发现的重要基因中，确定了11个与AD有因果关系的风险基因(CTSH，DOC2A，ICA1L，LACTB，SNX32，ACE，CARHSP1，RTFDC1，STX6，STX4和PLEKHA1)，其中9个重要基因在PWAS阶段得到验证(表3)。　　表3 总结11个AD PWAS重要基因，并证明与AD中的因果作用一致　　4.PWAS结果不受APOE e4影响　　载脂蛋白APOE e4等位基因与阿尔茨海默症密切相关，因此作者为了探究APOE e4是否影响了PWAS结果，从蛋白质组中去除掉APOE e4的作用，使用去除后的蛋白质组图谱进行了AD PWAS。分析发现了13个与发现阶段PWAS结果一致的重要基因和6个其他基因，且所有13个基因都具有与发现阶段PWAS中相同的关联方向。此外，COLOC和SMR / HEIDI测试的结果发现了与原始发现相同的因果关系证据，这些结果均表明本实验发现不受APOE e4的影响。　　5.TWAS锁定与PWAS相关基因　　众所周知，分子生物学的中心法则是遗传信息从DNA转录传递给RNA，再从RNA翻译传递给蛋白质。因此，作者收集到888个欧洲个体的大脑转录组数据，将AD GWAS结果与其整合，进行了AD的全转录组关联研究(TWAS)。AD TWAS鉴定了40个基因，其FDR为p0.05时，其基因调控的mRNA表达水平与AD相关(图2)。与蛋白质水平上鉴定出的11个潜在风险基因相比，ACE，CARHSP1，SNX32，STX4和STX6这5个基因与PWAS结果相似，与AD具有关联性。(表3)。　　图2 AD TWAS Q-Q图　　6.单细胞测序发现细胞类型特异性　　最后，作者使用背外侧前额叶皮层样本(dPFC)单细胞RNA测序数据进行分析，发现在先前确定的11个重要风险基因中，有6个基因呈现细胞类型特异性富集。DOC2A，ICA1L，PLEKHA1和SNX32富含兴奋性神经元，而CARHSP1在少突胶质细胞中富集，CTSH在星形胶质细胞和小胶质细胞中富集(图3)。　　图3 单细胞类型表达总结　　本文作者通过收集阿尔茨海默症(AD)患者队列，开展多中心、大样本的基因组学和蛋白质组学研究。运用全蛋白质组关联研究(PWAS)挖掘了十多个重要风险基因，这些风险基因可以通过改变大脑中蛋白质丰度进而影响阿尔茨海默症的发生，为AD的发病机制提供了新的见解，并为进一步治疗提供了潜在的靶标。
    时间： 2021-02-19
    作者： ONE
  • PNAS|沈庆涛团队引入“退火”技术提高冷冻电镜解析蛋白分辨率
    退火——在冶金学中很常见——将金属或合金加热到设定温度，保持该温度，然后将金属冷却到室温，以改善材料的物理性质，有时还改善材料的化学性质。退火材料倾向于采用同质状态并容易组装成三维 (3D) 或二维 (2D) 晶体。人们可以通过原子力显微镜 (AFM)、X 射线衍射 (XRD) 或电子显微镜 (EM) 轻松地观察到这种规则堆积。退火是否对生物大分子，尤其是蛋白质表现出类似的影响，是一个迷人的科学问题。2022年2月22日，上海科技大学沈庆涛研究员团队等在PNAS发表题为Annealing synchronizes the 70S ribosome into a minimum-energy conformation的研究论文，将退火技术引入冷冻电镜解析蛋白质结构，在模拟退火中引入了一个类似的概念，以预测生物大分子的最小能量构象。通过实验验证，在自由能分析中，以快速冷却速率退火可以将 70 S核糖体同步到具有最小能量的非旋转状态。此结果不仅提供了一种简单而可靠的方法来稳定蛋白质以进行高分辨率结构分析，而且有助于理解蛋白质折叠和温度适应。与金属和有机聚合物不同，蛋白质和蛋白质复合物通常是由化学上不同的亚基以不同的几何形状结合在一起的离散实体。这种显着的结构异质性阻碍了通过 AFM 或 XRD 直接确定结构。相比之下，cryo-EM 分辨率的最新进展为在单分子水平上获得高分辨率蛋白质结构提供了绝佳机会。通过使用冷冻电镜比较退火前后的详细结构，可以获得退火影响蛋白质构象的直接实验证据。退火提高了局部分辨率研究中，选择来自大肠杆菌的载脂蛋白状态 70 S核糖体作为模型，其中 30 S亚基经历热驱动的亚基间旋转并表现出显着的结构灵活性以及明显的自由能。在 0°C 下将纯化的脱基态 70 S核糖体培养 5 分钟，然后立即将核糖体快速冷冻以进行低温 EM 分析，这可能保留了与玻璃化之前相同的构象（描绘为未退火状态）。筛选了收集到的 70 S核糖体颗粒通过 2D 和 3D 分类丢弃明显的垃圾和拆卸的核糖体。根据金标准傅里叶壳相关性，从 200,000 个随机选择的粒子中重建得到最终分辨率为 2.6 Å 的结构。由于缺乏稳定因素，例如信使 (mRNA) 和转移 RNA (tRNA)，对未退火的 70 S核糖体的局部分辨率估计表明，在 2.6 至 7.2 埃范围内的整个密度图上存在可变分辨率（图 1A )。相对于 50 S亚基，30 S亚基——尤其是它的头部结构域——没有得到很好的解析，这在其他脱辅基态核糖体中很常见。图1 退火提高了 70 S核糖体的局部分辨率为了量化不同区域的分辨率变化，通过平均选定区域内的局部分辨率值来计算局部分辨率。分析表明，50 S亚基的平均局部分辨率为 3.1 Å，而 30 S亚基的分辨率要低得多——只有 5.2 Å。此外，30 S头域的分辨率更低——平均分辨率为 6.1 Å（图 1 B ）。50 S和 30 S亚基之间的亚基间棘轮是分辨率差的主要原因；30 S的亚基内漩涡亚基是次要的，这会降低头部域的分辨率。为简单起见，使用 30 S亚基的局部分辨率作为标记来监测退火对 70 S核糖体的影响。未退火的、加热的和退火的核糖体结构变化退火使柔性区域稳定退火诱导的分辨率改善在整个 70 S核糖体中并不均匀。相对于 30 S亚基的 1.5-Å 分辨率提高，良好分辨的 50 S亚基在退火后仅提高了 0.3 Å（即从 3.1 Å 值到 2.8 Å 值）（图 1 B ） . 因此，退火对具有更大结构灵活性的低分辨率区域特别有益。为了进一步验证这一推论，我们对未退火和退火 70 S之间相同子区域的平均局部分辨率进行了综合统计分析核糖体。例如，退火将不同区域的平均局部分辨率提高到 0.1、0.6、0.8、1.2 和 2.0 Å 的水平；未退火核糖体中相应区域的局部分辨率范围为 2.5 至 3.0、3.0 至 3.5、4.0 至 4.5、5.0 至 5.5 和 5.5 至 6.0 Å（图 2 A ） 。指数曲线与数据非常吻合，表明未退火的 70 S核糖体具有更大的灵活性，对应于退火后局部分辨率的更大提高。图 2 退火稳定了 70 S核糖体的柔性区域讨论不限于金属、合金或半导体，我们通过实验证明退火还可以使 70 S核糖体同步到具有窄构象分布的最小能量状态（图 3）。核糖体/核小体的结晶具有类似退火的处理，其中研究人员通常将核糖体/核小体加热到 37 °C 和 55 °C 之间，然后将它们降低到室温 (19 °C)。对 70 S核糖体进行严格退火以进行结晶将有助于探索退火对70 S核糖体的物理和化学影响，如在冶金学中。除了 70 S核糖体，在其他生物大分子上退火，特别是那些具有动态结构的大分子，将有助于验证该方法的普遍性。图3 模型说明退火可以使核糖体同步到最小能量状态并提高局部分辨率。显示了自由能曲线（实线）和粒子分布概率（浅绿色峰）。结构灵活性虽然对蛋白质功能至关重要，但阻碍了研究人员应用结构研究在分子水平上阐明功能的能力。持续的努力——例如关键残基的突变，引入额外的二硫键，添加抗体/结合蛋白 ，或在溶液中或甘油内交联/葡萄糖梯度——对于优化样品以提高结构稳定性很有用。然而，这样的努力耗时且缺乏明确的方向，最终的结构仅限于固定状态，有时甚至会在额外的操作后发生扭曲。退火——适当加热和冷却的组合——对蛋白质没有破坏性，是一种简便而可靠的高分辨率冷冻电镜方法。有趣的是，与通过戊二醛交联的 70 S核糖体相比，退火提高了 50 S和 30 S亚基的局部分辨率。研究人员还尝试通过在低温 EM 图像处理期间对柔性区域进行局部细化来提高局部分辨率。我们对未退火和退火核糖体的灵活 30 S亚基进行了局部改进。在局部细化后，未退火核糖体的 30 S亚基的平均局部分辨率提高了 ~1 Å，达到 4.2 Å。与通过退火提高分辨率不同，局部细化本身仍然导致 30 S亚基头部域的平均分辨率不足 5.5 Å 。显然，退火和局部细化通过不同的机制提高了局部分辨率。退火可以将生物大分子驱动到最小能量状态，并且无论区域大小如何，都可以全局提高整个地图的分辨率。作为对照，局部细化在算法级别上起作用，并且仅适用于大小合理的区域。当我们对退火核糖体应用局部细化时，30 S亚基的主体和头部结构域分别提高到 2.9 和 3.9 Å。这表明退火与柔性区域的局部细化兼容，并且可以进一步优化局部分辨率以进行详细的结构分析。可以使用退火将蛋白质同步到最低能量状态，这可能有利于许多单分子方法，例如光镊和单分子荧光共振能量转移 。人们还可以使用退火来研究温度适应和蛋白质折叠，并促进分子动力学模拟中的算法开发。因此，研究人员应彻底研究退火机制并进一步优化退火条件以提高分辨率。本研究由国家重点研发计划项目2017YFA0504800（Q.-TS）、2021YFF1200403（Q.-TS）和2018YFC1406700（Q.-TS）和国家自然科学基金项目31870743（Q. .-TS）等支持。论文链接：https://www.pnas.org/content/119/8/e2111231119#sec-6
    时间： 2022-02-22
    作者： 阳离子
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