人谷胱甘肽过氧化酶

请教,如何用分光光度法测定葡萄糖氧化酶和辣根过氧化物酶的活性?急!!!!!谢谢

什么是生物治理？ 　 　 生物治理指用微生物群体对既定环境污染体所进行的降解，转变和隔离。这个过程的先决条件就是在土壤或地下水中的微生物能够去除环境中的有机污染源。微生物留下的降解物是二氧化碳和水。 原地生物治理是指不挖掘受污染土壤而对原状生物修理。原地生物治理需要大量的氧分，这就意味着需要清理的区域必须是有氧环境，微生物将在有氧环境和营养物质的最佳增添量会生长，繁殖和消耗更多量的有害有机物质。 当使用生物治理时，保持有氧环境非常重要。要清理的特定区域必须长时间的供养氧气过氧化镁主要用于原地生物治理时氧气主要来源。原因在于这相关到过氧化镁的特定性质。 粉末状的过氧化镁能够稳定存在很长时间。总的氧气的释放期将持续3个月到1年，但不同的地方状况不同，主要由污染物的多少和地下水的流速而定。现场试验已表明，在大多碳氢化合物污染的地下水中镁化合物能够持续的释放氧气能够长达至少6个月。 过氧化镁是一种非毒性化合物，对蓄水层没有潜在的负面效应。过氧化镁和水反应的副产物是氧气和寻常的氢氧化镁，氢氧化镁实质上是不溶解的。因此，过氧化镁只对蓄水层释放出氧气，氢氧化镁只作为土壤的一个惰性部分残留于过滤袋中，可从注射井里取出。必须提到的是过氧化镁和氢氧化镁对人们的消费都是安全的，因为它们都用于普通药物的抗酸剂。 　 　 　 　 如何用过氧化镁进行生物治理？ 　 　 我们通常所知道的释放氧气的化合物过氧化镁(MgO2)能够提高蓄水层中溶解氧的浓度，能够创造有氧环境，刺激嗜油微生物在有氧的状况下将石油污染物降解成二氧化碳和水。 * 氧气的生成：过氧化镁和水结合时，按照下面的反应释放出氧气： MgO2+ H2O -- 1/2 O2+ Mg(OH)2 * 应用方法用可回收的过滤袋，或以泥浆状直接推进注入的办法加入到蓄水层中。在移出地下储罐或通过挖掘治理而导致的明开挖位置，把回填之前用过的氧化镁干粉和轻度污染的土壤混合。一般情况下，施加在土壤中的过氧化镁至少是每吨土壤100克，一吨土壤过氧化镁的用量最好是处于一公斤到十公斤之间。 * 使用：在石油污染治理中，使用过氧化镁效果显著： （1）在蓄水层中，为生物修复的足够养分已经存在，所有的溶解氧用来加速污染物的生物降解速度； （2）作为氧气屏障控制地下水的烟羽污染。 （3）作为主动的现场治理，例如用水泵先抽再处理等其它一些物理方法已不再奏效时，过氧化镁做为一步纯化精制的过程，以达到预期的污染物复原的水平。 （4）作为供氧剂，过氧化镁可和其它的注入生物治理产品混合，直接在蓄水层中加入营养素或微生物。

大球盖菇过氧化物酶及超氧化物歧化酶的研究 张琪林1,王红2(1运城学院生命科学系,山西运城044000 2运城学院生化实验中心,山西运城044000) 摘　要:采用聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳法测定大球盖菇过氧化物酶和超氧化物歧化酶(SOD)同工酶活 性,结果表明大球盖菇过氧化物酶有4种同工酶,比移分别是:0.13、0.18、0.25、0.32,其活性大小接近. SOD三种都有,比移分别为0.20、0.21、0.25,以CuZn-SOD活性最大,Mn-SOD活性较小.CuZn-SOD 及Mn-SOD辅因子易于丢失,应用时应予以注意.关键词:大球盖菇 过氧化物酶 超氧化物歧化酶 聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳中图分类号:Q935　文献标识码:A大球盖菇(Strophariarugoso-annulate)栽培广 泛,食药两用,深受菇农与消费者青睐,栽培研究颇 多,生理研究也日渐深入.已有液体培养氮碳营养 源[1]、与pH关系[2]、胞外酶特性[3]等研究报道,而 胞内酶研究报道尚未见到.过氧化物酶、超氧化物 歧化酶是机体清除H2O2、超氧离子(O-2)等活性氧 的氧化还原酶.[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/03/200903260925_140607_1614854_3.gif[/img]对生物抗氧化、防辐射、抗衰老等方面都有重要作 用,尤其是SOD.本文采用聚丙烯酰胺凝胶圆盘电 用方法鉴定大球盖菇上述两种酶的活性及种类,以 期为大球盖菇的生理生化研究和大球盖菇的应用 提供理论依据.1　材料与方法1.1　材料供试菌株引自河南省清丰县食用菌技术推广 中心.所用化学试剂均为分析纯.1.2　方法1.2.1　菌丝培养　20%土豆浸汁1000mL,蔗糖 20g,蛋白胨2g,磷酸二氢钾2g,硫酸镁1.5g,pH值 自然.分装于300mL锥形瓶,每瓶50mL,高压灭菌.接种后25~28℃恒温摇床培养21天,振荡频 率为120r/min.1.2.2　酶液制备　菌丝冲洗干净后,于-4℃冷冻 12h.按菌丝∶0.1MpH7.4磷酸缓冲液(冷藏)∶石 英砂=1∶2∶0.2比例混合.冰浴磨成匀浆.在 10℃以下环境离心(4000r/min,15min).取上清液 5份与40%蔗糖(冷藏)、0.01%溴酚蓝各1份混 合,置冰箱备用.1.2.3　电泳　方法为聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳. 样品分离胶浓度为7%,pH8.9.浓缩胶浓度为2. 5%,pH6.7.电极缓冲液为Tris-甘氨酸缓冲液, pH8.3.点样量为30μL/管.以溴酚蓝为指示剂.电 流开始为10mA,电泳两分钟后加大至50mA.待溴 酚蓝移至凝胶柱下端附近时停止电泳.电泳环境温 度为10℃,时间1.2h.1.2.4　染色1.2.4.1　过氧化物酶染色　A液:0.4g联苯胺加 入3mL冰醋酸于80℃溶解,加入17mL蒸馏水,随 用随配.B液:4%氯化铵.C液:5%EDTA.D液:0. 3%H2O2.按等体积加8倍水混合,量以淹没胶柱 为度.剥胶后立即放入染液,等到有蓝色谱带出现 后,取出用水冲洗干净,再用7%醋酸脱色漂洗后 观察.1.2.4.2　SOD染色　(1)对照a、在2.45×10-2M 氯化硝基四氮唑蓝(NBT)液中黑暗下浸泡1h,温 度37℃.b、在2.8×10-2M四甲基乙二胺、2.8× 10-5M核黄素和在3.6×10-2MpH7.8磷酸缓冲 液中黑暗下浸泡1h,温度37℃.c、在1×10-4M EDTA,5×10-2MpH7.8磷酸缓冲液中,距40W日 光灯20cm光照20min.(2)添加辅基处理.在(1 中分别添加5mMNa2SO4 FeSO4 MnSO4 CuSO4+ ZnSO4 FeSO4+MnSO4+CuSO4+ZnSO4.(3)添加 抑制剂处理.在酶液中分别添加10mMKCN或 30%氯仿-乙醇,其他同上.2　结果与讨论2.1　过氧化物酶谱及分析[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/03/200903260926_140608_1614854_3.gif[/img]结果如图1.从图1可见,大球盖菇菌丝体过 氧化物酶有4条带.比移分别为0.13,0.18,0.25, 0.32.其活性大小接近.2.2　超氧化物歧化酶谱及分析(1)添加SOD辅因子试验结果见图2.从中可 见共有三条带.比移分别为A:0.20,B:0.21,C:0. 25.都有B带,但加铁处理(3、6)的较亮,说明B带 是Fe-SOD,铁离子对该SOD活性有明显的增强作 用.没有加铁的处理(1,2,4,5)SOD也有活性,说 明铁与酶蛋白的结合较牢固,不易丢失.1,2,3,5 无A带,4,6有,说明A带是Mn-SOD.同理,C带为 CuZn-SOD.未加锰、铜、锌盐的没有相应的带,说 明锰、铜、锌与酶蛋白的结合较为松散,易于丢失. 比较三种SOD,以Mn-SOD活力最小,CuZn-SOD 活性最大.(2)添加抑制剂试验结果为:加KCN后,显色 结果无C带 加氯仿-乙醇后,无A带.已知10mM KCN抑制CuZn-SOD,30%氯仿-乙醇抑制Mn- SOD[4].说明2.2.1结论是正确的.综上所述,大球盖菇菌丝体抗氧化酶比较丰 富,过氧化物同工酶有4种 超氧化物歧化酶有3 种,以CuZn-SOD活性较高,Mn-SOD、Fe-SOD活 性较低,但CuZn-SOD、Mn-SOD辅因子易于丢 失,应用时应予以注意.参考文献:[1]张琪林,王红.大球盖菇液体培养碳氮营养源研究[J].食用 菌.2002,24(1):6.[2]王红,张琪林.大球盖菇液体培养与pH值关系研究[J].山西 师范大学学报(自然科学版).2003,17(增1期):108~109. [3]王红,张琪林.大球盖菇液体培养胞外酶特性研究[J].食用 菌.2003,25(2):8~9.[4]李中振,田廷亮.灵芝超氧化物歧化酶同工酶研究[J].中国食 用菌.1997,16(4):32~34.