多种样品

同一样品检测方法多种简介 维生素B2又叫核黄素，微溶于水，在中性或酸性溶液中加热是稳定的。是体内黄酶类辅基的重要组成部分（黄酶在生物氧化还原中发挥递氢作用），当缺乏时，就影响机体的生物氧化，使代谢发生障碍。其病变多表现为嘴、眼和外生殖器部位的炎症，如口角炎、唇炎、舌炎、眼结膜炎和阴囊炎等，故本品可用于上述疾病的防治。人体内维生素B2的储存是很有限的，因此每天都要由饮食提供，食用肉制品是维生素B2的重要来源，因此动物饲料中该成分的含量就有严格要求。液相色谱法是检测该成分的重要检测方法，方法种类很多，下面就具体介绍下。实验部分1 原理 准确称取适量某饲料样品，用乙二胺四乙酸二钠提取液提取，样品经进样器进入高效液相色谱系统，通过C18反相色谱柱分离，紫外检测器（或荧光检测器）检测，外标法（保留时间定性，峰面积定量）分析计算，得出结果。2 试剂2.1 甲醇：色谱纯2.2 乙腈：色谱纯2.3 磷酸二氢钾：分析纯2.4 超纯水2.5 维生素B2标准品：纯度：99.9±0.5%2.6 乙二胺四乙酸二钠：分析纯2.7 庚烷磺酸钠：分析纯2.8 乙酸：分析纯2.9三乙胺：分析纯 提取液配制：在已经装入700ml去离子水的1000ml容量瓶中，加入50mg乙二胺四乙酸二钠，待全部溶解后，加入25ml乙酸5ml三乙胺，用去离子水定容至刻度，摇匀，即得。3 仪器设备3.1 高效液相色谱仪： 紫外检测器（荧光检测器）；柱温箱；高压恒流泵；自动进样器3.2 电子天平：0.0001g 3.3 溶剂过滤器3.4 超声波清洗仪3.5 恒温水浴锅4 具体操作4.1 标准曲线的制备4.1.1 维生素B2标准储备液的配制 精密量取维生素B2 0.0100g与200ml棕色容量瓶中，加1ml乙酸在沸水浴80℃～100℃煮沸30min。待冷却至室温后，用纯水定容至刻度，此溶液4℃避光保存。4.1.2 维生素B2标准工作液的配制 准确吸取维生素B2标准储备液5.0ml于50.0ml的棕色容量瓶中，用流动相定容至刻度，混匀，即得。该溶液的浓度为5ug/ml4.2 样品的配制 精密称取某饲料样品0.5g （精确至0.0001g），置于100ml棕色容量瓶中，加入三分之一提取液于沸水浴80℃～100℃煮沸30min。待冷却至室温后，加入14ml的甲醇溶液，用提取液定容至刻度，超声波振动混匀，过滤，待测。 样品称样量为0.5049g。5 测定5.1 色谱条件检测器：紫外检测器色谱柱：Promosil C18 250*4.6mm，5um色谱柱检测波长：267nm流动相：在已经装入700ml去离子水的1000ml容量瓶中，加入50mg乙二胺四乙酸二钠，1.1g庚烷磺酸钠，待全部溶解后，加入25ml乙酸5ml三乙胺，用去离子水定容至刻度，摇匀。用乙酸或三乙胺调节该溶液的pH值为3.4，滤膜过滤后，取该溶液860ml与140ml甲醇混合，脫气，待用。流速：1mL/min柱温：室温进样量：10.0uL5.2 样品测定及计算计算公式：样品中各物质的含量计算公式：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2015081515131738_01_2536753_3.pngD----试样中维生素B2的含量，以（mg/kg）表示V--- 试样总稀释体积，单位（mL）P3----试样溶液峰面积值P4-----维生素B2标准工作液峰面积值ρ2----维生素B2标准工作液浓度。单位为ug/mlm2----样品质量，单位（g）5.3 标准品及样品谱图维生素B2标准品色图谱：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2015081515313565_01_2536753_3.png空白样品测试色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2015081515313964_01_2536753_3.png饲料样品色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2015081516135185_01_2536753_3.png6 结论 以上检测某饲料中维生素B2的方法操作简单，检出限低，结果准确、可靠。 该方法适用检测蛋该饲料中维生素B2。 下面我们改变下流动相看看效果。 流动相变成0.05mol/L磷酸二氢钾：乙腈=65:35（V：V），其它条件及实验步骤不变。维生素B2标准品色图谱： http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508151536_560982_2536753_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508151537_560983_2536753_3.png空白样品测试色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2015081515371266_01_2536753_3.png饲料样品色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2015081516135761_01_2536753_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508151619_561001_2536753_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2015081515512807_01_2536753_3.png 经计算该样品中维生素B2含量为161.35mg/kg。 该方法检测效果也不错，与上面方法相比，优点是流动相配制简单，检测时间短，检测费用相对低；缺点是分离度相对差，对于某些复杂样品准确度可能不如第一种方法（准确度也是很高的，只是相对而已）。 下面我们再介绍种荧光检测器检测该饲料中维生素B2的方法。 荧光检测器检测和紫外检测器检测主要就是波长选择不一样，荧光检测器检测维生素B2激发波长：λEX=470nm,发射波长：λEX=535nm，流动相0.05mol/L磷酸二氢钾：乙腈=65：35（V：V），其它色谱条件及实验步骤不变。标准品色谱图谱http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2015081515520683_01_2536753_3.png空白样品色谱谱图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/201508151