多形性成胶质细胞瘤

赛多利斯Incucyte 实时活细胞分析系统，可有效捕获培养箱中细胞的变化。系统支持高分辨率荧光和明场图像采集，能够实现数小时、数天或数周内数据的实时记录。系统使用灵活，从增殖分析到肿瘤球免疫杀伤检测，均可协助用户实时观察和定量复杂的生物变化。集成式软件可以简化数据分析，快速获得结果，并生成可供发表的图表和绘图。 技术优势 1. 灵活简单的样品制备：兼容多种培养容器- 在正式开始实验前，可用免标记法分析细胞融合度，监测培养瓶/ 培养皿，以确保细胞健康- 可用 96 和 384 孔板同时开展多种实验，一次性可容纳多达6 块板Incucyte 试剂可显著提高效率- 检测试剂对细胞健康和形态无影响- 采用经过验证的活细胞检测试剂和配套方案，可节省实验优化和问题查找分析的时间2. 简单灵活的实验设置快捷设置，一步完成- 向导式操作界面，可指引用户设置自动采集和分析参数- 可容纳多个用户同时使用，支持不同的采集频率和图像放大倍数- 远程监测：凭借免费许可证，即可从联网端口控制您实验室里的Incucyte 系统 向导式界面可快速进行实验设置，即使您初次使用，也能轻松完成。3. 多种成像模式获取和查看实时图像- 可采集优质高清相差、红色和绿色荧光图像以及视频- 通过自动对焦，可选择 4 倍、10 倍或 20 倍物镜成像，同时用于多个应用领域- 对细胞干扰最小- 别具匠心的移动光学设计即细胞保持静止状态，让光学元件移动，尤其适用于分析敏感和非贴壁细胞- 采取非侵入性、非干扰性图像采集模式，对整个生物学过程进行长期监测，展现出其本来状态 自动获取实时图像。4. 实时自动分析-可重复的高效图像：根据不同应用领域，选择相应的数据处理和分析模块，可对数千幅图像进行可重复的定量分析，消除操作偏差- 强大的可视化图像和动态检测：专为生物学家开发的可定制的灵活工具，能够快速评估结果，缩短从生成数据到发表的时间 使用Incucyte VesselView 立即查看培养容器中所有位置的图像，并快速评估实验结果，对感兴趣的图像可以放大通过mask 自动识别感兴趣的区域生成时间间隔的图表，可直接用于演示使用Incucyte PlateGraph可立即查看所有96 或384 孔动态趋势，并导出数据以计算EC50 或IC50 值 广泛应用 细胞健康- 细胞增殖：采用免标记法实时自动监测细胞生长，或用NucLight&trade 核标记法实时自动测量活细胞数目。- 细胞凋亡：采用简单的均相方法实时检测活细胞凋亡情况。- 细胞毒性：采用均相法实时检测细胞活性，操作简单，适用于筛选。- 神经突分析：对单纯的神经元培养物、及其与星形胶质细胞的共培养体系，自动实时检测神经突动力学。- 肿瘤球：实时监测肿瘤球的形成、生长和健康状态，并进行定量分析。细胞迁移和侵袭- 划痕迁移和侵袭：研究处理因素对细胞迁移（2D基质）或侵袭（3D凝胶）的效应。- 趋化作用：使用ClearView&trade 96孔板查看并确认趋化因子介导的趋化迁移或侵袭效应。细胞功能- 免疫细胞成簇：无需从培养箱中取出，即可对细胞成簇和扩增进行观察和定量分析。- 抗体内化：适用于抗体筛选或治疗分析的快速、动态、高通量检测。- 免疫细胞杀伤：通过对NucLight&trade 核标记的细胞直接计数或利用IncucyteCaspase 3/7 试剂检测凋亡，来分析肿瘤细胞死亡。- 细胞吞噬：对细胞吞噬pHrodo标记的生物颗粒或靶细胞进行连续分析，并生成视频。- 血管生成：使用我们的共培养检测全套试剂盒，完成血管形成的动力学分析。监测细胞和其他工作流程- 活细胞免疫细胞化学：采用新的免疫细胞化学方法揭示表面蛋白表达的动力学。- 细胞培养QC：无需从培养箱中取出细胞，即可免标记监测细胞形态和增殖。- 克隆稀释：自动扫描克隆，并通过全孔分析验证单克隆性。- 转染效率：采用GFP/RFP 监测和定量分析基因转染的效率和动态变化。- 报告基因：实时检测启动子驱动的重组GFP/RFP 报告基因表达活性。提出新问题- 设计以前无法开展的新实验- 可用于日常监测，也可通过基于图像的动态检测，解答独特的科学问题获取新答案- 实时连续分析，不错过任何一个数据点- 剖析随时间变化和因细胞而异的生物活性- 通过图像和视频这种可视化方式来验证实验结果保护培养的细胞- 无需将细胞从培养箱内取出或干扰培养环境，即可完成细胞分析- 采用的试剂不会影响细胞健康和形态提高效率- 自动获取和分析图像，轻松便利- 兼容 96和 384 孔板，并完成多重性检测- 同时可容纳多个用户和多种应用

Maestro Edge/Pro 高通量微电极阵列系统-对神经胶质瘤致癫痫潜在机制进行研究 含有代谢酶异柠檬酸脱氢酶 (IDH) 突变的胶质瘤脑肿瘤患者经常会出现难治性癫痫发作，但其致病机制尚不清楚。在这项研究中，研究人员使用神经胶质大鼠皮层细胞培养模型和来自 IDH 突变型胶质瘤患者的人类皮层组织来证明 D-2-羟基戊二酸 (D-2-HG)（一种由肿瘤亚型产生的代谢物）会改变代谢谱和上调哺乳动物周围皮层神经元中的雷帕霉素靶蛋白 (mTOR) 信号传导，从而促进神经元尖峰和癫痫发作活动。 为了在存在神经胶质瘤代谢物的情况下检查体外神经网络活动，研究人员使用了 Axion 的 Maestro Pro 多电极阵列 (MEA) 平台和包含神经胶质瘤培养物的定制 transwell共培养小室。 研究结果表明，癌代谢物 D-2-HG 通过激活 mTOR 通路促进周围神经元的癫痫发作活动——这一重要发现提高了对 IDH 突变神经胶质瘤患者癫痫发生的理解，并可能导致新的治疗方法。神经网络功能实时检测攻略◆ ◆ ◆ ◆PART I 原理介绍为什么要检测神经电活动？研究证明构建体外神经元疾病模型是研究神经元功能和神经系统复杂疾病的一个有效策略。细胞成像、基因表达分析或者蛋白印迹这些方法能够全面地反应神经疾病模型的复杂性吗？神经网络功能又是怎样的？科学家们很难得到一个完整的答案。而使用Maestro MEA技术，任何科学家都能够快速简单地高通量检测活细胞的网络电活动。 什么是高通量微电极阵列？ Axion的MEA板底部紧密嵌合了呈网格状的电极阵列。科学家们可以在电极上贴附培养神经元等可兴奋性细胞，它们会逐渐成熟并形成网络，并最终生成网络功能。这样MEA板上每个电极就都可以捕捉到毫秒级的神经元自发放电，为您在时间和空间两个维度提供精准的实验数据。您还可以通过电刺激或者光刺激进一步拓展实验设计。适用样本原代神经元细胞，iPSC衍生神经元，脑片，iPSC衍生神经球/类器官/迷你大脑三个层面了解神经网络功能神经细胞(橙色)经培养覆盖于固定在MEA板底部的电极(灰色)上。Maestro MEA系统检测神经网络的功能，包括电活动、同步性和网络震荡。Activity 电活动 如何判断神经元有没有功能？动作电位是一个重要标志。动作电位发放频率高表明其放电频繁；发放频率低意味着神经元电生理功能可能已受损。Synchrony 同步性 如何评判神经元间突触的功能？突触的存在使得神经元之间的联系成为可能。一个神经元的动作电位藉此得以影响到另一个神经元发放的可能性。同步性检测能够反映出突触连接的强弱，及不同的神经元在毫秒级别时间范围内产生同步放电的可能。Oscillation 网络震荡 如何确定样本的网络功能？有功能的神经网络是由兴奋性和抑制性神经元共同构成的。它的一个重要特征就是神经震荡，即不断变化中的神经活动高潮-低谷周期。而一个MEA孔内检测到的所有神经元电发放在时间轴上的规律就是该样本的震荡数据。PART II Maestro系统介绍Maestro MEA实验流程Maestro使得MEA实验简单到超乎想象。仅需三步：A将神经元培养在Axion MEA板上。B将MEA板放入Maestro MEA系统，静待环境仓达到温度和气体浓度的平衡。C使用AxIS Navigator软件无创且实时地从三个层面(电活动、突触功能、网络震荡)定量分析神经元电活动。配套的其他分析软件，还能自动计算出多于25种类别的二级参数，供您进行数据深度挖掘。Maestro平台优势提供关键答案 与常规方法间接检测可兴奋性不同，Maestro MEA系统的测试直接反映神经元的动作电位。比较常见的间接技术如钙成像，无法捕获微小却重要的神经网络信号变化。而蛋白表达水平的检测结果与细胞疾病模型功能的相关性也很差。只有使用Maestro MEA系统实时追踪细胞的可兴奋性，您才能回答这个关键问题：样本是否在以您期待的方式放电？无标记分析 Maestro MEA系统无创地检测神经元群落的电信号，杜绝使用染料或报告子，避免其对细胞模型的干扰，您数据的准确性无需置疑。更使您得以实现对一个样本电活动的长期（数小时、数周甚至数月）追踪。原位检测 其它的高通量平台(例如自动化膜片钳或者流式细胞仪)通常会要求对样本做预处理，制备成单细胞悬液再上机检测。对于可兴奋性细胞这种以互相交联的功能性网络形式存在的样本来说，这是一种非常不理想的状态。此外，细胞收集的过程也需要大量的手动操作步骤。只有Maestro MEA系统能够在捕获神经元细胞可兴奋性的同时维持其形态学上的复杂性。简单易用 只有电生理专家才会使用Maestro MEA系统？不存在的！只要把细胞培养在MEA板上，然后把板放入Maestro MEA仪器检测仓内，即可记录神经元电生理数据。Axion提供的一系列软件会帮您完成剩下的数据分析步骤，甚至连可直接用于文献发表的图表都搞定了。您也可以！PART III 应用方向简介神经疾病细胞模型，药物神经毒性筛选，神经细胞功能检测，光遗传学，模式生物表型筛选，干细胞开发及质控，神经球、脑类器官研究帕金森神经肌肉接头病脆性X综合症智障癫痫化合物神经毒理检测星形胶质细胞对神经元功能的影响精神分裂孤独症/自闭症脑瘫偏头痛蛇毒腺类器官前额叶痴呆精神类药物滥用/成瘾神经元代谢干细胞治疗/修复注意缺陷多动障碍/多动症高通量微电极阵列+光遗传的强大组合Axion公司创新的高通量光遗传刺激系统Lumos，可对MEA板内样本进行光强(1-100%)和光照时长(低至100ms)的控制。您可以选择多至四种不同波长的LED光源来刺激单孔内的细胞，并行处理通量高至96个。您也可以对每个孔内混合培养细胞样本中的某一类细胞群体进行单独控制，建立高阶神经疾病模型。所以，通过在软、硬件上与Maestro系统无缝整合，Lumos可以助您精准、灵活、高效地实现神经细胞网络的调节及实时的功能检测。 Axion BioSystems ImagineExploreDiscover

单细胞可视化分选系统——isoPickisoPick是英国iotaSciences公司新推出的一款基于GRID专利技术（专利号：WO2019197373A1 ）、高通量、高自动化的单细胞可视化分选系统。isoPick采用微射流技术，利用界面张力对细胞培养基（或干细胞涂层）进行重塑，在培养皿上雕刻出单独的细胞腔室GRID。isoPick可以在 6 厘米培养皿上创建 256 个单细胞腔室GRID阵列，并将细胞以纳升体积全自动地分配到各个 GRID 单细胞腔室中，通过isoPick的光学显微镜可以清楚地看到 GRID 室中的单细胞。基于GRID技术和光学成像信息，isoPick可以确保分选出的细胞100%为单细胞。设备特点- 全自动化流程- 操作简单，对细胞无损伤- 结果可追踪- 分离效率高达100%- 直接转移到PCR管或96孔板- 结构紧凑，体积小传统单细胞分离手段无法保证所得的样品内只有一个单细胞，有可能有多个细胞或细胞团，导致下游的实验出现误差。isoPick采用的GRID技术结合图像信息分析，结果可追踪，保证100%准确的单细胞分选。而且isoPick分选条件温和，可以显著提高分选单细胞的存活率。同时isoPick可将单细胞样品按照特定的体积直接转移到96孔板或PCR管中，无缝衔接单细胞下游应用，确保后续单细胞组学信息完整性。应用领域单细胞分选单细胞克隆单细胞组学100%准确的单细胞分选效率显著提升单细胞克隆的存活率（单克隆率）极大地简化单细胞组学步骤技术优势传统单细胞分选方法无法保证所得的样品中只有一个单细胞，而isoPick采用GRID单细胞腔室分离与光学信号验证相结合的分选技术，能够保证分选所得的单细胞样品中只有一个单细胞。isoPick可以高效分离hiPSCs单细胞，用于构建单克隆细胞系。isoPick对敏感单细胞处理温和，能够确保更高的单细胞存活率，达到更佳的克隆生长效果。isoPick可以将1.5~200 µ l的单细胞样品直接转移至PCR管带或96孔板中，无缝衔接后续单细胞测序scWGA流程，极大地简化单细胞组学步骤。单细胞分选前后的GRID细胞腔室包被不同基质的96孔板的单细胞hiPSC集落单细胞的WGA结果部分用户单位部分应用案例人类诱导多能干细胞(hiPSCs)的单细胞克隆人类诱导多能干细胞(hiPSCs)构建单克隆细胞系培养步骤繁琐，细胞对异常的处理和操作非常敏感，传统单细胞分选容易导致细胞和遗传毒性应激的积累，进而导致不良分化和多能性丧失。使用isoPick可以温和、自动地将人类诱导多能干细胞(hiPSCs)进行单细胞分选，以高效率培养hiPSCs单克隆细胞系，显著提高了细胞分离与克隆效率。K562细胞单细胞测序传统单细胞测序需对单细胞进行全基因组扩增（WGA），但传统单细胞WGA受限于如何获得单个细胞并转移到小体积的WGA反应中。使用isoPick自动将K562细胞拾取并转移至含3.5 µ l scWGA试剂的PCR管中，并无缝衔接scWGA反应。琼脂糖凝胶电泳结果显示（下图），单细胞WGA的DNA样本(+)中两种基因均被特异性扩增，而阴性对照(-)没有这两种扩增产物，符合预期。对人类诱导多能干细胞 (hiPSCs) Prime 编辑构建工程细胞系Prime 编辑可在 HEK3 基因座中高效精确插入三个核苷酸，用于构建工程细胞系hiPSCs。通过引入靶标特异性 pegRNA 来编辑单个或多个基因组位点，以进行精确有效的基因组编辑，促进疾病建模和功能遗传学研究。Prime 编辑使用与逆转录酶融合的 Cas9 切口酶，将 DNA 序列从“Prime 编辑”引导 RNA (pegRNA) 复制到特定基因座。通过Prime 编辑将多西环素诱导型 Prime Editor 蛋白 (PE2) 整合到 iPSC 细胞系的AAVS1 基因组，之后使用isoPick分选转入靶基因的hiPSCs细胞系，以确保细胞的单克隆性。（见上图）该研究使用isoPick来确保工程细胞系的单克隆性与准确性。 参考文献：Bharucha N, Ataam J A, Gavidia A A, et al. Generation of AAVS1 integrated doxycycline-inducible CRISPR-Prime Editor human induced pluripotent stem cell line[J]. Stem Cell Research, 2021, 57: 102610.胶质母细胞瘤（GBM）通过表观遗传免疫编辑获得骨髓相关转录程序以引发免疫逃逸研究人员通过将多形性胶质母细胞瘤干细胞 (GSC) 连续移植到免疫活性宿主中，发现 GSC 通过建立增强的免疫抑制肿瘤微环境来免疫逃逸。从机制上讲，GSC通过表观遗传免疫编辑过程引起，其在免疫攻击后强制执行 GSC 中稳定的转录和表观遗传变化。研究中使用Irf8敲除细胞系实验证明，Irf8的激活是细胞免疫逃逸的一个重要因素，且在体内可能通过IFNγ介导的激活发生。该研究使用isoPick构建Irf8克隆敲除系。参考文献：Gangoso E, Southgate B, Bradley L, et al. Glioblastomas acquire myeloid-affiliated transcriptional programs via epigenetic immunoediting to elicit immune evasion[J]. Cell。