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液相(HPLC)衍生化单糖组分分析的问题希望能得到高手们的指点,我尝试用PMP衍生化单糖的方法去做液相分析,因为衍生化之后就可以用C18柱分离并用紫外检测器检测,可是结果做了N次一直不理想,无论是标品还样品出的峰都很小很小,微不可见,只有电脑才识别的出来,跟被没法往Paper上贴,恳请各位高手指点一二,以帮我爬出这泥潭。谢谢
我用PMP衍生化单糖,单糖标品最后跑出来的峰去掉空白还有好几个峰,单糖混标峰的保留时间都很靠前而且聚在一起,峰的数量也远远多于单糖的数量,想问一下各位大佬知不知道这是怎么回事衍生化方法:[font=华文中宋]精密吸取水解液(单糖混合对照品溶液、空白溶液)[/font][font='Times New Roman',serif]200uL[/font][font=华文中宋]置[/font][font='Times New Roman',serif]5mL[/font][font=华文中宋]安瓶中,精密加入[/font][font='Times New Roman',serif]0.3mol/L [/font][font=华文中宋]的氢氧化钠溶液[/font][font='Times New Roman',serif]400uL[/font][font=华文中宋],混匀,精密加入[/font][font='Times New Roman',serif]0.5mol/L PMP[/font][font=华文中宋]甲醇溶液[/font][font='Times New Roman',serif]200uL[/font][font=华文中宋],在[/font][font='Times New Roman',serif]70[/font][font=华文中宋]℃条件下衍生化反应[/font][font='Times New Roman',serif]60min[/font][font=华文中宋]。取出,放冷,精密加入[/font][font='Times New Roman',serif]0.3mol/L[/font][font=华文中宋]的盐酸溶液[/font][font='Times New Roman',serif]400uL[/font][font=华文中宋],涡旋混匀。移至[/font][font='Times New Roman',serif]5mL[/font][font=华文中宋]离心管中,涡旋混匀。加入三氯甲烷[/font][font='Times New Roman',serif]1mL[/font][font=华文中宋],涡旋混匀,离心([/font][font='Times New Roman',serif]3000r/min[/font][font=华文中宋])[/font][font='Times New Roman',serif]10min[/font][font=华文中宋],弃去三氯甲烷层(下层),如此至少重复[/font][font='Times New Roman',serif]3[/font][font=华文中宋]次,直至三氯甲烷层无颜色,水层(上层)即为供试品溶液。[/font][font='Times New Roman',serif]0.45um[/font][font=华文中宋]微孔滤膜过滤。[/font][font=华文中宋]色谱条件:乙腈:磷酸盐(0.5mol/L,pH6.8)=17:83,波长245nm,流速0.8mL/min,进样量10uL[/font][font=华文中宋]空白[/font][font=华文中宋][/font]
[color=#444444]我想咨询一下,我现在在做单糖衍生化用于[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]分析,我用吡啶溶解后,加入硅烷化试剂,然后加入正己烷取正己烷层[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]分析可是并没有出峰,我想问一下在这个过程中用到的吡啶要进行无水处理吗?[/color]