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[b][b]高效液相色谱仪测奶粉中的维生素D3 维生素D3的加标回收操作步骤和检测步骤有区别吗?[/b][/b]
国家卫生健康委员会、国家市场监管总局联合发布了85项食品安全国家标准和3项修改单的公告,其中包括了GB 5009. 296-2023《食品安全国家标准 食品中维生素D的测定》(以下称新标准)。新标准代替GB 5009.82-2016《食品安全国家标准食品中维生素A、D、E的测定》中第三法“食品中维生素D的测定[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]串联质谱法”和第四法“食品中维生素D的测定高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法”。新标准最大的变化便是增加了在线柱切换反相[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法。在此背景下,为了进一步促进维生素D检测工作的交流与合作,仪器信息网特别发起“维生素D新标准解读与应对”话题。本文邀请到科诺美(北京)科技有限公司[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]产品经理公敬欣分享相关的技术及解决方案。[align=center][size=20px][color=#ff0000][back=#d7e3bc][b] 01 [/b][/back][/color][/size][size=20px][b]引言[/b][/size][/align][b][color=#ff0000]维生素D[/color][/b]是机体维持正常代谢和调节机能所必须的脂溶性维生素,主要包括维生素D2(麦角钙化醇)和维生素D3(胆钙化醇),具有促进肠道对钙、磷的吸收和在骨骼中沉积,维持骨骼的正常生长与发育的作用,因此维生素D的准确测定对于产品质量控制具有重要的意义。在维生素D的测定中,由于添加量相对较低,且样品基质复杂,存在脂肪、蛋白等干扰物。[b][color=#ff0000]现行标准GB 5009.82-2016中第四法中,在对样品进行皂化、提取、洗涤、浓缩后,通过正相[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]净化,浓缩复溶后再通过反相色谱法分离检测。[/color][/b]该方法分析单个样品的时间较长,降低了分析效率,并且过于繁琐的前处理操作,也会对回收率的结果产生较大影响。因此,在即将生效的《GB 5009.296-2023食品国家安全标准 食品中维生素D的测定》中,将在线柱切换-反相[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法作为该标准的第二法,优化了样品前处理流程,提升检测灵敏度,更快速地获取分析结果,提高了样品的检测效率。面对新标准的即将实施,科诺美的技术应用团队制定了符合标准要求的解决方案。本方案采用Chromai Lotus C8作为一维色谱柱,Lotus PAH作为二维色谱柱,基于Chromai Leaps双三元二维[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]平台,建立了在线柱切换-反相[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]测定食品中维生素D的方法,并通过实际样品的测试,确认该方法稳定可靠。[align=center][img=屏幕截图 2024-01-02 164918.png,1100,261]https://img1.17img.cn/17img/images/202401/uepic/2601ecb0-472f-42f8-84ee-480896d81cbb.jpg[/img][img=屏幕截图 2024-01-02 164933.png,1100,207]https://img1.17img.cn/17img/images/202401/uepic/8aa6ab48-bb22-4e68-8819-b009c9d9ad76.jpg[/img][/align][align=center][size=20px][color=#ff0000][back=#d7e3bc][b] 02 [/b][/back][/color][/size][size=20px][b]实验方法[/b][/size][/align][color=#366092][b][size=18px]2.1 仪器[/size][/b][/color]Chromai Leaps高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]系统(1)一维、二维泵:Leaps双三元梯度泵(P60)(2)自动进样器:Leaps标准型自动进样器(带制冷)(A10C)(3)柱温箱:Leaps 标准加热型柱温箱(1个两位六通+1个两位10通)(C10V6)(4)检测器:Leaps紫外-可见检测器(D10)Leaps紫外二极管阵列检测器(D20)[color=#366092][b][size=18px]2.2 色谱柱[/size][/b][/color]一维色谱柱:Chromai Lotus C8(4.6*100 mm, 5 [font=&]μ[/font]m)二维色谱柱:Chromai Lotus PAH(4.6*150mm, 5 [font=&]μ[/font]m)富集柱:Chromai Louts TC C1(4.0*10mm,5 [font=&]μ[/font]m)[color=#366092][b][size=18px]2.3 软件[/size][/b][/color]Eyoulab CDS企业版[color=#366092][b][size=18px]2.4 色谱条件[/size][/b][/color][table][tr][td]流动相[/td][td]一维流动相:A:水,B:乙腈/甲醇(75/25,V/V),梯度洗脱,流速:1 mL/min二维流动相:A:乙腈/水(95/5,V/V),B:甲醇,等度洗脱,流速:0.6 mL/min[/td][/tr][tr][td]梯度洗脱及阀切换程序[/td][td]一维梯度洗脱程序[align=center][img=1.png,300,143]https://img1.17img.cn/17img/images/202401/uepic/cdd17b53-d0d1-4f10-b07a-efb12beba8c4.jpg[/img][/align]二维等度洗脱[align=center][img=2.png,300,89]https://img1.17img.cn/17img/images/202401/uepic/e426fbb1-ae7f-4698-82eb-06300ba0665a.jpg[/img][/align]阀切换程序[align=center][img=3.png,300,174]https://img1.17img.cn/17img/images/202401/uepic/fd4fcf88-d89f-4f9c-9ba0-07589bd303f9.jpg[/img][/align][/td][/tr][tr][td]检测波长[/td][td]264 nm[/td][/tr][tr][td]进样量[/td][td]100 [font=&]μ[/font][font=&]L[/font][/td][/tr][/table][align=center][size=20px][color=#ff0000][back=#d7e3bc][b] 03 [/b][/back][/color][/size][size=20px][b]实验结果[/b][/size][/align][color=#366092][b][size=18px]3.1 标准曲线的测定[/size][/b][/color]将不同浓度的标准系列工作溶液分别进样100 [font=&]μ[/font][font=&]L[/font][font=&],得到[/font]维生素D[font=calibri][sub][size=13px]2[/size][/sub][/font]和维生素D[font=calibri][sub][size=13px]3[/size][/sub][/font]标准曲线结果见表3。在2.5 -100 [font=&]μ[/font][font=&]g[/font][font=&]/L[/font][font=&]浓度范围内,[/font]维生素D[font=calibri][sub][size=13px]2[/size][/sub][/font]和维生素D[font=calibri][sub][size=13px]3[/size][/sub][/font]线性良好,线性相关系数均大于0.999。[align=center]表3 维生素D[font=calibri][sub][size=13px]2[/size][/sub][/font]和维生素D[font=calibri][sub][size=13px]3[/size][/sub][/font]标准曲线测定结果[/align][align=center][img=屏幕截图 2024-01-02 165826.png]https://img1.17img.cn/17img/images/202401/uepic/76fe96f6-21ee-4f43-b1b9-8b38e6811af4.jpg[/img][/align][align=center][img=,300,296]https://img1.17img.cn/17img/images/202401/uepic/80e3e36e-2cc5-42f4-99ef-cd27783d6371.jpg[/img][img=,300,296]https://img1.17img.cn/17img/images/202401/uepic/b2f0f2a6-2f7b-476f-a7e0-32739ec0bea5.jpg[/img][/align][align=center]图1 维生素D[font=calibri][sub][size=13px]2[/size][/sub][/font]和维生素D[font=calibri][sub][size=13px]3[/size][/sub][/font]标准曲线图[/align][align=center][img=,600,147]https://img1.17img.cn/17img/images/202401/uepic/27b2dfe1-228d-4bf6-89b1-3c66bf4d99fe.jpg[/img][/align][align=center]图2 维生素D[font=calibri][sub][size=13px]2[/size][/sub][/font]和维生素D[font=calibri][sub][size=13px]3[/size][/sub][/font]标准溶液(2.5 ng/mL)二维[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]图[/align][color=#366092][b][size=18px]3.2 实际样品测定[/size][/b][/color]参考GB 5009.296-2023第二法对样品进行皂化、液液萃取等前处理操作,得到样品溶液后上机分析,计算得到样品含量结果见表4。[align=center][img=,600,166]https://img1.17img.cn/17img/images/202401/uepic/af501539-75ae-4c3f-b845-c29bbd7b6cdf.jpg[/img][/align][align=center][img=,600,166]https://img1.17img.cn/17img/images/202401/uepic/85b9d115-9d3d-43ee-93eb-c66b5b22b734.jpg[/img][/align][align=center]图3 某婴配粉样品1和2测定二维[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]图[/align][align=center]表4 某婴配粉样品测定结果[/align][align=center][img=屏幕截图 2024-01-02 165905.png,750,123]https://img1.17img.cn/17img/images/202401/uepic/ab2bbd5e-f96d-4b5e-b768-e4302dc4e684.jpg[/img][/align][align=center][size=20px][color=#ff0000][back=#d7e3bc][b] 04 [/b][/back][/color][/size][size=20px][b]结论[/b][/size][/align]本解决方案采用科诺美自主研发的Leaps双三元[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]系统,参考GB 5009.296-2023第二法在线柱切换-反相[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法,实现了维生素D测定中高效的样品前处理,检测效率显著提高。Leaps双三元[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]系统模块式组装,仅使用一个双三元泵就可以实现二维[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]操作,避免了两组泵模块组装占地面积大或者仪器系统高度过高、操作不便的弊端,该系统可作为维生素D测定的首选配置。对于需要一次进样实现样品中维生素A、维生素D及四种维生素E异构体的同时测定分析,科诺美也可以提供在线前处理—二维[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]的完整解决方案。该方案灵敏度高、专属性强,可以有效去除样品中的杂质对维生素A、D、E的分析干扰。[align=center][img=,350,407]https://img1.17img.cn/17img/images/202401/uepic/1022a309-30f4-43ff-a564-db6f511fb862.jpg[/img][/align][align=center]供稿人:科诺美(北京)科技有限公司[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]产品经理 公敬欣[/align][b]科诺美[/b](英文:Chromai),是中国领先的从事分析检测仪器与医疗诊断研发、生产、销售和服务的高科技技术企业。是中国仪器仪表学会、中国分析测试协会、中国医疗器械行业协会会员。公司旗下设立北京研发中心、苏州供应链中心等多家子公司。科诺美公司一直致力于脂溶性维生素测定方法的研究与应用,除了食品中维生素的测定外,Chromai二维[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]系统已经取得二类医疗器械注册证(苏械注准20222222069),该系统已经成功应用于血清中脂溶维生素的测定。[来源:仪器信息网] 未经授权不得转载[align=right][/align]
国产与进口液相色谱仪测试比对报告1.比对目的 选取2010年药典二部及美国药典中典型方法及食品添加剂国标方法对某国产品牌上海伍丰EX1600高效液相色谱仪及其他品牌(以waters仪器为主)液相色谱仪的各项性能进行比较,明确国产仪器优化与改进方向。2.比对依据与原理1. JJG705-2002 液相色谱仪计量检定规程2. EX1600高效液相色谱仪及其他品牌高效液相色谱仪使用说明书3. EX1600高效液相色谱仪系统适用性测试方案及综合改善测试方案4. GB/T 19681—2005食品中苏丹红染料的检测方法--高效液相色谱法5. VensuilAA氨基酸分析方法6. 2010年药典二部及美国药典中双氢青蒿素、可可碱与茶碱、维生素A及阿托伐他汀钙等相关物质的测定方法。7. 需比对的性能指标选取原理:与《JJG705-2002 液相色谱仪计量检定规程》要求直接相关;与仪器关键部件的技术指标直接相关;与仪器测定结果重复性,即仪器稳定性直接相关。8. 样品选取原理:测定结果直接反应仪器的稳定性;属于常用或者经典方法,单标、混标体系均有所涉及;等度和梯度方法均有所涉及(反映梯度误差指标);与检测器的基本波段(低、中、高波段)均相关的项目(反映全波段检测稳定性)。3.比对内容 高效液相色谱仪对样品的分离与测定结果好坏与仪器的稳定性及色谱柱的柱效相关,现使用同样的色谱柱进行EX1600高效液相色谱仪及其他品牌的色谱仪各项性能比对,就需要了解构成液相色谱的各个系统及整机的稳定性情况。就仪器各个系统的稳定性来讲,按照《液相色谱仪计量检定规程》测试方法,对流量准确度与重复性、噪声与漂移的测定结果能够从仪器方面直接反映输液系统及检测器的运行情况,明确指出这两个核心部件的优化与改进方向。而就整机稳定性来讲,还需要配合标准样品的测试,对其检出限、线性范围和梯度误差及定性定量重复性结果进行比较和评价,作为应用测试指标进一步反映仪器的稳定性好坏。将仪器性能指标与应用测试指标相结合,才能全面、客观地对仪器各项性能的稳定性进行评价与改进。现将主要测试内容列在下表:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/11/201311100229_476241_2369266_3.png 根据以上所列比对项目的比对内容,选择苏丹红ⅠⅡⅢⅣ、双氢青蒿素、阿托伐他汀钙、可可碱与茶碱、维生素A、氨基酸作为衡量输液系统、检测器、整机及软件性能综合指标优劣的标准测试样品,其特有的测定条件及测定结果可以综合反映色谱仪的稳定性,现将其优势测定条件与测定结果反映的综合指标列在下表并具体阐述如下:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/11/201311100231_476242_2369266_3.png 据食品国家标准、药典二部及美国药典中的典型方法,我们选取了近年来与食品、药品质量可控性、有效性及安全性密切相关的六类标准样品,依据其测试结果来衡量高效液相色谱仪各项性能稳定性。 苏丹红作为化工试剂,被不法商家非法添加入调味品中,是近年来食品安全领域的热点问题。苏丹红ⅠⅡⅢⅣ易致癌,是我国明文禁止的非食品添加剂。在相关食品国家标准中对其含量有具体的限量值,鉴于其实际测定中响应值低,我们对苏丹红的检测结果可直接体现高效液相色谱仪的噪声、漂移、检出限及线性范围(下限)等指标优劣。同时,苏丹红ⅠⅡⅢⅣ作为四元混标体系,国标方法规定苏丹红Ⅰ检测波长为478nm,苏丹红ⅡⅢⅣ检测波长为520nm,在检测过程中须转换波长,测定结果能够直接反映高波段、波长转换时的噪声与检出限;分离条件为梯度洗脱,可反映输液系统的梯度误差及双泵在梯度洗脱的稳定性。 双氢青蒿素作为单标体系,色谱测定条件为检测波长210nm,测定结果可直接反映检测器在低波段的稳定性及单泵运行情况。 阿伐他汀钙液相色谱检测波长为244nm,位于检测器优势波段的相对低波长处,流动相中含有高比例、洗脱能力较强的试剂四氢呋喃,可直接反映检测器优势波段噪声及单泵稳定性。 氨基酸混标体系共包含17种氨基酸组分,为复杂难分离体系,检测波长为254nm,测定时为梯度洗脱,测定结果可直接体现检测器优势波中段噪声及梯度洗脱时双泵运行稳定性。 可可碱与茶碱的二元混标体系,测定时检测波长为272nm,位于检测器优势波段的相对高波长处,可进行等度分离,测定结果直接反映了检测器优势波段稳定性及双泵在等度洗脱时的稳定性。 维生素A的高效液相色谱测定体系为正相色谱,流动相为正己烷:异丙醇[font=Tim