大豆异黄酮样品粉中大豆异黄酮含量检测方案(紫外分光光度)

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紫外分光光度法测定大豆异黄酮含量 摘要：大豆异黄酮有12种，母核结构均是3一苯基色原酮，在260 nm有最大吸收，可用紫外分光光度法测定异黄酮含量。以大豆苷元(Daidzein)作标准品绘制标准曲线，建立回归方程，相关系数r=0．9941，方法回收率100．4％，变异系数0．25％ ，证明方法可靠性好、重现性高。 关键词：大豆；大豆异黄酮；紫外分光光度法；测定 前言 大豆异黄酮的生产，由于提取、分离、精制工艺的不同，大豆异黄酮组分是有差异的。当分析的样本数量较大时，寻求操作简单、耗时少、分析迅速、结果可靠的评价指标的方法具有重要的实际意义。大豆异黄酮在紫外光区有特征吸收，大豆异黄酮的各组分的最大吸收波长相差不大，峰的数目较少。如染料木苷(Genistein)在紫外区有很强的吸收带，最大吸收波长为260 nm，大豆苷元(Daidzein)最大吸收波长为256 nm，在310 nm处有一个很小的肩峰，这使紫外吸收作为评价指标成为可能。 1 材料与方法 1．1 仪器 紫外分光光度计，分析天平(万分之一)。 1．2 试剂 95％ 乙醇，分析纯。 大豆异黄酮样品粉，标准品大豆苷元(Daidzein)纯度98％。 1．3 标准曲线的绘制 1．3．1 标准品溶液的配制 取大豆苷元标准品5．6 mg，用50％乙醇溶解并定容至50 mL摇匀，得浓度为0．112 mg／mL标准品溶液。 1．3．2 标准曲线的绘制 分别用移液管精密量取标准液0．5、1．0、1．5、2．0、2．5、3．0 mL，置10 mL容量瓶中，加50％乙醇稀释至刻度摇匀。用紫外分光光度计在260 nm波长下测其吸光度，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。 1．4 加样回收率的测定 取样品2．0 mg，用50％乙醇溶解，定容至50 mL摇匀。取1．0 mL该溶液移入10 mL容量瓶中，分别加标准液1．0、2．0、3．0 mL混匀后，在260 nm下测定吸光度，计算加样回收率。加样回收率(％)=(测得浓度一本底浓度)／加标品量×100。 1．5 重复性实验 取样品2．0 mg，用50％ 乙醇溶解，定容至50 mL摇匀，在260 nm下，重复测定6次，计算变异系数。 2 结果与讨论 2．1 标准曲线的绘制 按1．3．2所述方法进行操作，得测定数据见表 1，绘制的标准曲线见图1。 2.2 加样回收率的测定 加样回收率测定数据见表2。 由表2可知，平均回收率100．4％ ，证明此方法可行。 2．3 重复性实验 重复性实验测定数据见表3。 由表3可知，平均百分含量为38．46％ ，变异系数是0．25％ 。 2．4 样品测定 2．4．1 样品的预处理取样品5 g，置于研钵中研匀，精密称取2．0 rag，用50％ 乙醇溶解后，定容至50mL摇匀，备用。 2．4．2 样品的测定 取样品溶液，倒入比色皿中，在260 nm下测定吸光度，根据回归方程计算出浓度 (c)，再根据下式计算，得到样品的百分含量。式中：c测得样品浓度，mg／mL；W取样量，mg。 计算公式：P(％)=c X 50／W X 10 X 100 2．4．3 几组样品的测定数据见表4。 表4所得数据均是测得3次数据的平均值，并且3次测得数据偏差在0．1％之内。 2．4．4 样品的扫描图谱 样品在190～350 nm扫描图谱见图2、图3。 由图2、图3可以看出，样品在260 nm处有最大吸收峰，因此确定260 nm为测定波长。 3 结 论 (1)紫外分光光度法测定大豆异黄酮含量具有比高效液相色谱法更为简便、快捷等优点，且回收率高、重现性好。标准品溶液在4℃冰箱中保存，可连续使用，节约标准品。 (2)此法用大豆苷元作标准品，而在大豆异黄酮的组分中主要以糖苷形式存在，苷元只占2％ 一3％ ，分子量比值系数为1．49，即紫外分光光度法所 测量的值乘以分子量比值系数，近似高效液相色谱法的测定值。 (3)此方法优点是能监测生产过程，适用于工艺在线检测，具有省时、省费用。作为实验室研究可与高效液相色谱法相配合，达到理想的测定结果。 大豆异黄酮的生产，由于提取、分离、精制工艺的不同，大豆异黄酮组分是有差异的。当分析的样本数量较大时，寻求操作简单、耗时少、分析迅速、结果可靠的评价指标的方法具有重要的实际意义。大豆异黄酮在紫外光区有特征吸收，大豆异黄酮的各组分的最大吸收波长相差不大，峰的数目较少。如染料木苷(Genistein)在紫外区有很强的吸收带，最大吸收波长为260 nm，大豆苷元(Daidzein)最大吸收波长为256 nm，在310 nm处有一个很小的肩峰，这使紫外吸收作为评价指标成为可能。