富硒酵母中硒代蛋氨酶检测方案

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科捷仪器KEJIEINSTRUMENT电话：139-5161-2855网址： www.kj17.com 高效液相色谱法检测富硒酵母中的硒代蛋氨酶 硒是人体必需微量元素，存在于抗氧化酶和甲状腺素代谢酶的活性中心，缺硒导致克山病，合理补硒可有效减少人类及动物罹患癌症的风险。蛋氨酸中硫被硒取代后得到硒代蛋氨酸，是生物利用度最高的有机硒化物，人体吸收后可在体内形成硒储备池。富硒酵母是被广泛研究的食品硒补充剂，在培养基中加入无机硒，利用酵母将难吸收的无机硒源转化为易吸收的有机硒源。将富硒酵母纳入饮食中作为硒补充剂可减少大约50%的癌症发病率与死亡率。作为硒代蛋氨酸的最经济来源，富硒酵母中总硒的70%-76%以硒代蛋氨酸的形式存在，富硒酵母中硒代蛋氨酸的含量对评价其质量与营养价值具有重要意义。 目前，国外测定富硒酵母中硒代蛋氨酸的方法有高效液相色谱串联电感耦合等离子体质谱法(HPLC-ICP-MS)，高效液相色谱串联质谱法(HPLC-MS)，毛细管电泳-电化学发光法(CE-ECL)等，国内相关文献较少。本实验针对富硒酵母中硒代蛋氨酸进行分析，采用酶解法进行样品提取，通过对样品的色谱分离及衍生等条件进行研究，建立丹磺酰氯 (DNS-CI)柱前衍生高效液相色谱-荧光法测定富硒酵母中硒代蛋氨酸。 仪器准备 仪器简介 LC-600A 智能全夜液相色谱系统由 P600 高压恒流泵与 UV600 紫外检测器直接构成等度分析系统。使用 WS600 工作站可以同时控制数台 P600 高压恒流泵、UV600紫外检测器及恒温柱箱等，实行多元高压洗脱、波长扫描等功能。 应用领域 化合物检测、法医毒物分析、蛋白质组学食品检测、药物分析、环境分析、聚合物分析 样品提取： 称取0.1g经冷冻研磨的富硒酵母原料(或0.5g富硒酵母产品)，置于10mL离心管中，加入5mL0.05mol/L磷酸氢钠缓冲液(pH=7.4)，40mg蛋白酶XIV， 充分混匀后于37℃摇床振摇 24h。振摇结束后向样品酶解液中加入0.1mL1.5g/L亚铁氰化钾溶液及 0.1mL3g/L乙酸锌溶液，充分混匀后在3000r/min 下离心10min， 取上清液待测，用80mmol/L碳酸钠缓冲液(用1mol/LHCI调节pH至9.5)适当稀释，使样品含量在方法线性范围内。 色谱条件： 色谱柱 Pursuit XRs C18 色谱柱(250mm×4.6mm，5m) 检测器 荧光检测器 激发光波长 320nm 发射波长 523nm 柱温 30℃ 进样量 10uL 流动相 乙腈-10mmol/L磷酸二氢钠缓冲液(含4%N， N-二甲基甲酰胺pH=6.55) 流速 1.0mL/min 梯度洗脱程序 (T，乙腈%)Omin， 14%； 5min， 20%； 10min， 25%； 12min， 25.6%；15min， 25.7%；19min， 25.9%；23min，26.5%；30min， 27%；334min， 30%；38min， 43%；41min， 68%；45min， 68%；47min，86%；52min，86% 梯度洗脱程序334min， 30%；38min， 43%；41min， 68%；45min， 68%；47min，86%；52min，86% 谱图分析： 图3富硒酵母样品衍生的色谱图 Fig.3 Chromatogram of selenium-enriched yeast 传真： 南京科捷分析仪器有限公司 QQ：EJIE INSTRUMENT 硒是人体必需微量元素，存在于抗氧化酶和甲状腺素代谢酶的活性中心，缺硒导致克山病，合理补硒可有效减少人类及动物罹患癌症的风险。蛋氨酸中硫被硒取代后得到硒代蛋氨酸，是生物利用度**高的有机硒化物，人体吸收后可在体内形成硒储备池。富硒酵母是被广泛研究的食品硒补充剂，在培养基中加入无机硒，利用酵母将难吸收的无机硒源转化为易吸收的有机硒源。将富硒酵母纳入饮食中作为硒补充剂可减少大约50%的癌症发病率与死亡率。作为硒代蛋氨酸的最经济来源，富硒酵母中总硒的70%-76%以硒代蛋氨酸的形式存在，富硒酵母中硒代蛋氨酸的含量对评价其质量与营养价值具有重要意义。