蜂蜜中氯霉素检测方案

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LCMS分析蜂蜜中的氯霉素 氯霉素是有效的广谱抗生素，但副作用大，因此， FAO/WHO出于保护健康的考量，禁止氯霉素在食品中残留。日本在2006年实施的肯定列表制中，氯霉素包括在“按照规定的试验法进行检测时，在食品中「不得检出」的 图1表示氯霉素的负离子电喷雾离子化(ESI)法质谱图。在m/z 321观察到去质子分子[M-H]，在m/z357上观察到氯离子加合型分子[M+Cl]"。根据日本告示试验法(2005年11月修订)阐述的流动相条件，“使用乙腈及10mmol/L甲酸铵水溶液的混合液(3：7)并调整流速，使氯霉素约5分钟洗脱”，但考虑到与杂质成分的分离，将流动相变更为乙腈及10mmol/L甲酸铵水溶液的混合液(25：75) 进 农药等成分物质”之中。并且，关于从畜牧水产品以及蜂蜜、蜂王浆等中检测出氯霉素的报道不断，氯霉素成为各国进出口食品检测的目标成分。 行分析(流量0.2mL/min)。图2表示以m/z321为检测离子的氯霉素(10ug/L)的选择离子检测(SIM)色谱图。在此条件下，氯霉素在7.9分洗脱。 图4(a) 表示0.5~10pg/L的SIM色谱图。在此范围内的工作曲线具有良好的线性(相关系数 0.9999以上)，浓度1ug/L时的重现性(n=5)良好，为RSD%<5%以下。 图1氯霉素的负离子ESI质谱图 图2 氯霉素的SIM 色谱图(10ug/L，3uL 进样) 图3表示蜂蜜的提纯方法。以二乙烯基苯-N-乙烯基吡咯烷酮异分子聚合物微型柱(225mg)提纯蜂蜜提取液是非常简便的前处理方法。曾使用20%甲醇清洗微型柱后，使用60% 甲醇洗脱氯霉素的方法，但添加在蜂蜜中的氯霉素的回收率低，为76%，因此，为了提高回收率，采用使用水清洗微型柱后，使用甲醇10mL进行洗脱的提纯法。图4(b)表示①： 在本次的提纯法中，②号在提纯后的蜂蜜样品中添加的氯霉素的回收率为95%，未见明显的离子化干扰。③号在蜂蜜中添加的氯霉素的回收率也为94%，结果良好。 蜂蜜样品(氯霉素未添加)，②：在①添加氯霉素，浓度为10ug/L的样品，③：在5g的蜂蜜中添加10ng氯霉素的蜂蜜样品(10ug/L)，④：氯霉素标准品(10ug/L)的LC-MS分析结果。 另外，①号未添加蜂蜜中也检测到若干氯霉素，定量值为0.50ug/L左右。 图3 蜂蜜中的氯霉素前处理步骤 图4 (a)氯霉素标准品的SIM色谱图 (0.5，1， 10ug/L)， (b)蜂蜜中的氯霉素分析结果(1：蜂蜜空白，2：蜂蜜空白+氯霉素，3：蜂蜜+氯霉素，4：氯霉素标准品) 表11分析条件 色谱柱： Shimadzu Shim-pack VP-ODS CDL 温度：250℃ (2.0mmI.D.×150mmL.) 加热块温度：200℃ 流动相 ： 10mmol/L 雾化气流速： 1.5L/min 甲酸铵水溶液/乙腈=75/25 干燥气压力：0.1MPa 流速 ：0.2mL/min CDL 电压：-20V 进样体积：3uL Q-array DC 电压： Scan-mode 柱温 ：40℃ Q-array RF 电压： Scan-mode 电压 ： -3.5kV(ESI-Negative mode) SIM： m/z 321(0.5sec)