生物制品中有效成分含量分析检测方案

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天美Marketing天美(中国)科学仪器有限公司TECHCOMP (CHINA)LTD. 天美Marketing天美(中国)科学仪器有限公司TECHCOMP (CHINA)LTD. 中国北京朝阳区天畅园7号楼1、3层 TEL：010-64010651 FAX：010-64060202 E-MAIL：techcomp@techcomp.cn 人血清中白蛋白与球蛋白的分离 随着超速离心机转速的提高，用超速角式转头分离人血清中白蛋白与球蛋白的离心时间越来越短，用5—20%线性蔗糖梯度作蛋白质速率一区带(Rate-zonal)分离，样品以近等速沉降，低于分析实验结果。下面的简单分离实例有代表性。 设备：离心机：智能型超速离心机(Hitachi CP--WX系列) 转专：定角： P90AT， P80AT， 比较实验转头： P40ST P90AT：90，000rpm7，00，000xg， 8×12ml K=25P80AT：80，000rpm，615，000xg，8×12ml K=27P40ST： 40，000rpm， ：284，000xg，6×13ml K=139 离心管：12ml及 13ml PA管 CP-WX系列超速离心机 样品：标准人血清1ml (2.5mg/ml)， 用 0.15M NaCl 溶解。 中国北京朝阳区天畅园7号楼1、3层 TEL：010-64010651 FAX：010-64060202 E-MAIL：techcomp@techcomp.cn 梯度液：5-20%线性蔗糖梯度， P90AT及 P80AT梯度液量约9.5ml， ，P40ST梯度液量约 9.6ml。 方法：5一20%蔗糖梯度液上铺约1ml 人血清，对P90AT及 P80AT必须装满(用血清调节)，P40ST加样至距管口3mm。 离心参数： P90AT ：90，000rpm ，2小时，2.5小时，3小时，5℃，加速“5”减速"5" P80AT ：80，000rpm，2小时，2.5小时，3小时，5℃，加速“5”减速"5" P40ST：40，000rpm，14小时，16小时，18小时，5℃，加速"8"减速"8" 曲线绘制：用日立 DGF-U 梯度仪通过上口连续取样至带流动池分光光度计连续测 O.D.( 280nm)后收集。 结果及分析： 转头 白蛋白峰顶距离从管口算起的容量(ml) 球蛋白峰顶距离从管口算起的容量(ml) P90AT 2小时 2.5小时 3小时 2小时 2.5小时 3小时 4.5 5.7 6.8 6.2 7.9 9 P80AT 4.3 5.5 6.6 6 7.6 8.7 P40ST 14小时 16小时 18小时 14小时 16小时 18小时 3.6 4.1 4.7 5.0 5.8 6.6 天美(中国)科学仪器有限公司TECHCOMP (CHINA) LTD. 中国北京朝阳区天畅园7号楼1、3层 TEL：010-64010651 FAX：010-64060202 E-MAIL：techcomp@techcomp.cn 转头 白蛋白峰顶在蔗糖梯度位置% 球蛋白峰顶在蔗糖梯度位置% P90AT 2小时 2.5小时 3小时 2小时 2.5小时 3小时 10.0 11.7 13.2 12.7 14.7 16.7 P80AT 9.9 11.6 13.0 12.5 14.5 16.5 P40ST 14小时 16小时 18小时 14小时 16小时 18小时 7.5 8.3 9.0 9.9 11.0 12.0 分析：根据以上结果，可以看出： 1.在5—20%蔗糖线性梯度中白蛋白与球蛋白基本上以等速沉降 2.用 P40ST 或 P80AT 转头分离人血清白、球蛋白在最高转速离心2.5小时效果最佳，用 P40ST转头离心18小时效果最好。 3 用P40ST转头分离的结果O.D. 对离心管从管口算起容量曲线的峰形比P90AT的峰形尖锐一些，但考虑到离心机和转头的寿命，用P80AT转头离心性价比最佳。 www.techcomp.cn