破伤风抗毒素中蛋白氮含量检测方案(定氮仪)

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K-230-201712 海能仪器：凯氏定氮法测定破伤风抗毒素中的蛋白氮含量 1前言 破伤风抗毒素是由破伤风类毒素免疫马所得的血浆，经胃酶消化后纯化制成的液体抗毒素球蛋白制剂，用于预防和治疗破伤风梭菌引起的感染。其中蛋白质含量是其需要检定的指标之一，本实验参照药典中的方法使用全自动凯氏定氮仪对其蛋白质含量进行测定。 2仪器与试剂 2.1仪器 K1100F全自动凯氏定氮仪， SH420F石墨消解仪，分析天平。 2.2试剂 硫酸(分析纯)，20g/L硼酸溶液，溴甲酚绿-甲基红混合指示剂，40%氢氧化钠。 3实验方法 3.1样品制备 3.1.1非蛋白氮供试品溶液的制备 精密量取供试品 2mL， 加水14mL， 10%钨酸钠溶液2mL， 0.33moL/L硫酸溶液2mL，摇匀，静置30分钟，过滤，弃去初滤液，取续滤液作为非蛋白氮供试溶液。 3.1.2总氮供试品溶液的制备 取混合好的供试品，精确量取2mL，置10mL容量瓶中，用水稀释到刻度，作为总氮供试品溶液。 3.2取样 分别精确量取 1mL 制备好的总氮溶液及 2mL 非蛋白氮溶液加入消化管中，各加入0.3g硫酸钾与30%硫酸铜水溶液5滴，再沿瓶壁滴加硫酸2.0ml。 3.3消解 表1消解参数设置 阶段 温度/℃ 保持/min 1 200 20 2 300 20 3 420 60 3.4测试 待样品消解结束，上机测试。 表2定氮仪参数设置 硼酸 稀释水 碱液 蒸馏量 蒸汽流量 滴定酸 25mL 10mL 10mL 5min 100% 0.1010mol/L 4测试结果 4.1实验结果 表3破伤风抗毒素中氮含量的测试数据 样品名称 取样体积mL 滴定体积/mL 氮含量% 平均值% 含量 mg/mL 非蛋白氮试样 2 0.0518 0.0006 0.0007 0.07 0.0518 0.0006 0.0630 0.0014 0.0468 0.0003 总氮试样 1 1.0306 0.1398 0.1410 7.05 1.0601 0.1440 1.0367 0.1407 1.0296 0.1396 蛋白氮含量=(7.05-0.07)×6.25=43.625mg/mL 4.2结论 从实验结果可以看到，采用K1100F 凯氏定氮仪可以准确的检测破伤风抗毒素中的总氮含量。由于样品中非蛋白氮含量较低，因此可能会影响结果平行性。 ( 参考文献 ) ( [1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].四部.北京：中国医药科技出版社，2015：附录0731蛋白质含量测定第一法凯氏定氮法 ) -- -- 1 前言破伤风抗毒素是由破伤风类毒素免疫马所得的血浆，经胃酶消化后纯化制成的液体抗毒素球蛋白制剂，用于预防和治疗破伤风梭菌引起的感染。其中蛋白质含量是其需要检定的指标之一，本实验参照药典中的方法使用全自动凯氏定氮仪对其蛋白质含量进行测定。2 仪器与试剂2.1仪器K1100F全自动凯氏定氮仪，SH420F石墨消解仪，分析天平。2.2试剂硫酸（分析纯），20g/L硼酸溶液，溴甲酚绿-甲基红混合指示剂，40%氢氧化钠。