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抗体药物复合物中绝对分子量检测方案(凝胶色谱仪)

检测样品抗体药物复合物

检测项目绝对分子量

方案详情文

DAR 通常由质谱（MALDI-TOF或者ESI-MS）或者UV 光谱来测定。 UV 光谱是基于样品的紫外吸收来进行测定，由于抗体和一些小分子的紫外消光系数比较接近，使得计算结果比较复杂。质谱，虽然是测定分子量的有力工具，但是它要求不同化合物间电离和回收率要一致，而ADC 复合物通常无法满足这一点。 SEC-MALS 联用可直接测定DAR，该方法中使用了UV 检测器和示差折光检测器。

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最近，对于癌症治疗的靶向治疗药物-抗体药物复合物的研发，正快速回暖。设计出有效的抗体药物复合物(ADC)的关键因素是药物抗体比率(DAR)，它描述的是药物比重的大小，会直接影响治疗的有效性和潜在毒性，同时也会显著影响药物的稳定性和聚集状态。因此， DAR 的测定在开发 ADC 治疗药物过程中是至关重要的。 DAR 通常由质谱 (MALDI-TOF或者ESI-MS)或者 UV光谱来测定。UV 光谱是基于样品的紫外吸收来进行测定，由于抗体和一些小分子的紫外消光系数比较接近，使得计算结果比较复杂。质谱，虽然是测定分子量的有力工具，但是它要求不同化合物间电离和回收率要一致，而 ADC 复合物通常无法满足这一点。我们这里展示了一种SEC-MALS 联用测定 DAR 的方法，该方法中使用了 UV检测器和示差折光检测器。图1展示的是两种 ADC的 UV 号号。 ADC复合物的分子量直接通过光散射数据获得。 Astra6 软件包依据样品的折光指数增量(dn/dc)以及紫外吸光系数，可以自动分析复合物组分，不但能计算出复合物的分子量，也能算出复合物中每个组分的分子量。每一个组分图1使用SEC-MALS 测定两种明显不同的ADC 制剂的摩尔质量图2知道各组分的紫外消光系数和 dn/dc， Astra软件能够计算出抗体和附加药物的分子量。并可根据标称分子量1250Da 的药物组分计算出DAR。的 dn/dc 和紫外消光系数可根据经验值获得或从文献中查到。示例中的抗体通过烷基化加载上一个标称1250Da的化合物(图2)。抗体组分的分子量相似，所以能够反映两种制剂总体差异的就是 DARs，该数值与其他正交方法得到的结果一致。结合物部分的分子量分布代表了与抗体结合的侧基的总体数目。复合物的分布曲线呈水平状，表明修饰物在整个出峰范围内均一连续分布。

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