盐酸大观霉素中含量检测方案(离子色谱仪)

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2结果与讨论 韩春霞潘广文赛默飞世尔科技(中国)有限公司 关键词 脉冲安培；盐酸大观霉素；含量测定 目标建立脉冲安培检测法测定盐酸大观霉素含量的方法 引言 大观霉素(spectinomycin)是一类广谱的氨基糖苷类抗生素，可由Streptomyces spectabilis，Streptomyces flavopersicus和其它Streptomyces相关菌种等发酵得到，它对G+和G-均有抗菌作用，临床中主要用于淋病的治疗。 目前，美国药典34版采用气相色谱测定大观霉素的含量，中国药典2010版中大观霉素含量的测定方法为微生物效价法，欧洲药典7.0版采用安培检测器测定大观霉素含量。安培检测器利用氧化-还原反应原理实现检测，具有灵敏度高、准确性好的特点，已被欧洲药典较早采用且应用不断扩大。 NaOH溶液(50%w/w水溶液， Alfa Aesar) 盐酸大观霉素对照品(中国食品药品检定研究院) 溶液的制备 但是，欧洲药典方法采用三电位的模式进行检测，使得金电极在正常测定样品的同时表面易较快发生钝化，电极损耗较快，使用时灵敏度会逐渐下降，降低了方法的耐用性和稳定性，增加了实验过程中的难度。本实验采用标准四电位检测，具有灵敏度高、电极的耐用性强等诸多优点。 精密称取大观霉素对照品和样品适量，精密称定，分别加水溶解并稀释制成每1mL中约含大观霉素分别为0.05 mg的溶液。 色谱条件 分析柱： Apollo C18(250×4.6 mm，5pm) 淋洗液： 0.1 mol/L三氟乙酸溶液 仪器 淋洗液流速： 1.0 mL/min 衍生液： 0.5 mol/L NaOH； Thermo ScientificM ICS-离子色谱系统，包括： 衍生液流速：0.5 mL/min； -ICS-5000 DP色谱泵 进样体积： 25 pL； -ICS-5000 DC检测器 柱温： 30°℃； -AS-AP自动进样器 检测器： 电化学检测，金电极(P/N 046110)， -ChromeleonTM色谱工作站 标准糖电位 运行时间： 30 min 去离子水(18.2 MQ-cm， Thermo Scientific TMgenPure ProTM UV-TOC， P/N 50131948) 三氟乙酸(安谱， HPLC ) 色谱条件的选择 使用Apollo C18色谱柱分离盐酸大观霉素，结果表明该色谱柱对各色谱峰具有较好的分离度、较高的柱效。分离图谱见图1。 图1盐酸大观霉素色谱图 线性范围与检出限 盐酸大观霉素在0.15~150 mg/L范围内线性良好，A=2.9951C+1.3145， r=0.9999， 检出限为0.0015 pg. 稳定性实验 分别于0、1、2、3、4、5、6、7、8和24小时进样，大观霉素溶液在1小时内的稳定性较差，大观霉素逐 步转化为异构体|与Ⅱ。当溶液放置1小时后，溶液中大观霉素及其异构体达到动态平衡，溶液趋于稳定。 重现性 溶液放置24小时后，重复进样6针，主峰保留时间RSD为0.3%， 峰面积RSD为0.3%。 回收率 加标量 检测值 回收率(%) 1 7.2 6.96 96.7 2 8.1 8.26 102.0 3 10.5 10.76 102.5 4 11.1 11.02 99.3 5 12 11.95 99.6 6 13 12.91 99.3 结论 本方法准确、灵敏，重复性好，可用于盐酸大观霉素含量测定。 SCIENTIFIC 支持手机用户)