月饼中防腐剂检测方案(液相色谱柱)

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超星·期北京豫维科技有限公司联系人：水先生电话：18911849923572017，No.6 58 doi：10.7633/j.issn.1003-6202.2017.06.015 二极管阵列-高效液相色谱法测定月饼中的四种防腐剂 宣 伟 (阜阳市食品药品检验检测中心，安徽阜阳 236000) 摘 要：关于月饼中安赛蜜的检测没有明确的前处理方法，而GB/T 5009.140—2003中对安赛蜜的检测使用的流动相较为复杂，本研究参照 GB/T 5009.140—2003 与 GB/T 23495—2009的处理方法，利用106 g/L亚铁氰化钾溶液- 220 g/L 乙酸锌作蛋白沉淀剂处理样品后，过滤上机，经 Diamonsil Cis柱(250 mm × 4.6 mm，5 um)液相色谱柱分离，甲醇十0.02mol/L乙酸铵溶液(体积比5：95)作为流动相，用二极管阵列检测器进行检测。检测波长选择230 nm，各组分之间分离良好，无干扰，且测定相关系数均在0.9999以上，检测最低限0.000450~0. 000 675 mg/ml(S/N=3)，样品加标回收率为92.5%~102.5%。结果表明，该方法可用于月饼中防腐剂的检测。 关键词：月饼；高效液相色谱法；防腐剂；二极管阵列检测器 中图分类号：TS213.23；TS202.3 文献标志码：A 文章编号：1003-6202(2017)06-0057-03 Simultaneous determination of four antimicrobial reagents in mooncake by high performance liquid chromatographywith photo-diode array XUAN Wei (Fuyang Food and Drug Inspection Center，Fuyang 236000，China) ABSTRACT：There is no pretreatment method of Acesulfame Potassium in moon cake. But the mobile phase in the detection ofAcesulfame in GB/T 5009.140—2003 is complex. According to GB/T 5009.140—2003 and GB/T 23495—2009， we treatedsamples with 106 g/L potassium ferrocyanide solution and 220 g/L zinc acetate solution as protein precipitants. Detecting thefiltrate. The analysis were performed on a Diamonsil Cig column ( 250 mm×4.6 mm，5 um) with diode array detector usingmethanol and 0.02 mol/L ammonium acetate solution (5：95) as the mobile phase. The results showed that 230 nm was thebest detection wavelength； the separation between the individual components was good with no interference，and the determina-tion of linear correlation were all above 0.999 9；the lower limits were 0.000 450-0.000 675 mg/ml (S/N=3)，the averagespiked recoveries range from 92.5% to 102.5%.It was concluded that the method was suitable in the detection of moon cakeproducts. KEYWORDS：moon cake；high performance liquid chromatography；antimicrobial reagents；photo-diode array detector 月饼作为中秋传统美食，其跨地区流通及其常温的贮藏方式决定其货架期一般比较族。因此，一般添加防腐剂用于延长货架期。GB 2760—2014规定月饼防腐剂中安赛蜜和山梨酸的最大使用量不得超过0.3 mg/kg 和1.0g/kg，苯甲酸和糖精钠按照规定不得检出。但是防腐剂超范围、超限量使用现象仍然存在。GB/T 23495—2009规定了月饼等糕点中的苯甲酸、山梨酸、糖精钠处理与检验方法，但是无糕点中安赛蜜的检测方法。目前，关于安赛 蜜的测定仅仅为饮料中安赛蜜的高效液相色谱法，一方面流动相复杂，另一方面也无具体针对月饼等糕点的具体处理方法[2-3]。因此，本研究结合 GB/T23495—2009与 GB/T 5009.140—2003，探讨在GB/T23495 -2009标准规定的高效液相色谱条件下分离该4种防腐剂的可行性，为节省时间、提高效率、避免相互干扰导致结论的误判以及对标准的修订提供参考。 ( 收稿日期：2017-03-01；修回日期：2017-05-10 ) ( 作者简介：宣 伟(1986-)，男，硕士，工程师，研究方向为食品质量安全检测。 ) 超星·期北京豫维科技有限公司联系人：水先生电话：18911849923 宣 伟等：二极管阵列-高效液相色谱法测定月饼中的四种防腐剂/2017年第6期 材料与方法 1.1 材料与试剂 仪器： LC-20AT液相色谱仪(日本岛津公司)；超声波清洗器(德国ELMA)。 试剂：除特别说明外均为分析纯。苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安塞蜜标准液：浓度均为1.0 mg/ml(国家标准物质中心)；甲醇，色谱纯；0.02 mol/L 乙酸铵溶液，称取1.54g乙酸铵用水溶解定容至1000 ml，经0.45 p m 滤膜过滤，超声；220 g/L 乙酸锌溶液；106 g/L亚铁氰化钾溶液。 1.2 方法 1.2.1 样品处理 参照 GB/T 23495—2009，称取粉碎的月饼样品2g于小烧杯中，用20 ml水数次清洗小烧杯将样品移多25ml容量瓶中，超声振荡提取5 min，取出后加2 ml 106 g/L亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入2 ml 220 g/L乙酸锌溶液，摇匀，用水定容至刻度。移入离心管中，4000 r/min离心5 min，吸出上清液，过滤后，滤液待上机分析。 1.2.2 色谱条件 色谱柱：Diamonsil C18 (250 mm ×4.6 mm，粒径5 pm)。 流动相：甲醇+0.02 mol/L 乙酸铵溶液(体积比5：95)；流动相流速：1.0 ml/min；进样量：20 pl；检测波长：230nm；柱温：35℃。 2 结果与分析 2.1 检测波长的选择 图1~图4为4种防腐剂的色谱图，由二极管阵列检测器在190~800 nm 内扫描。 图1 安赛蜜的色谱图 对比4种物质的吸收光谱图得知，在200 nm以 下流动相有吸收，造成噪音过高，200 nm 以上，安赛蜜在226.67 nm处最大吸收，苯甲酸在223.89nm处最大吸收；山梨酸在252.98 nm处最大吸收；糖精钠在207.24 nm 处最大吸收。波长250 nm 处苯甲酸、糖精钠灵敏度太低不能满足检测需要，为此选230 nm 为检测波长。 图2 苯甲酸的色谱图 图3 山梨酸的色谱图 波长/nm 图4 糖精钠的色谱图 在1.2.2节色谱条件下测定，各个组分的色谱图如图5所示。 由图5可见，峰形及分离效果均比较好，混合标准溶液中的安赛蜜、苯甲酸、山梨酸和糖精钠4种物质能够完全分离，出峰时间分别是 10.146、12.313、17.288、21.330 min。峰的对称性良好，峰与峰之间的分离效果好，无干扰。 2.3 线性范围和检出限 表1为各个组分的线性范围、线性回归方程、相关系数以及最小检出限。按实验方法进行测定，配置上述四种防腐剂的浓度为0.020、0.040、0.060、0.080、0.100 mg/ml，以各组分的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，得到4种防腐剂的线性方程，并按3倍信噪比计算出各组分的检出限，结果见表1。 由表 1可以看出，最小检出限在0.000 450 mg/ml，其相关系数都在0.9999以上，线性相关性强。 表1 线性范围、线性回归方程、相关系数及最小检出限 组分 线性范围/mg·ml-1 线性回归方程 相关系数r 最小检出限/mg·ml-1 安赛蜜 0.020~0.100 Y=4.34913×10x+17 002.5 0.9999901 0.000450 苯甲酸 0.020~0.100 Y=4.764 29×10x+25 926.6 0.9999814 0.000675 山梨酸 0.020~0.100 Y=9.225 81×10x+43350.9 0.999 985 3 0.000594 糖精钠 0.020~0.100 Y=3.112 13×10x+9 214.32 0.999 9902 0.000513 2.4 样品测定回收率 表2为各个组分的样品回收率，回收率在92...5%~102.5%，满足检测要求。 表2 各组分的样品回收率 组分 样品本底含量 加标值 测定值 回收率 mg·ml-1 mg·ml-1 mg·ml-1 % 安赛蜜 0.040 0.039 97.5 0.060 0.057 95.0 0.040 0.041 102.5 苯甲酸 0.060 0.061 101.7 山梨酸 0.040 0.038 95.0 0.060 0.058 96.7 糖精钠 0.040 0.037 92.5 0.060 0.056 93.3 注：“一”表示未检出。 3 结论 在 GB/T 23495—2009标准规定的高效液相色谱条件下，各个组分之间分离良好，无干扰，食品中 的成分复杂、杂质多。标样的出峰时间在10 min后，能够有效地避免食品中的杂质峰，样品在25 min后检测结束，同样有效地杜绝了食品中的杂质对下一个样品的影响。测定的相关系数均在0.9999以上，检测最低限在0.000 450~0.000 675 mg/ml(S/N=3)，样品加标回收率为92.5%~102.5%，符合要求，该法可用于月饼中4种防腐剂的同时检测。 ( [参考文献] ) ( [ 1 1] 卫生部.食品添加剂使用卫生标准：GB2760—20 1 4[ S ].北京：中国标准出版社，2014. ) ( [2] 卫生部.饮料中乙酰磺胺酸钾的测定：GB/T5 0 09.140 一 2003[S].北京：中国标准出版社，2003. ) ( 3 中国标准化研究院.食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定高效液相色谱法：GB/T 2 349 5— 2009[S].北京：中国标准出版 社 ， 2009. ) ( (责任编辑：赵琳琳) ) 网址： www. yuweichina. com邮箱water com 于月饼中安赛蜜的检测没有明确的前处理方法，而GB/T 5009.140—2003中对安赛蜜的检测使用的流动相较为复杂，本研究参照GB/T 5009.140—2003与GB/T 23495—2009的处理方法，利用106 g /L亚铁氰化钾溶液+ 220 g/L乙酸锌作蛋白沉淀剂处理样品后，过滤上机，经Diamonsil C18柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm)液相色谱柱分离，甲醇+0.02 mol/L乙酸铵溶液(体积比5∶95)作为流动相，用二极管阵列检测器进行检测。检测波长选择230 nm，各组分之间分离良好，无干扰，且测定相关系数均在0.999 9以上，检测最低限0.000 450～0.000 675 mg/ml(S/N=3)，样品加标回收率为92.5%～102.5%。结果表明，该方法可用于月饼中防腐剂的检测。