方案详情文
智能文字提取功能测试中
。294·中国医药工业杂志 Chinese Journal of Pharmaceuticals 2008,39(4) 银黄胶囊中黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素及绿原酸的毛细管电泳法测定 龚红全,毋福海*,张晖燕^ (广东药学院,广东广州510224) 摘要:建立了CE法同时测定银黄胶囊中黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素和绿原酸。采用未涂层弹性融硅石英毛细管柱,以40mmol/L 硼砂溶液-15mmol/Lβ-环糊精(pH9.35)为运行缓冲液,分离电压12kV,重力进样,检测波长280nm。以对氨基苯甲酸为内标,黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素、绿原酸的线性范围分别为2.5~12.5、10~80、1.25~10、15~120ug/ml;平均回收率分别为104.6%、97.2%、98.5%、95.8%, RSD分别为1.71%、2.91%、2.09%、2.83%。 关键词:银黄胶囊;黄芩素;汉黄芩苷;汉黄芩素;绿原酸;毛细管电泳;测定 中图分类号:TQ460.7*2;O657.8 文献标识码:A 文章编号:1001-8255(2008)04-0294-03 Determination of Baicalein, Wogonoside, Wogonin and Chlorogenic Acid in YinhuangCapsules by Capilary Electrophoresis GONG Hong-quan, WU Fu-hai*,ZHANG Hui-yan- (Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510224) ABSTRACT: A CE method was established for the determination of baicalein, wogonoside,wogonin andchlorogenic acid in Yinhuang capsules. An uncoated fused silica capillary was used with 40mmol/L borax solution-15mmol/L B-CD buffer solution (pH 9.35)as running buffer at applied voltage of 12kV and detection wavelengthof 280nm. The sample was injected by gravitational force. p-Aminobenzoic acid was used as the internal standard.The linear ranges of baicalein, wogonoside, wogonin and chlorogenic acid were 2.5-12.5, 10-80,1.25-10.0 and 15-120ug/ml, respectively. The average recoveries were 104.6%, 97.2%,98.5% and 95.8%, with RSDs of 1.71%,2.91%,2.09%, 2.83%, respectively. Key Words: Yinhuang capsule; baicalein; wogonoside; wogonin; chlorogenic acid; CE; determination 银黄胶囊是由金银花提取物与黄芩提取物制成的中药成方制剂,具清热解毒之功效,临床用于治疗急慢性扁桃体炎、急慢性咽喉炎和上呼吸道感染。有文献报道黄芩苷的HPLC法测定[国家食品药品监督管理局标准(试行)YBZ13372004],黄芩药材中黄芩素(baicalein, 1)、黄芩苷等组分的HPLC ( ▲本院公共卫生学院卫生检验专业2003级学 生 ) ( 收稿日期:20 0 7-10-09 ) ( 基金项目:广东省自然科学基金资 助 项目(50 0 2841) ) ( 作者简介: 龚 红全(1981 ) ,男,硕士 研 究 生, 专业方向:现代分析方法 在 中药质量控 制 中的应用研究。 ) ( Tel: 0 13631430501 ) ( E-mail: gonghongquan@163.com ) ( 通讯联系人:毋福海(1961), 男 ,教授,从事现代分析方法在中药质 量 控制中的应用研究。 ) ( Tel:013610124722 ) ( E-mail: fuhaiwu@163.com ) 测定和银黄胶囊中黄芩苷、绿原酸(chlorogenicacid, 4)的HPLC测定。但未见毛细管电泳(CE)法同时测定1、汉黄芩苷(wogonoside, 2)、汉黄芩素(wogonin, 3)和4含量的报道。本研究建立了CE法,以对氨基苯甲酸为内标,测定银黄胶囊中1、2、3、4组分,方法分离效果好、快速、简便。 1仪器与试药 CL1030型高效毛细管电泳仪(北京彩陆科学仪器有限公司); K-2501型紫外-可见检测器(德国诺尔公司);HW-2000色谱工作站2.17版(南京千谱软件有限公司)。 1、3、4对照品(中国药品生物制品检定所,批号分别为111595-200604、111514-200403、110753-200411,含量均为99.9%);2对照品(安徽芜湖尔尔塔医药科技有限公司,含量98.04%);银黄胶囊(中山市中智制药有限公司,批号分别为20050905、20050906、20050910,每粒0.3g);其它试剂均为 分析纯,水为重蒸水。 2方法与结果 2.1 溶液的配制 内标贮备液:精密称取对氨基苯甲酸适量,加甲醇溶解并稀释制成100ug/ml的内标贮备液。 对照品溶液:精密称取1、3对照品各12.5mg,各置250ml量瓶中,加甲醇溶解并定容,摇匀,分别作为1、3对照品贮备液;精密称取2对照品10mg,置25ml量瓶中,加甲醇溶解并定容,摇匀,作为2对照品贮备液;精密称取4对照品15mg, 置25ml量瓦中,加50%甲醇溶解并定容,摇匀,作为4对照品贮备液。 供试品溶液:取本品20粒,精密称定,倾出内容物,精密称取混匀的内容物细粉约0.5g, 置具塞锥形瓶中,加50%甲醇50ml,称定,超声处理60min,冷却后称重,用50%甲醇补足损失的重量,摇匀,过滤。精密量取续滤液2ml,置10ml 量瓶中,精密加入内标贮备液1ml,加50%甲醇定容,摇匀,经0.45um滤膜过滤,作为供试品溶液。 运行缓冲液:精密称取硼砂3.05g、β-环糊精(B-CD)3.40g置200ml量瓶中,加水溶解并定容,摇匀,经0.45um滤膜过滤,作为运行缓冲液。 2.2 电泳操作条件 毛细管柱未涂层弹性融硅石英毛细管柱(75pm×55cm);运行缓冲液 40mmol/L硼砂溶液-15mmol/L B-CD(pH9.35);分离电压 12kV;重力进样 5s(高度15cm);检测波长280nm;温度25℃。 为使在高电压下正常运转,环境相对湿度需小于70%。毛细管柱使用前依次用0.1mmol/L氢氧化钠溶液、水、运行缓冲液各冲洗约5min。样品分析间隔用运行缓冲液平衡2min。在此条件下,对照品溶液、供试品溶液色谱图见图1。 图1对照品溶液(A)和供试品溶液(B)的毛细管电泳色谱图 2.3 线性试验 取适量1、2、3、4对照品贮备液与内标贮备液,分别加甲醇稀释成含12.5、5、7.5、10、12.5ug/ml,含210、20、40、60、80ug/ml,含31.25、2.5、5、7.5、10ug/ml,含415、30、60、90、120ug/ml,内标浓度均为10ug/ml的溶液,进样测定。以对照品与内标峰面积比值(Y)对相应对照品溶液浓度(c)进行线性回归,得1、2、3和4的回归方程分别为: Y=0.0406c +0.0033, r=0.9986; Y=0.0563c,+0.1346, r=0.9981; Y=0.1199cg+0.0240,r=0.9995; Y=0.0160c+0.0517, r=0.9984。表明1、2、3、4分别在2.5~12.5、10~80、1.25~10和15~ 120ug/ml度范围内与峰面积的线性关系良好。 2.4 精密度、稳定性和重复性试验 取1、2、3、4浓度分别为7.5、40、5、60ug/ml的对照品溶液,重复测定5次,计算得各对照品峰面积RSD分别为1.08%、1.35%、0.72%、0.77%。 取供试品溶液于0、2、4、6、8、10、12h,分别进样测定,1、2、3、4峰面积的RSD分别为1.15%、0.74%、2.68%、0.93%,表明供试品溶液在12h内稳定。 取同一批(批号20050906)样品6份,按“2.1”项下方法提取、测定。结果测得1、2、3、4的平均含量分别为4.72、13.74、1.31、12.00mg/g,RSD分别为2.57%、1.97%、2.87%、2.88%。 2.5 回收率试验 精密称取银黄胶囊(批号20050906)共6份,加入适量1、2、3、4对照品,按“2.1”项下方法处理并测定,计算得1、2、3、4的平均回收率分别为104.6%、97.2%、98.5%、95.8%, RSD分别为1.71%、2.91%、2.09%、2.83%。 2.6样品测定 取银黄胶囊3批,按“2.1”项下方法处理后测定,记录峰面积,由回归方程计算样品中1、2、3、4的含量,结果见表1。可见,不同批号样品含量差异较大,可能与生产时所投药材质量有关。 表1样品测定结果 批号 1 2 3 4 含量/mg·粒 RSD/% 含量/mg粒 RSD/% 含量/mg粒 RSD/% 含量/mg·粒 RSD/% 20050905 1.33 3.00 4.17 2.88 0.40 2.27 3.93 2.11 20050906 1.44 2.58 4.18 1.96 0.40 2.67 3.65 2.88 20050910 7.32 0.94 1.53 1.37 2.51 0.74 2.39 0.79 3讨论 3.1检测波长的选择 1、2、3、4分别在275、270、278和315nm处有最大吸收,因样品中1、3的量远低于2和4,故参照文献的波长选择原则,以280nm作为检测波长。 3.2 内标物的选择 为克服毛细管电泳重现性差的缺点,本研究采用内标法定量。曾选用在280nm处有吸收的苯甲酸钠、对硝基苯甲酸、对氨基苯甲酸为内标物,结果苯甲酸钠在体系中不出峰;对硝基苯甲酸与4峰后一未知峰分不开;对氨基苯甲酸峰型好,在样品中无干扰,故选作内林物。 3.3 电泳条件的选择 黄芩药材及银黄制剂3-51中黄芩苷、4的含量测定,主要采用毛细管区带电泳,缓冲液为硼砂溶液。因1、3极性较强,易离子化,在硼砂溶液中,1中邻二羟基基团更易形成络离子⑥,加大离子化;但只用硼砂时1和3峰完全重叠。尝试添加十二烷基磺酸钠、羟丙基-β-CD,效果均不好,故本研究选择硼砂溶液-β-CD为运行缓冲液。同时在β-CD浓度为5~20mmol/L,硼砂 ( S39-25 苯偶姻的制备 Iwamoto K等[Tetr a hedron Lett, 2006, 47:7175 ) 芳香醛碱性条件下于水中经溴化1,3-二正十二烷基苯并咪唑鑰作用,室温反应1~30h生成苯偶姻。8例收率为38%~ 溶液浓度为10~50mmol/L,缓冲液pH7.0~10.0,工作电压为9~24kV范围内分别进行试验研究,最终选择40mmol/L硼砂溶液-15mmol/L β-CD溶液(pH 9.35)为运行缓冲液,工作电压为12kV。 ( 参考文献: ) ( [1 ] 周晓宁,杨 滨.高效液相色谱-电化学检测法测定黄芩中3种有效成分的含量[J] . 中国 中 药杂志,2006,31(1):47-50. ) ( 2 刘永利,李冬梅,冯 吗 丽, 等 .RP-HPLC同时测定银黄胶囊中绿原酸与黄芩苷含量[J]. 中成 药,2006,28(8):1142-1144. ) ( [3] Yu K , Gong Y-F, Lin Z-Y,e t al.Quantitative analysis and chromatographic f i ngerprinting for the quality evaluation of Scutellaria b aicalensis G eorgi u s ing c a pillaryelectrophoresis [ J]. J Pharm B iomed Anal, 2007, 43 ( 2): 540-548. ) ( [4 ] 杨 新,韩凤梅,程智勇,等.银黄冲剂中黄芩苷和绿原酸的 毛 细管电泳分离分析[J].色谱,1999,17(6):573-575. ) ( [5] 吕元琦,邬春华,袁倬斌.毛细管电泳法测定清开灵口服液和银黄片中的黄芩甙和绿原酸[J].理化检验:化学分册, 2006,42(5):337-338. ) ( [6] 陈 义.毛细管电泳技术及应用[M].北京:化学工业出版 社,2000:173-174. ) ( 6-66飞6-6-66666-666666666-666.6666666-666666666-66 ) ( 98% 。 对硝基(或对 二 甲胺基)苯甲醛不能反应。以DBU为碱的收率优于三乙胺或氢氧化钠。 ) ( [史丽鸿摘] ) ◎China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net
关闭还剩1页未读,是否继续阅读?
继续免费阅读全文产品配置单
北京华阳利民仪器有限公司为您提供《银黄胶囊中黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素及绿原酸检测方案(毛细管电泳仪)》,该方案主要用于化药制剂中含量测定检测,参考标准《暂无》,《银黄胶囊中黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素及绿原酸检测方案(毛细管电泳仪)》用到的仪器有高效毛细管电泳仪(紫外检测)CL1030。
我要纠错相关方案