青霉素V钾中有关物质分析检测方案(液相色谱柱)

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BP 2017方法青霉素V钾的有关物质分析 MW ： 388.48 按照BP 2017青霉素V钾有关物质项下方法，对客户提供的青霉素V钾系统适用性溶液进行分析，为实现杂质F差向异构体之间的良好分离筛选合适的C18色谱柱。 首先，使用客户指定的CAPCELL PAK C18 ACR S3； 4.6 mm i.d.×150mm色谱柱，对青霉素V钾系统适用性溶液进行分析，结果如图1。杂质F的差向异构体之间分离度为2.09，不满足BP对分离度不小于3.0的要求。 图1青霉素V钾系统适用性性液分析色谱图(ACR) 注：峰上标数字为分离度。 HPLC Conditions ： 色谱柱： CAPCECLL PAK C18 ACR S3； 4.6 mm i.d. ×150 mm 1.5 mL / min 50°C PDA254nm 检一 样 青霉素V钾系统适用性溶液 4 mg/mL(客户提供) 进样量： 20pL 溶 剂： 取 200mM磷酸二氢钾溶液 250 mL， 加水500mL， 混匀，用8.4 g/L 的氢氧化钠调节 pH至6.5，加水定容至1000 mL， 即得。 * pH3.4磷酸盐缓冲液：称尔磷酸二氢钾68g， 加水至1000 mL， 用磷酸调节 pH至3.4， 备用。 由于流动相为甲醇体系的梯度条件，而流速为1.5 mL/min，分析压力较高，当使用CAPCELL PAK C18 MG、MGII两款常规色谱柱进行分析时，分析压力高于色谱柱的最大耐压范围(0-20MPa)；因此尝试使用柱压较低的CAPCELL PAK C18 AQ S3； 4.6 mmi.d.×150 mm色谱柱，对青霉素V钾系统适用性溶液进行分析，结果如图2。杂质F的差向异构体之间分离度为2.78，仍不满足BP分离度不小于3.0的要求；即使对流动相梯度条件进行微调，分离度仍未得到明显改善。 mAU 图2青霉素Ⅴ钾系统适用性溶液分析色谱图(AQ) 注：峰上标数字为分离度。 HPLC Conditions ： 色谱柱： CAPCECLL PAK C18 AQ S3；4.6 mm i.d.×150 mm 流动相： A： pH3.4磷酸盐缓冲液*/甲醇/水=10/30/60 B： pH 3.4磷酸盐缓冲液*/甲醇/水=5/60/35 B%15%(0min) - 15%(2min) -> 30% (5min) -> 100%(17min) -> 100%(22min) 流速1.5 mL / min温度检测样品 50°C PDA 254 nm 青霉素Ⅴ钾系统适用性溶液4 mg/mL(客户提供) 进样量： 20pL 溶剂： 取200mM磷酸二氢钾溶液250 mL， 加水500mL， 混匀，用8.4 g/L 的氢氧化钠调节 pH至6.5，加水定容至1000mL， 即得。 *pH3.4磷酸盐缓冲液：称取磷酸二氢钾68g，加水至1000mL， 用磷酸调节pH至3.4，备用。 接下来，继续尝试使用资生堂高柱效、高耐压(最高耐压60MPa) 的CAPCELL CORE C18 S2.7；4.6 mm i.d.×150mm色谱柱对青霉素V钾系统适用性溶液进行分析，结果如图3。杂质F的差向异构体之间分离度为3.56，满足BP分离度不小于3.0的要求。 图3青霉素V钾系统适用性溶液分析色谱图 (CORE C18) 注：峰上标数字为分离度。 HPLC Conditions ： 50°C PDA 254 nm 青霉素Ⅴ钾系统适用性溶液 4 mg/mL(客户提供) 进样量： 20 pL 溶齐： 取200mM磷酸二氢钾溶液250 mL， 加水500mL，混匀，用8.4 g/L 的氢氧化钠调节 pH至6.5，加水定容至1000mL， 即得。 *pH3.4磷酸盐缓冲液：称取磷酸二氢钾68g， 加水至1000 mL， 用磷酸调节pH至3.4，备用。 综上，按照BP2017方法，使用资生堂耐压60 MPa的CAPCELL CORE C18 S2.7； 4.6 mm i.d.×150mm色谱柱，对客户提供青霉素V钾系统适用性溶液进行分析，杂质F差向异构体之间的分离度满足BP不小于3.0的要求。 LC Application Lab， Shiseido China No.31， BDA International Business Park， 2 Jing Yuan Bei Street， Economic Technological Development Zone， Beijing， China 100176 Phone 010-5845-1812，FAX 010-6785-6882 BP 2017方法 青霉素V钾的有关物质分析青霉素V钾PENICILLIN V POTASSIUMMW：388.48按照BP 2017青霉素V钾有关物质项下方法，对客户提供的青霉素V钾系统适用性溶液进行分析，为实现杂质F差向异构体之间的良好分离筛选合适的C18色谱柱。首先，使用客户指定的CAPCELL PAK C18 ACR S3; 4.6 mm i.d. × 150 mm色谱柱，对青霉素V钾系统适用性溶液进行分析，结果如图1。杂质F的差向异构体之间分离度为2.09，不满足BP对分离度不小于3.0的要求。图1 青霉素V钾系统适用性溶液分析色谱图（ACR）注：峰上标数字为分离度。由于流动相为甲醇体系的梯度条件，而流速为1.5 mL/min，分析压力较高，当使用CAPCELL PAK C18 MG、MGII两款常规色谱柱进行分析时，分析压力高于色谱柱的最大耐压范围（0-20 MPa）；因此尝试使用柱压较低的CAPCELL PAK C18 AQ S3; 4.6 mm i.d. × 150 mm色谱柱，对青霉素V钾系统适用性溶液进行分析，结果如图2。杂质F的差向异构体之间分离度为2.78，仍不满足BP分离度不小于3.0的要求；即使对流动相梯度条件进行微调，分离度仍未得到明显改善。图2 青霉素V钾系统适用性溶液分析色谱图（AQ）注：峰上标数字为分离度。接下来，继续尝试使用资生堂高柱效、高耐压（最高耐压60 MPa）的CAPCELL CORE C18 S2.7; 4.6 mm i.d. × 150 mm色谱柱对青霉素V钾系统适用性溶液进行分析，结果如图3。杂质F的差向异构体之间分离度为3.56，满足BP分离度不小于3.0的要求。图3 青霉素V钾系统适用性溶液分析色谱图（CORE C18）注：峰上标数字为分离度。综上，按照BP 2017方法，使用资生堂耐压60 MPa的CAPCELL CORE C18 S2.7; 4.6 mm i.d. × 150 mm色谱柱，对客户提供青霉素V钾系统适用性溶液进行分析，杂质F差向异构体之间的分离度满足BP不小于3.0的要求。