肌酸、肌酸酐中分离度检测方案(液相色谱柱)

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肌酸与肌酸酐的分析 客户提供肌酸、肌酸酐样品，希望实验室帮忙实现二者的良好分离与保留。 由于肌酸和肌酸酐极性较强，我们首先尝试在酸性条件下(0.05%磷酸)，使用高表面极性色谱柱CAPCELL PAK C18 AQ S3与CAPCELL PAK ADME S5两款色谱柱，分别对二者混合样品进行分析，结果如图1所示，肌酸的保留时间分别为2.30和3.12 min， 保留较弱。 图1肌酸、肌酸酐混合溶液分析色谱图(0.05%磷酸溶液) *注：峰上标数字为保留时间。 HPLC Conditions ： 色谱柱： CAPCECLL PAK C18 AQ S3； 4.6 mm i.d. ×250 mmCAPCECLL PAK ADME S5； 4.6 mm i.d.×250 mm 流动相： 0.05%磷酸溶液 流1.0 mL/min 温 检 40°C 速度测样品品肌酸、肌酸酐混合溶液(肌酸100.9 mg/mL、肌酸酐 84.1 mg/mL) PDA210 nm 进样量： 10uL 为增强保留，尝试在中性条件下，以 200 mmol/L 高氯酸钠溶液为流动相对肌酸和肌酸酐进行分析，结果如图2所示。使用 AQ S3 色谱柱进行分析时，肌酸、肌酸酐的保留时间分别为 3.36 min、5.23 min。使用 ADME S5 色谱柱进行分析时，肌酸、肌酸酐的保留时间分别为 3.48 min、6.29 min。ADME 色谱柱较AQ S3 色谱柱整体保留较强。 图2肌酸、肌酸酐混合溶液分析色谱图(200mmol/L 高氯酸钠溶液) *注：峰上标数字为保留时间。 HPLC Conditions： 色谱柱： CAPCECLL PAK C18 AQ S3； 4.6 mm i.d.×250 mm CAPCECLL PAK ADME S5； 4.6 mm i.d.x250mm 流动相： 200 mmol/L 高氯酸钠溶液 流速1.0 mL/min温度检测样品 40°C PDA210 nm 肌酸、肌酸酐混合溶液(肌酸100.9 mg/mL、肌酸酐 84.1 mg/mL) 进样量： 10 pL 进一步将 200 mmol/L 高氯酸钠溶液的 pH 调至酸性(pH=2.74)，以 ADME S5 色谱柱对肌酸、肌酸酐混合样品进行分析，结果如图3所示。肌酸、肌酸酐保留时间分别延长至4.45、5.07，二者间分离度为3.12，达到基线分离。 图3肌酸、肌酸酐混合溶液分析色谱图(200 mmol/L 高氯酸钠溶液、pH2.74) *注：峰上标数字由下至上依次为分离度与保留时间。 HPLC Conditions ： 色谱柱：CAPCECLL PAK ADME S5； 4.6 mm i.d.×250 mm 流动相： 200 mmol/L 高酒酸钠溶液(pH 2.74) 1.0 mL/min 40°C 流速温度检测样羊品肌酸、肌酸酐混合溶液(肌酸100.9mg/mL、肌酸酐 84.1mg/mL) PDA210 nm 进样量： 10 pL 综上所述，使用键合金刚烷基的高表面极性色谱柱 CAPCELL PAK ADME S5； 4.6 mm i.d.×250 mm，对肌酸和肌酸酐进行分析，可得到较好保留与充分分离，在200 mmol/L 高氯酸钠溶液(pH2.74)条件下，肌酸、肌酸酐保留时间分别延长至4.45min、5.07min，且能得到基线分离。 LC Application Lab， Shiseido China No.31，BDA International Business Park， 2 Jing Yuan Bei Street，Economic Technological Development Zone，Beijing， China 100176 Phone 010-5845-1809， FAX010-6785-6882 肌酸与肌酸酐的分析 客户提供肌酸、肌酸酐样品，希望实验室帮忙实现二者的良好分离与保留。由于肌酸和肌酸酐极性较强，我们首先尝试在酸性条件下（0.05%磷酸），使用高表面极性色谱柱CAPCELL PAK C18 AQ S3与CAPCELL PAK ADME S5两款色谱柱，分别对二者混合样品进行分析，结果如图1所示，肌酸的保留时间分别为2.30 和3.12 min，保留较弱。图1 肌酸、肌酸酐混合溶液分析色谱图（0.05%磷酸溶液）*注：峰上标数字为保留时间。为增强保留，尝试在中性条件下，以200 mmol/L高氯酸钠溶液为流动相对肌酸和肌酸酐进行分析，结果如图2所示。使用AQ S3色谱柱进行分析时，肌酸、肌酸酐的保留时间分别为3.36 min、5.23 min。使用ADME S5色谱柱进行分析时，肌酸、肌酸酐的保留时间分别为3.48 min、6.29 min。ADME 色谱柱较AQ S3 色谱柱整体保留较强。图2 肌酸、肌酸酐混合溶液分析色谱图（200 mmol/L高氯酸钠溶液）*注：峰上标数字为保留时间。进一步将200 mmol/L高氯酸钠溶液的pH调至酸性（pH=2.74），以ADME S5色谱柱对肌酸、肌酸酐混合样品进行分析，结果如图3所示。肌酸、肌酸酐保留时间分别延长至4.45、5.07，二者间分离度为3.12，达到基线分离。图3 肌酸、肌酸酐混合溶液分析色谱图（200 mmol/L高氯酸钠溶液、pH 2.74）*注：峰上标数字由下至上依次为分离度与保留时间。综上所述，使用键合金刚烷基的高表面极性色谱柱CAPCELL PAK ADME S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm，对肌酸和肌酸酐进行分析，可得到较好保留与充分分离，在200 mmol/L高氯酸钠溶液（pH2.74）条件下，肌酸、肌酸酐保留时间分别延长至4.45min、5.07min，且能得到基线分离。  LC Application Lab, Shiseido ChinaNo.31, BDA International  Business Park,2 Jing Yuan Bei Street, Economic Technological Development Zone,Beijing, China 100176Phone 010-5845-1809, FAX 010-6785-6882