动物源食品中激素多残留检测方案(其它色谱仪及分离设备)

智能文字提取功能测试中

动物源食品中激素多残留的测定GB/T21981-2008 适用范围 适用于动物源食品中激素多残留的测定（该实验选用基质为猪肉） 参考标准：《GB/T 21981-2008 动物源食品中激素多残留检测方法 液相色谱-质谱/质谱法》 溶液的配置 标准储备液：准确称取适量标准品，用甲醇溶解，配制成浓度为100μg/mL的标准储备液。 内标储备液：准确称取适量内标物质，用甲醇溶解，配制成浓度为100μg/mL的内标储备液。 混合标准储备液：准确移取标准储备液各100μL，用甲醇定容至10mL，浓度为1μg/mL。 混合标准中间液：准确移取混合标准储备液1mL，用甲醇水（1:1）定容至10mL，浓度为0.1μg/mL。 混合标准工作液：准确移取适量混合标准中间液，用甲醇水（1:1）溶解，配制成浓度为1, 2, 5, 10, 20, 40μg/L的混合标准工作液。 混合内标工作液：准确移取内标储备液各10μL，用甲醇定容至10mL，浓度为100μg/L。 甲醇-水溶液（1:1）：量取100mL甲醇，100mL水，混匀。 0.1%甲酸水：量取1mL甲酸，用水定容至1000mL。 二氯甲烷-甲醇溶液（7:3）：量取70mL二氯甲烷，30mL甲醇，混匀。 乙酸-乙酸钠缓冲溶液（pH5.2）：称取43.0g乙酸钠（NaAC·4H2O），加入22mL乙酸，用水溶解并定容至1000mL，用乙酸调节pH到5.2。 β-葡萄糖醛酸酶/芳香基硫酸酯酶溶液：4.5U/mL β-葡萄糖醛酸酶，14U/mL芳香基硫酸酯酶。 提取步骤 试样称取5g，准确加入混合内标工作液100μL和10mL乙酸-乙酸钠缓冲溶液（pH5.2），涡旋混匀，再加入β-葡萄糖醛酸酶/芳香基硫酸酯酶100μL，于37℃±1℃振荡酶解12h。取出冷却至室温，加入25mL甲醇超声提取30min，0℃~4℃下8000r/min离心10min。取上清液转移至离心管中，加入15mL水，摇匀后待净化。 SPE净化步骤 SPE柱：月旭Welchrom® Carb 规格：500mg/6mL。 活化：6ml二氯甲烷-甲醇（7:3）、6ml甲醇、6ml水，弃去； 上样：待净化液全部上样，弃去； 洗脱：加入8ml二氯甲烷-甲醇（7:3）洗脱，收集流出液； 复溶：40℃水浴氮吹至干，用甲醇水（1:1）定容至1ml，供仪器测定。 注意事项 加标水平：5g样品中分别加入0.1mL、0.2mL的0.1μg/mL混合标准中间液，定容至1mL，因此加标水平为2μg/kg，5μg/kg，最终机度数为10ng/mL、20ng/mL。 色谱条件 6.1 UPLC条件 色谱柱： Ultimate UHPLC XB-C18 2.1×100mm，1.8µm 流动相：A: 0.1%甲酸水溶液；B: 甲醇 柱温：40℃；流速：0.3mL/min；进样体积：10µL 梯度洗脱程序：见表1 。 表1、 梯度洗脱程序 时间/min A相/% B相/% 0.00 50 50 8.00 36 64 11.00 16 84 12.50 0 100 14.50 0 100 15.00 50 50 17.00 50 50 6.2质谱条件 检测方式：多反应监测（MRM）模式； 离子源：电喷雾离子源（ESI）； 扫描方式：正离子扫描； 离子喷雾电压：4500 V；离子源温度：500℃； 气帘气（CUR）35 psi；雾化气（GS1）55 psi；辅助气（GS2）55 psi。 其他质谱参数见表2 液质仪器型号：AB Sciex QTRAP 4500 表2、 多反应监测模式（MRM）参数 化合物 母离子(m/z) 子离子(m/z) 驻留时间(msec) 去簇电压DP/V 碰撞能CE/V 群勃龙 271.4 199.3 50 66 24 253.3 50 66 18 炔诺酮 299.3 109.1 50 66 27 231.4 50 66 17 甲基炔酮 313.4 245.4 50 66 20 108.9 50 66 26 乙酸氯地孕酮 405.4 309.6 50 66 16 345.6 50 66 12 勃地酮-d3 290.1 121.0 50 66 22 炔诺酮-13C2 301.5 231.5 50 66 25 炔诺孕酮-d6 319.4 251.4 50 66 21 甲地孕酮乙酸酯-d3 388.1 267.0 50 66 23 色谱图或者加标回收率结果 图1. 激素标准品10μg/L 图谱 图2. 激素标准工作液曲线 图3. 猪肉样品空白图谱 图4. 猪肉样品加标2μg/kg图谱 图5. 猪肉样品加标5μg/kg图谱 表3、加标回收率表 分类 加标水平μg/kg 平均回收率% RSD %（n=6） 群勃龙 2 75.60% 0.88% 5 70.15% 3.16% 炔诺酮 2 113.80% 2.23% 5 104.10% 4.12% 甲基炔酮 2 88.20% 0.74% 5 109.50% 1.39% 乙酸氯地孕酮 2 110.50% 0.59% 5 95.70% 1.26% 8、相关产品信息 货号 名称 规格 00517-20006 SPE小柱 Welchrom® Carb,500mg/6mL,30pk 00837-05006 50mL螺口尖底离心管 Welchrom® 离心管 一次性离心管，平盖，锥形底,RCF12000xg,袋装,未灭菌，50mL，50/包 00837-05002 15mL螺口尖底离心管 Welchrom® 离心管 一次性离心管，平盖，锥形底,RCF12000xg,袋装,未灭菌，15mL，50/包 00824-31001 固相萃取装置 Welch 固相萃取装置，12位方缸 00821-32291 盖子+垫片 Welchrom® 预切口红色特氟龙/白色硅胶隔垫，9mm蓝色短螺纹开口盖 中心孔6mm 100pk 00821-40927 样品瓶 Welchrom® 2mL 透明短螺纹广口样品瓶 带书写处 11.6*32mm 一级水解玻璃 100pk 00201-11012 液相色谱柱 Ultimate UHPLC XB-C18, 1.8μm, 2.1×100mm 声明：除非另有说明，此报告结果仅对该测试样品负责。本报告未经公司许可，不可复制。 Add:上海市松江区明南路85号启迪漕河泾（中山）科技园.紫荆园10号楼 邮编：201600 Add:浙江省金华市婺城区双林南街168号 邮编：321000 Tel:400-810-6969 E-mail:lingyuyu @welchmat.com 适用范围适用于动物源食品中激素多残留的测定（该实验选用基质为猪肉）参考标准：《GB/T 21981-2008 动物源食品中激素多残留检测方法 液相色谱-质谱/质谱法》 Two提取步骤试样称取5g，准确加入混合内标工作液100μL和10mL乙酸-乙酸钠缓冲溶液（pH5.2），涡旋混匀，再加入β-葡萄糖醛酸酶/芳香基硫酸酯酶100μL，于37℃±1℃振荡酶解12h。取出冷却至室温，加入25mL甲醇超声提取30min，0℃~4℃下8000r/min离心10min。取上清液转移至离心管中，加入15mL水，摇匀后待净化。 ThreeSPE净化步骤SPE柱：月旭Welchrom® Carb,500mg/6mL。活化：6ml二氯甲烷-甲醇（7:3）、6ml甲醇、6ml水，弃去；上样：待净化液全部上样，弃去；洗脱：加入8ml二氯甲烷-甲醇（7:3）洗脱，收集流出液；复溶：40℃水浴氮吹至干，用甲醇水（1:1）定容至1ml，供仪器测定。 Four色谱条件UPLC条件色谱柱：Ultimate UHPLC XB-C18  2.1×100mm，1.8µm；流动相：A: 0.1%甲酸水溶液；B: 甲醇；柱温：40℃；流速：0.3mL/min；进样体积：10µL；梯度洗脱程序：见表1 。质谱条件检测方式：多反应监测（MRM）模式；离子源：电喷雾离子源（ESI）；扫描方式：正离子扫描；离子喷雾电压：4500 V；离子源温度：500℃；气帘气（CUR）35 psi；雾化气（GS1）55 psi；辅助气（GS2）55 psi。其他质谱参数见表2