药用大豆油中脂肪酸组成检测方案(气相色谱仪)

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SSL-CA20-188Excellence in Science Excellence in ScienceGC-163 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD.- Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cn Tel：86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn 气相色谱法测定供药用和药用辅料的脂类物质中脂肪酸组成 GC-163 摘要：本文建立了气相色谱仪检测供药用和药用辅料的脂类物质中脂肪酸组成的分析方法。分析结果表明：仪器性能良好，理论塔板数和分离度等参数可满足2020版药典《0713脂肪与脂肪油测定法》中脂肪酸组成测定部分对于系统适用性的要求。脂肪酸甲酯混合溶液重复进样6次，各组分保留时间相对标准偏差小于0.1%，峰面积相对标准偏差小于5%，重复性良好，可依据此方法进行脂肪酸组成的分析。 关键词：气相色谱仪药用辅料 脂肪酸 用辅料中的脂肪酸组成的研究，也同样具有重要的意义。在最新发布的2020版药典中， 《0713脂肪与脂肪油测定法》通则在2015版的基础上，增订了供药用和药用辅料的脂类物质及类似物的脂肪酸组成、反式脂肪酸等测定项目。 本文建立了用气相色谱分析方法测定药用和药用辅料脂类物中脂肪酸组成的方法，对供试样进行甲酯化处理后上机分析，根据各脂肪酸甲酯的保留时间定性，使用峰面积归一化法定量。各色谱峰分离度良好，可满足2020版药典要求。 实验部分 1.1仪器 气相色谱仪： Nexis GC-2030 1.2分析条件 色谱柱： Rtx-wax，， 30 m×0.53mm×1um 柱温程序：70℃(2 min)_5℃ /min _240℃ (24 min) 进样口温度：220℃ 检测器温度：260℃ 载气控制方式：恒流((6.0 mL/min) 氢气流量：32 mL/min 进样方式：分流进样((分流比为 10：1) 空气流量：200mL/min 进样量：1uL 尾吹流量：24 mL/min 1.3样品前处理 结果讨论 2.1标准溶液色谱图 以正庚烷为溶剂配制浓度为 0.1 mg/mL的棕榈酸甲酯、硬脂酸甲酯、油酸甲酯溶液，考察系统适用性。棕榈酸甲酯峰 C16：0 (26.88 min) 和硬脂酸甲酯峰 C18：0 (30.39 min) 相对于油于甲酯峰 C18：19c (30.74min) 的保留时间分别为0.87和0.99，理论塔板数>1000，各色谱峰分离度良好，符合2020药典对于系统适用性的要求。分离度放大图见图1。 uV 图1 系统适用性溶液气相色谱放大图 以正庚烷为溶剂配制总浓度为10 mg/mL 脂肪酸甲酯混合标准溶液，气相色谱图见图2，相关化合物信息见表1。 图2脂肪酸甲酯混合标准溶液气相色谱图 表1 常见脂肪酸甲酯信息 No. 中文名称 简称 CAS# 保留时间 (min) 1 丁酸甲酯 C4：0 623-42-7 2.50 2 己酸甲酯 C6：0 106-70-7 5.27 3 辛酸甲酯 C8：0 111-11-5 9.64 4 癸酸甲酯 C10：0 110-42-9 14.38 5 十一烷酸甲酯 C11：0 1731-86-8 16.68 6 十二烷酸甲酯 C12：0 111-82-0 18.89 7 十三烷酸甲酯 C13：0 1731-88-0 21.00 8 十四烷酸甲酯 C14：0 124-10-7 23.04 9 十四碳烯酸甲酯(顺-9-+反-9) C14：1 c+1 72025-18-4 56219-06-8 23.77 10 十五烷酸甲酯 C15：0 7132-64-1 25.00 11 十五碳烯酸甲酯(顺-10+反-10) C15：1 c+t 90176-51-5 90176-52-6 25.71 12 十六烷酸甲酯 C16：0 112-39-0 26.88 13 十六碳烯酸甲酯(顺-9-+反-9) C16：1 c+t 10030-74-7 1120-25-8 27.36 14 十七烷酸甲酯 C17：0 1731-92-6 28.68 15 十七碳烯酸甲酯(顺-10+反-10) C17：1c+t 369657-02-3 75190-82-8 29.15 16 十八烷酸甲酯 C18：0 112-61-8 30.41 14620-36-1 2462-84-2 17 十八碳烯酸甲酯(顺-6+反-6+顺-9+反-9+顺-12+反-12) C18：1 c+t 6198-58-9 30.79 2777-58-4 6198-58-9 18 十八碳二烯酸甲酯(顺-9，12+反-9，12) C18：2 c+t 2566-97-4 31.56 112-63-0 19 十九碳烯酸甲酯(反-7+反-10) C19：1 t 一- 32.05 84675-68-3 20 十八碳三烯酸甲酯(顺-6，9，12) C18：3n6 16326-32-2 32.44 21 十八碳三烯酸甲酯(顺-9，12，15) C18：3n3 301-00-8 32.61 22 二十烷酸甲酯 C20：0 1120-28-1 33.68 23 二十碳烯酸甲酯(顺-11+反-11) C20：1c+t 69119-90-0 2390-09-2 34.02 24 二十碳二烯酸甲酯(顺-11，14) C20：2 2463-02-7 34.77 25 二十一烷酸甲酯+ C21：0+ 6064-90-0 35.22 二十碳三烯酸甲酯(顺-8，11，14) C20：3n6 21061-10-9 26 二十碳三烯酸甲酯(顺-11，14，17) C20：3n3 55682-88-7 35.57 27 二十碳四烯酸甲酯(酯-5，8，11，14) C20：4n6 2566-89-4 35.80 28 二十碳五烯酸甲酯(顺-5，8， 11，14，17) C20：5n3 2734-47-6 36.62 29 二十二烷酸甲酯 C22：0 929-77-1 36.78 30 二十二碳烯酸甲酯(顺-13+反-13) C22：1 c+t 1120-34-9 7439-44-3 37.19 31 二十二碳二烯酸甲酯(顺-13，16) C22：2 61012-47-3 38.10 32 二十三烷酸甲酯 C23：0 2433-97-8 38.62 33 二十二碳四烯酸甲酯(顺-7，10，13，16) C22：4 13487-42-8 39.19 34 二十二碳五烯酸甲酯(顺7，10， 13， 16，19) C22：5n3 108698-02-8 39.86 35 二十四烷酸甲酯+ C24：0+ 2442-49-1 40.79 41.54 二十二碳五烯酸甲酯(顺-4，7，10，13，16) C22：5n6 108698-02-8 36 二十二碳六烯酸甲酯(顺-4，7，10，13， 16，19)+ C22：6n3+ 2566-90-7 二十四碳烯酸甲酯(顺-15) C24：1 2733-88-2 2.2重复性实验 用正庚烷配制总浓度为10 mg/L的脂肪酸甲酯标准溶液，重复测试6次，计算相对标准偏差。6次重复测试的保留时间相对标准偏差小于0.1%，峰面积相对标准偏差小于5%，重复性良好。具体结果见表2： 表2 重复性实验结果((n=6) No. 化合物 保留时间 RSD (%) 峰面积 RSD (%) No. 化合物 保留时间 RSD (%) 峰面积 RSD (%) 1 C4：0 0.04 4.92 19 C19：1t 0.01 3.37 2 C6：0 0.04 1.09 20 C18：3n6 0.01 3.37 3 C8：0 0.02 2.77 21 C18：3n3 0.01 3.44 4 C10：0 0.01 2.85 22 C20：0 0.01 3.08 5 C11：0 0.01 3.16 23 C20：1 c+t 0.01 3.19 6 C12：0 0.01 3.22 24 C20：2 0.01 3.30 C13：0 0.01 3.34 25 C21：0+C20：3n6 0.01 3.28 8 C14：0 0.01 3.34 26 C20：3n3 0.01 3.36 9 C14：1 c+t 0.01 3.39 27 C20：4n6 0.01 3.34 10 C15：0 0.01 3.27 28 C20：5n3 0.01 3.76 11 C15：1 c+t 0.01 3.33 29 C22：0 0.03 3.79 12 C16：0 0.01 3.32 30 C22：1 c+t 0.01 3.13 13 C16：1 c+t 0.01 3.40 31 C22：2 0.01 3.15 14 C17：0 0.01 3.30 32 C23：0 0.01 2.96 15 C17：1 c+t 0.01 3.30 33 C22：4 0.02 3.10 16 C18：0 0.01 3.32 34 C22：5n3 0.01 3.10 17 C18：1 c+t 0.01 3.29 35 C24：0+C22：5n6 0.01 3.30 18 C18：2 c+t 0.01 3.33 36 C22：6n3+C24：1 0.02 3.45 2.3样品测试结果 应用本方法对两个药用大豆油样品进行了测定。样品1的色谱图如下： 图3 药用大豆油-1样品色谱图 根据药典要求，按照峰面积归一化法计算样品中脂肪酸甲酯峰含量，结果如下： 表3药用大豆油-1样品脂肪酸组成测试结果 No. 化合物 保留时间 (min) 峰面积 含量(%) C14：0 23.04 74156 0.066 2 C15：0 25.00 14797 0.013 C16：0 26.90 11775101 10.412 4 C16：1 c+t 27.36 102761 0.091 5 C17：0 28.69 111204 0.098 6 C17：1 c+t 29.09 65729 0.058 C18：0 30.45 5134245 4.540 C18：1 c+t 30.82 24304613 21.492 C18：2 c+t 31.65 59394450 52.521 10 C18：3n3 32.64 8527843 7.541 11 C20：0 33.70 394891 0.349 12 C20：1c+t 33.99 377481 0.334 13 C20：2 34.78 36497 0.032 14 C21：0+C20：3n6 35.25 26455 0.023 15 C22：0 36.78 420428 0.372 16 C22：1 c+t 37.18 118158 0.104 17 C22：2 37.95 121688 0.108 18 C23：0 38.61 43084 0.038 19 C24：0 40.88 146901 0.130 样品2的色谱图如下： 图4 药用大豆油-2样品色谱图 根据药典要求，按照峰面积归一化法计算样品中脂肪酸甲酯峰含量，结果如下： 表4药用大豆油-2样品脂肪酸组成测试结果 No. 化合物 保留时间(min) 峰面积 含量(%) C14：0 23.05 68920 0.066 2 C15：0 25.00 9525 0.009 C16：0 26.90 11302366 10.875 C16：1 c+t 27.36 106811 0.103 5 C17：0 28.68 74588 0.072 6 C17：1 c+t 29.08 59306 0.057 C18：0 30.43 2949015 2.838 8 C18：1 c+t 30.80 26430917 25.432 C18：2 c+t 31.62 54441952 52.385 10 C18：3n3 32.61 5610569 5.399 11 C20：0 33.67 450591 0.434 12 C20：1 c+t 33.97 409825 0.394 13 C20：2 34.76 41706 0.040 14 C21：0+C20：3n6 35.22 20727 0.020 15 C22：0 36.77 520381 0.501 16 C22：1 c+t 37.13 244098 0.235 17 C22：2 37.94 34264 0.033 18 C23：0 38.60 101609 0.098 19 C24：0 40.86 157968 0.152 结论 本文建立了气相色谱仪检测供药用和药用辅料的脂类物质中脂肪酸组成的分析方法。分析结果表明：仪器性能良好，理论塔板数和分离度等参数可满足2020版药典《0713脂肪与脂肪油测定法》中脂肪酸组成测定部分对于系统适用性的要求。脂肪酸甲甲混合溶液重复进样6次，各组分保留时间相对标准偏差小于0.1%，峰面积相对标准偏差小于5%，重复性良好，可依据此方法进行脂肪酸组成的分析。 岛津应用云 本文建立了气相色谱仪检测供药用和药用辅料的脂类物质中脂肪酸组成的分析方法。分析结果表明：仪器性能良好，理论塔板数和分离度等参数可满足2020版药典《0713 脂肪与脂肪油测定法》中脂肪酸组成测定部分对于系统适用性的要求。脂肪酸甲酯混合溶液重复进样6次，各组分保留时间相对标准偏差小于0.1%，峰面积相对标准偏差小于5%，重复性良好，可依据此方法进行脂肪酸组成的分析。