肉类中36种兽残检测方案(色谱纯)

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实战宝典 新颁布36项兽残标准前处理关键点和要点（上篇） 由农业农村部、国家卫生健康委员会、国家市场监督管理总局联合发布的36项兽药残留检测标准，于2022年2月1日正式实施，其中32项标准为全新发布。 整个分析过程中，样品前处理所需要的时间约占全部分析时间的 60%-70%，前处理过程引入的误差约占整个误差的 30%-40%，因此样品前处理方法的选取和使用，直接关系到整个分析方法的成败和优劣。 因此，针对其中新颁布国标中6个经常使用的标准：GB 31656.8-2021（有机磷类药物残留量)、GB 31658.17（四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物残留量）、GB 31656.13（硝基呋喃类代谢物多残留）、GB 31658.2（氯霉素残留量）、GB 31658.5（氟苯尼考及氟苯尼考胺残留量）、GB 31656.11（土霉素、四环素、金霉素和多西环素残留量），这些标准的前处理从样品提取、净化等步骤结合标准文本，对相应的关键点和要点等进行了总结。 标准中相关产品咨询电话：400-995-9932 或 133 9125 2363（刘工） 36项新兽残标准目录以及对应样品前处理产品 标准号 标准名称 描述 货号 GB 31656.1-2021 水产品中甲苯咪哩及代谢物残留量的测定高效液相色谱法 Anavo MCX SPE, 60 mg, 3 mL,50/PK AN60A012 GB 31656.2-2021 水产品中泰乐菌素残留量的测定高效液相色谱法 Anavo SCX SPE, 500 mg, 3 mL,50/PK AN60B094 GB 31656.3-2021 水产品中诺氯沙星、环丙沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、噁喳酸、氯甲哇残留量的测定高效液相色谱法 Anavo C18 SPE, 500 mg, 3 mL,50/PK AN60B005 GB 31656.4-2021 水产品中氯丙嗪残留量的测定液相色谱-串联质谱法 Anavo MCX SPE, 60 mg, 3 mL,50/PK AN60A012 GB 31656.5-2021 水产品中安眠酮残留量的测定液相色谱-串联质谱法 Anavo Silica SPE, 500 mg, 3 mL,50/PK AN60B083 GB 31656.6-2021 水产品中丁香酚残留量的测定气相色谱- 质谱法 Anavo C18 SPE, 300 mg, 3 mL,50/PK AN60B116 GB 31656.7-2021 水产品中氯硝柳胺残留量的测定液相色 谱-串联质谱法 Anavo C18 SPE, 100 g,1/PK（填料） AN60B012 GB 31656.8-2021 水产品中有机磷类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法 Anavo PSA SPE, 100 g,1/PK（填料） AN60B079 GB 31656.9-2021 水产品中二甲戊灵残留量的测定液相色谱-串联质谱法 Anavo HLB SPE, 60 mg, 3 mL, 50/PK AN60A002 Anavo C18 SPE, 100 g,1/PK（填料） AN60B012 GB 31656.10-2021 水产品中四聚乙醛残留量的测定液相色 谱-串联质谱法 Anavo C18 SPE, 100 g,1/PK（填料） AN60B012 Anavo PSA SPE, 100 g,1/PK（填料） AN60B079 GB 31656.11-2021 水产品中土霉素、四环素、金霉素和多西环 素残留量的测定 Anavo HLB SPE, 500 mg, 6 mL,30/PK（第一法） AN60A007 Anavo HLB SPE, 60 mg, 3 mL, 50/PK（第二法） AN60A002 GB 31656.12-2021 水产品中青霉素类药物多残留的测定液相色谱-串联质谱法 Anavo HLB SPE, 200 mg, 6 mL,30/PK AN60A005 GB 31613.1-2021 牛可食性组织中氨丙啉残留量的测定 液相色谱－串联质谱法 Anavo HLB SPE, 60 mg, 3 mL, 50/PK AN60A002 牛可食性组织中氨丙啉残留量的测定 高效液相色谱法 Anavo HLB SPE, 500 mg, 6 mL,30/PK AN60A007 GB 31613.3-2021 鸡可食性组织中—硝托胺残留量的测定 Anavo HLB SPE, 60 mg, 3 mL, 50/PK AN60A002 GB 31659.1-2021 牛奶中赛拉嗪残留量的测定液相色谱-串 联质谱法 Anavo HLB SPE, 60 mg, 3 mL, 50/PK AN60A002 GB 31657.1-2021 蜂蜜和蜂王浆中氟胺氤菊酯残留量的测定 气相色谱法 Anavo Florisil SPE, 1 g, 6 mL,30/PK AN60C005 GB 31657.2-2021 蜂产品中哇 诺酮类药物多残留的测定液相 色谱-串联质谱 Anavo HLB SPE, 200 mg, 6 mL,30/PK AN60A005 GB 31658.1-2021 动物性可食性组织中头孢噻呋残留量的测定 高效液相色谱法 Anavo SCX SPE, 100 mg, 1 mL,100/PK AN60B092 Anavo SAX SPE, 500 mg, 6 mL,30/PK AN60B104 牛奶中头孢噻呋残留量的测定 高效液相色谱法 Anavo C18 SPE, 1 g, 6 mL,30/PK AN60B007 Anavo SCX SPE, 100 mg, 1 mL,100/PK AN60B092 GB 31658.2-2021 动物性食品中氯霉素残留量的测定液相色 谱-串联质谱法 Anavo C18 SPE, 500 mg, 3 mL,50/PK AN60B005 GB 31658.3-2021 猪尿中巴氯酚残留量的测定液相色谱-串 联质谱法 Anavo MCX SPE, 60 mg, 3 mL,50/PK AN60A012 GB 31658.4-2021 动物性食品中头弛类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法 Anavo HLB SPE, 500 mg, 6 mL,30/PK AN60A007 GB 31658.5-2021 动物性食品中氟苯尼考及氟苯尼考胺残留量 的测定液相色谱-串联质谱法 Anavo MCX SPE, 60 mg, 3 mL,50/PK AN60A012 GB 31658.6-2021 动物性食品中四环素类药物残留量的测定高效液相色谱法 Anavo HLB SPE, 500 mg, 6 mL,30/PK AN60A007 GB 31658.7-2021 动物性食品中17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇和雌酮残留量的测定 气相色谱－质谱法 Anavo C18 SPE, 500 mg, 3 mL,50/PK AN60B005 Anavo Silica SPE, 500 mg, 3 mL,50/PK AN60B083 GB 31658.8-2021 动物性食品中拟除虫菊酯类药物残留量的测 定气相色谱-质谱法 Anavo AL-N SPE, 500 mg, 6 mL,30/PK AN60C015 GB 31658.9-2021 动物性食品 及尿液中雌激素类药物多残留的 测定液相色谱-串联质谱¥去 Anavo HLB SPE, 200 mg, 6 mL,30/PK AN60A005 Anavo NH2 SPE, 500 mg, 6 mL,30/PK AN60B055 GB 31658.10-2021 动物性食品 中氨基甲酸酯类杀虫剂残留量的 测定液相色谱-串联质谱法 Anavo NH2 SPE, 500 mg, 6 mL,30/PK AN60B055 GB 31658.11-2021 动物性食品中阿苯达唑及其代谢物残留量的测定 高效液相色谱法 Anavo AL-A SPE, 1 g, 6 mL,30/PK AN60C025 Anavo MCX SPE, 150 mg, 6 mL,30/PK AN60A014 GB 31658.12-2021 动物性食品中环丙氨嗪残留量的测定高效 液相色谱法 Anavo MCX SPE, 60 mg, 3 mL,50/PK AN60A012 GB 31658.13-2021 动物性食品中氯苯肌残留量的测定液相色谱-串联质谱法 Anavo HLB SPE, 200 mg, 6 mL,30/PK AN60A005 Anavo AL-N SPE, 500 mg, 3 mL,50/PK AN60C014 GB 31658.16-2021 动物性食品 中阿维菌素类药物残留量的测定 高效液相色谱法和液相色谱-串 联质谱法 Anavo C18 SPE, 500 mg, 6 mL,30/PK AN60B006 GB 31658.17-2021 动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类 药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法 Anavo HLB SPE, 200 mg, 6 mL,30/PK AN60A005 标准中相关产品咨询电话：400-995-9932 或 133 9125 2363（刘工） GB 31656.8-2021水产品中有机磷类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法 原理： 试样中有机磷类药物的残留经酸化乙腈提取，经 PSA 吸附剂净化（QuEChERS方法），液相色谱-串联质谱法测定，内标法定量。 8.1 提取 取试样5 g（准确至±0.02 g），加混合内标工作液100 μL（4.4.5）、1%乙酸乙腈25.0 mL、无水乙酸钠1 g（4.1.2），漩涡混合2 min，超声30 min，8 000 r/min离心10 min；取上清液，备用。 关键词：酸化乙腈提取 要点： 有一些有机磷农药在碱性条件下特别容易降解，所以在提取过程中加入一定的酸，比较有代表性的敌百虫，特别容易在碱性条件下转化为敌敌畏，在检测中会发现敌敌畏的峰高了很多，出现敌百虫回收率下降，敌敌畏回收率增高现象。 4.5 材料 PSA（N-丙基乙二胺）吸附剂：颗粒直径为 40～60 μm 关键词： 40～60 μm 要点： 在选择PSA吸附剂材料的颗粒直径是40～60 μm，因为直径在细一点或在粗一点，会导致在前处理过程中的吸附效果和净化效果有差别。 6.1 试料的制备 取适量新鲜或解冻的空白或供试组织，绞碎，并使均质。 关键词：粉碎均匀 要点： 在粉碎过程中一定要把样品粉碎均匀，粉碎不均匀容易导致在提取过程中，相应的农药提取不出来，导致结果偏差。 8.2净化 备用液加PSA吸附剂500 mg，漩涡振荡1 min，8 000 r/min离心10 min；取上清液5.0 mL， 45℃下氮气吹干，准确量取定容液1.0 mL（4.2.1）溶解残渣，加PSA吸附剂200 mg，旋涡1 min， 5 000 r/min离心10 min，取上清液过膜后，供液相色谱-串联质谱测定。实验过程需要注意避光操作，样品前处理完成后应及时上机检测。 关键词：温度 要点： 标准中净化是在45℃下氮气吹干，有机磷农药在高温的情况下特别容易分解，导致回收率下降。所以为了避免有机磷农药受到温度降解，可以把温度调低一点，可以在30℃氮吹。 TIPS：在色谱柱前增加一个溶剂效应消除器（PN：AN80C037），可省去净化后氮吹，直接乙腈提取后进样分析，不但解决了溶剂效应问题，而且峰形更对称。更大的优势是一方面可节省2-3个小时的氮吹过程（乙腈作为提取剂，挥发性较差，氮吹时间非常长），提高检测效率和降低检测成本，另一方面避免了氮吹浓缩过程中有机磷农药的降解和挥发，提高了回收率。 溶剂效应消除器相关文章，关注“纳鸥科技”公众号。 关键词：滤膜 要点： 第二步净化，上清液过膜时，经过第一步PSA净化后，现在上清液是70%的水相，过膜前需要考察一下滤膜的吸附性，因为水相高时容易导致膜吸附目标物，从而影响回收率。 再生纤维素滤膜，可以较好解决高水相滤膜吸附目标物的问题。（Anavo-U Syringe Filter, RC, 0.22μm, 13 mm，PN：AN40A025） 关键词：高脂肪样品 要点： 对于高脂肪含量的水产品（鳗鱼），在使用乙腈进行萃取时，一方面，一些脂类化合物会被同时萃取出来对下一步的分析带来困难；另一方面，一些脂溶性的非极性化合物会保留在样品基质中而降低萃取效率。因此，对于高脂肪含量的样品需要进行冷冻离心处理。 标准中相关产品咨询电话：400-995-9932 或 133 9125 2363（刘工） GB 31658.17-2021动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物残留量的测定 原理 试样中残留的四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物，用Mcllvaine-Na2EDTA缓冲液提取， 亲水亲脂平衡型固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱法测定，外标法定量。 6.1 试料的制备 取适量新鲜或解冻的空白或供试组织，绞碎，并使均质。 关键词：发热、回收率 要点： 在样品制备时，粉碎的时间如果太长，发热严重的话会对回收率有影响（如四环素类的金霉素），具体参照GB/T 30891-2014 中附录B 的要求制样。 8.1 提取 称取试料1 g （精确至±0.01 g），加Mcllvaine-Na2EDTA缓冲液8 mL，涡旋1 min，超声20 min，-2°C 10 000 r/min离心5 min，收集上清液。残渣中加磷酸盐缓冲液8 mL，重复提取一次，合并两次提取液，混匀，备用。 关键词：提取次数2次 要点： 标准品中用了2次提取，两次提取用的提取液是不一样的。 第1次采用Mcllvaine-Na2EDTA，此缓冲液是提取四环素类兽残的常用试剂， 但有几个在磺胺类药物单纯用Mcllvaine-Na2EDTA提取回收率不理想，第2次提取用了Mcllvaine-Na2EDTA+磷酸盐缓冲液，对于磺胺类药物有较好的回收率。 关键词：低温 要点： 在提取过程中降低离心的温度至-2℃可以更好的抑制样品中的脂肪在水溶液表面的分散，有利于样品的提取转移。 5.5 材料 亲水亲脂平衡型固相萃取柱：200 mg/6 mL，或相当者 关键词：亲水亲脂平衡型固相萃取柱 要点： 国标中净化材料的是亲水亲脂平衡型固相萃取柱，也就是我们平时用的HLB小柱 200 mg/6 mL（纳鸥科技，PN:AN60A005），HLB小柱表面同时具有亲水性和疏水性基团，对各类极性、非极性化合物具有较均衡的吸附作用。 其吸附能力和样品容量是 C18 键合硅胶的 3~10 倍，许多在 C18 难以得到保留的强亲水性化合物，在HLB 上仍有较好的回收率。 8.2 净化 固相萃取柱依次用甲醇 5 mL 和水 5 mL 活化，取备用液过柱，依次用水 5 mL 和20%甲醇水溶液 5 mL 淋洗，抽干，用洗脱液 10 mL 洗脱。收集洗脱液，45℃水浴氮气吹干。 加入复溶液 1.0 mL，涡旋 1 min 溶解残余物，14000 r/min 离心 5 min，微孔滤膜过滤，液相色谱-串联质谱测定。 关键点：氮吹 要点： 建议控制氮吹时间、温度和流速。实验过程氮吹时间非常长，约60分钟，容易造成部分化合物回收率偏低（比如：四环素类、青霉素类）。 建议氮吹至100 μL 左右，不氮吹干，可以减少在氮吹过程中部分目标化合物的损失。 关键词：溶剂效应 要点： 复溶时，加入 0.1%甲酸溶液定容至 1 mL,可以有效的改善部分目标化合物的峰型，降低溶剂效应，同时提高部分化合物的回收率。 此外，在色谱柱前加一个小配件（溶剂效应消除器，PN：AN80C037），可较好解决由于样品溶剂和流动相不匹配而造成的溶剂效应问题，使峰形更好，响应更高。 溶剂效应消除器相关文章，关注“纳鸥科技”公众号。 标准中相关产品咨询电话：400-995-9932 或 133 9125 2363（刘工） GB 31656.13-2021 水产品中硝基呋喃类代谢物多残留的测定 液相色谱－串联质谱法 原理 试料中残留的硝基呋喃类蛋白结合态代谢物在酸性条件下水解，经2-硝基苯甲醛衍生化， 用乙酸乙酯液液萃取，高速离心净化，液相色谱-串联质谱测定，内标法定量。 7.1 水解与衍生化 取试料2 g（精确至±0.01 g），于50 mL聚丙烯离心管中，准确加入混合内标标准工作液50 μL，涡旋混合1 min，加盐酸溶液5 mL、2-硝基苯甲醛溶液0.15 mL，涡旋混合1 min，37ºC 避光振荡16 h。 关键词：洗涤样品 要点： GB/T 21311-2007之前的标准的样品在水解之前先用10 mL甲醇水洗涤样品，新标准在水解前是不洗涤样品的。 这一点需要注意，因为硝基呋喃类药物的代谢物在动物体内多数是以蛋白结合的形式存在，但有部分是游离态的，比如说SEM、AOZ。 目前没有明确的实验结论证明，硝基呋喃类药物的代谢物只是以蛋白结合状态存在，所以洗涤样品的时候会将游离态的残留物洗掉，从而影响结果的准确性。 8.2 提取净化 取出离心管冷却至室温，用磷酸氢二钾溶液调pH值至7.0～7.5，加乙酸乙酯8 mL，涡旋振荡1 min，6000 r/min离心5 min，取上清液至10 mL玻璃离心管，40 ºC氮气吹干。加5%甲醇溶液1.0 mL溶解残留物，再将溶液转移至1.5 mL离心管中，以14000 r/min的转速离心10 min，取下层清液过0.22 μm滤膜，供液相色谱-串联质谱分析。 关键词：调pH值至7.0～7.5 要点： 大量研究表明，在 pH 为 7-7.5 的弱碱性条件下，乙酸乙酯对AOZ、AMOZ、AHD、SEM 衍生产物的提取效率最高（能达到 90%以上）。 因为弱碱环境可以抑制目标物的电离，使其绝大部分呈分子状态存在于衍生溶液中，有利于乙酸乙酯对目标物的提取或HLB 固相萃取柱的吸附，从而增强富集净化的效果。 但当 pH 值为 8-10 时，乙酸乙酯对 AHD 的萃取效率很低，因此需要将硝基呋喃代谢物酸性衍生溶液的 pH 值调节到 7-7.5 范围。 关键词：高速离心，0.22 um滤膜 要点： 相之前的标准，新标准增加了高速离心步骤（14000 r/min的转速离心），以及过0.22 um滤膜。 通过高速离心可以进一步净化试样溶液，把一些不溶于5%甲醇溶液的物质，通过高速离心沉淀下来，有部分的脂肪也可以通过高速离心分离出来。 另外，新增的0.22 um，为更好去除试样的杂质，保护色谱分析系统。 关键词：浑浊 要点： 最后一步用 5%甲醇水定容后出现浑浊，说明溶质过饱和（可能是样品的脂肪、蛋白等含量过高所致），通常是前处理过程中净化步骤不彻底导致的。 一般解决方法有两种：一是定容后置于冰箱（4℃）冷藏 2 小时以上，使脂肪充分析出，取出后高速冷冻离心，取上清液进行检测； 二是参考《GB/T 20752-2006》标准的处理方式——加入 10 mL 甲醇+水混合溶液（2+1）均质，然后离心弃去上清液再过 Anavo HLB 小柱净化效果更好。 标准中相关产品咨询电话：400-995-9932 或 133 9125 2363（刘工） 实战宝典新颁布36项兽残标准前处理关键点和要点（上篇） 由农业农村部、国家卫生健康委员会、国家市场监督管理总局联合发布的36项兽药残留检测标准，于2022年2月1日正式实施，其中32项标准为全新发布。整个分析过程中，样品前处理所需要的时间约占全部分析时间的 60%-70%，前处理过程引入的误差约占整个误差的 30%-40%，因此样品前处理方法的选取和使用，直接关系到整个分析方法的成败和优劣。因此，针对其中新颁布国标中6个经常使用的标准：GB 31656.8-2021（有机磷类药物残留量)、GB 31658.17（四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物残留量）、GB 31656.13（硝基呋喃类代谢物多残留）、GB 31658.2（氯霉素残留量）、GB 31658.5（氟苯尼考及氟苯尼考胺残留量）、GB 31656.11（土霉素、四环素、金霉素和多西环素残留量），这些标准的前处理从样品提取、净化等步骤结合标准文本，对相应的关键点和要点等进行了总结。  GB 31656.8-2021水产品中有机磷类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法 原理：试样中有机磷类药物的残留经酸化乙腈提取，经 PSA 吸附剂净化（QuEChERS方法），液相色谱-串联质谱法测定，内标法定量。 8.1 提取 取试样5 g（准确至±0.02 g），加混合内标工作液100   μL（4.4.5）、1%乙酸乙腈25.0 mL、无水乙酸钠1 g（4.1.2），漩涡混合2 min，超声30 min，8 000 r/min离心10 min；取上清液，备用。关键词：酸化乙腈提取要点：Ø    有一些有机磷农药在碱性条件下特别容易降解，所以在提取过程中加入一定的酸，比较有代表性的敌百虫，特别容易在碱性条件下转化为敌敌畏，在检测中会发现敌敌畏的峰高了很多，出现敌百虫回收率下降，敌敌畏回收率增高现象。   4.5 材料 PSA（N-丙基乙二胺）吸附剂：颗粒直径为 40～60 μm关键词： 40～60 μm要点：Ø    在选择PSA吸附剂材料的颗粒直径是40～60 μm，因为直径在细一点或在粗一点，会导致在前处理过程中的吸附效果和净化效果有差别。  6.1 试料的制备 取适量新鲜或解冻的空白或供试组织，绞碎，并使均质。关键词：粉碎均匀要点：Ø    在粉碎过程中一定要把样品粉碎均匀，粉碎不均匀容易导致在提取过程中，相应的农药提取不出来，导致结果偏差。   8.2净化 备用液加PSA吸附剂500 mg，漩涡振荡1 min，8 000 r/min离心10 min；取上清液5.0 mL， 45℃下氮气吹干，准确量取定容液1.0   mL（4.2.1）溶解残渣，加PSA吸附剂200 mg，旋涡1 min， 5 000 r/min离心10 min，取上清液过膜后，供液相色谱-串联质谱测定。实验过程需要注意避光操作，样品前处理完成后应及时上机检测。关键词：温度要点：Ø    标准中净化是在45℃下氮气吹干，有机磷农药在高温的情况下特别容易分解，导致回收率下降。所以为了避免有机磷农药受到温度降解，可以把温度调低一点，可以在30℃氮吹。Ø  TIPS：在色谱柱前增加一个溶剂效应消除器（PN：AN80C037），可省去净化后氮吹，直接乙腈提取后进样分析，不但解决了溶剂效应问题，而且峰形更对称。更大的优势是一方面可节省2-3个小时的氮吹过程（乙腈作为提取剂，挥发性较差，氮吹时间非常长），提高检测效率和降低检测成本，另一方面避免了氮吹浓缩过程中有机磷农药的降解和挥发，提高了回收率。 溶剂效应消除器相关文章，关注“纳鸥科技”公众号。 关键词：滤膜要点：Ø    第二步净化，上清液过膜时，经过第一步PSA净化后，现在上清液是70%的水相，过膜前需要考察一下滤膜的吸附性，因为水相高时容易导致膜吸附目标物，从而影响回收率。Ø    再生纤维素滤膜，可以较好解决高水相滤膜吸附目标物的问题。（Anavo-U Syringe Filter, RC, 0.22μm, 13 mm，PN：AN40A025）  关键词：高脂肪样品要点：Ø    对于高脂肪含量的水产品（鳗鱼），在使用乙腈进行萃取时，一方面，一些脂类化合物会被同时萃取出来对下一步的分析带来困难；另一方面，一些脂溶性的非极性化合物会保留在样品基质中而降低萃取效率。因此，对于高脂肪含量的样品需要进行冷冻离心处理。   GB 31658.17-2021动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物残留量的测定 原理 试样中残留的四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物，用Mcllvaine-Na2EDTA缓冲液提取， 亲水亲脂平衡型固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱法测定，外标法定量。  6.1 试料的制备 取适量新鲜或解冻的空白或供试组织，绞碎，并使均质。 关键词：发热、回收率要点：Ø    在样品制备时，粉碎的时间如果太长，发热严重的话会对回收率有影响（如四环素类的金霉素），具体参照GB/T 30891-2014 中附录B 的要求制样。  8.1 提取 称取试料1 g （精确至±0.01 g），加Mcllvaine-Na2EDTA缓冲液8 mL，涡旋1 min，超声20 min，-2°C 10 000 r/min离心5 min，收集上清液。残渣中加磷酸盐缓冲液8 mL，重复提取一次，合并两次提取液，混匀，备用。 关键词：提取次数2次要点：Ø    标准品中用了2次提取，两次提取用的提取液是不一样的。第1次采用Mcllvaine-Na2EDTA，此缓冲液是提取四环素类兽残的常用试剂，但有几个在磺胺类药物单纯用Mcllvaine-Na2EDTA提取回收率不理想，第2次提取用了Mcllvaine-Na2EDTA+磷酸盐缓冲液，对于磺胺类药物有较好的回收率。 关键词：低温要点：Ø    在提取过程中降低离心的温度至-2℃可以更好的抑制样品中的脂肪在水溶液表面的分散，有利于样品的提取转移。 5.5 材料 亲水亲脂平衡型固相萃取柱：200 mg/6 mL，或相当者 关键词：亲水亲脂平衡型固相萃取柱要点：   Ø    国标中净化材料的是亲水亲脂平衡型固相萃取柱，也就是我们平时用的HLB小柱 200 mg/6 mL（纳鸥科技，PN:AN60A005），HLB小柱表面同时具有亲水性和疏水性基团，对各类极性、非极性化合物具有较均衡的吸附作用。Ø    其吸附能力和样品容量是 C18 键合硅胶的 3~10 倍，许多在 C18 难以得到保留的强亲水性化合物，在HLB 上仍有较好的回收率。8.2 净化  固相萃取柱依次用甲醇 5 mL 和水 5 mL 活化，取备用液过柱，依次用水 5 mL 和20%甲醇水溶液 5 mL 淋洗，抽干，用洗脱液 10 mL 洗脱。收集洗脱液，45℃水浴氮气吹干。 加入复溶液 1.0 mL，涡旋 1 min 溶解残余物，14000 r/min 离心 5 min，微孔滤膜过滤，液相色谱-串联质谱测定。  关键点：氮吹要点：Ø    建议控制氮吹时间、温度和流速。实验过程氮吹时间非常长，约60分钟，容易造成部分化合物回收率偏低（比如：四环素类、青霉素类）。Ø    建议氮吹至100 μL 左右，不氮吹干，可以减少在氮吹过程中部分目标化合物的损失。 关键词：溶剂效应要点：Ø    复溶时，加入 0.1%甲酸溶液定容至 1 mL,可以有效的改善部分目标化合物的峰型，降低溶剂效应，同时提高部分化合物的回收率。Ø    此外，在色谱柱前加一个小配件（溶剂效应消除器，PN：AN80C037），可较好解决由于样品溶剂和流动相不匹配而造成的溶剂效应问题，使峰形更好，响应更高。 溶剂效应消除器相关文章，关注“纳鸥科技”公众号。  GB 31656.13-2021水产品中硝基呋喃类代谢物多残留的测定 液相色谱－串联质谱法 原理试料中残留的硝基呋喃类蛋白结合态代谢物在酸性条件下水解，经2-硝基苯甲醛衍生化， 用乙酸乙酯液液萃取，高速离心净化，液相色谱-串联质谱测定，内标法定量。 7.1 水解与衍生化 取试料2 g（精确至±0.01 g），于50 mL聚丙烯离心管中，准确加入混合内标标准工作液50 μL，涡旋混合1 min，加盐酸溶液5 mL、2-硝基苯甲醛溶液0.15 mL，涡旋混合1 min，37ºC 避光振荡16 h。 关键词：洗涤样品要点：Ø    GB/T 21311-2007之前的标准的样品在水解之前先用10 mL甲醇水洗涤样品，新标准在水解前是不洗涤样品的。Ø    这一点需要注意，因为硝基呋喃类药物的代谢物在动物体内多数是以蛋白结合的形式存在，但有部分是游离态的，比如说SEM、AOZ。Ø    目前没有明确的实验结论证明，硝基呋喃类药物的代谢物只是以蛋白结合状态存在，所以洗涤样品的时候会将游离态的残留物洗掉，从而影响结果的准确性。  8.2 提取净化 取出离心管冷却至室温，用磷酸氢二钾溶液调pH值至7.0～7.5，加乙酸乙酯8 mL，涡旋振荡1 min，6000 r/min离心5 min，取上清液至10 mL玻璃离心管，40 ºC氮气吹干。加5%甲醇溶液1.0 mL溶解残留物，再将溶液转移至1.5 mL离心管中，以14000 r/min的转速离心10 min，取下层清液过0.22 μm滤膜，供液相色谱-串联质谱分析。 关键词：调pH值至7.0～7.5要点：Ø  大量研究表明，在 pH 为 7-7.5 的弱碱性条件下，乙酸乙酯对AOZ、AMOZ、AHD、SEM 衍生产物的提取效率极高（能达到 90%以上）。Ø  因为弱碱环境可以抑制目标物的电离，使其绝大部分呈分子状态存在于衍生溶液中，有利于乙酸乙酯对目标物的提取或HLB 固相萃取柱的吸附，从而增强富集净化的效果。Ø  但当 pH 值为 8-10 时，乙酸乙酯对 AHD 的萃取效率很低，因此需要将硝基呋喃代谢物酸性衍生溶液的 pH 值调节到 7-7.5 范围。 关键词：高速离心，0.22   um滤膜要点：Ø  相之前的标准，新标准增加了高速离心步骤（14000 r/min的转速离心），以及过0.22 um滤膜。Ø  通过高速离心可以进一步净化试样溶液，把一些不溶于5%甲醇溶液的物质，通过高速离心沉淀下来，有部分的脂肪也可以通过高速离心分离出来。Ø  另外，新增的0.22   um，为更好去除试样的杂质，保护色谱分析系统。  关键词：浑浊要点：Ø  最后一步用 5%甲醇水定容后出现浑浊，说明溶质过饱和（可能是样品的脂肪、蛋白等含量过高所致），通常是前处理过程中净化步骤不彻底导致的。Ø  一般解决方法有两种：一是定容后置于冰箱（4℃）冷藏 2 小时以上，使脂肪充分析出，取出后高速冷冻离心，取上清液进行检测；Ø  二是参考《GB/T   20752-2006》标准的处理方式——加入 10 mL 甲醇+水混合溶液（2+1）均质，然后离心弃去上清液再过 Anavo HLB 小柱净化效果更好。