超高效液相色谱法测定化妆品中38种准用着色剂

智能文字提取功能测试中

本文参考GB/T37545-2019《化妆品中38种准用着色剂 高效液相色谱法》，使用岛津Nexera LC-40X3高效液相色谱仪建立化妆品中38种准用着色剂的定量测定方法。在相应标曲范围内，各化合物的相关系数均在0.997以上。在分析精密度上，各化合物的保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在0.02%~ 0.45%和0.14%~3.16%之间；加标回收率在91.0% ~ 106.0%之间。该方法具有灵敏度高、重复性好的优势，可用于化妆品中多种准用着色剂的定量检测。 岛津SHIMADZUSSL-CA22-581Excellence in Science 岛津SHIMADZUExcellence in ScienceLC-363 超高效液相色谱法测定化妆品中38种准用着色剂 LC-363 摘要：本文使用岛津超高效液相色谱仪建立化妆品中38种准用着色剂的测定方法。本方法参考 GB/T37545-2019《化妆品中38种准用着色剂高效液相色谱法》标准中的液相色谱法，建立一针分析38种着色剂的定量方法；同时展示了 iPDeA 的功能在多物质分析中的应用。本实验结果显示38种组分的校准曲线相关系数均在0.997以上；对不同浓度的混合标准溶液，各平行测试6次，各化合物的保留时间和峰面积的相对标准偏差分别为 0.02%~0.45%和0.14%~3.16%；并对实际样品进行测试。方法可靠，供相关人士参考。 关键词：超高效液相色谱 准用着色剂 化妆品 技术特点： 心应对国标 GB/T37545-2019《化妆品中38种准用着色剂高效液相色谱法》 系统控制器：(CBM-40自动进样器：：SIL-40C X3输液泵：：LC-40B X3检 测 器：：PDA柱温箱：CTO-40S色谱工作站：LabSolutions Ver.5.99 1.2分析条件 液相色谱条件 色 谱 柱：：Shim-pack GIST-HP 100 mm ×2.1 mm l.D.， 1.9 um C18-AQ， 岛津(上海)实验器材有限公司，PN： 227-30807-02) 动 相： A-0.03M 乙酸铵-0.075甲酸水溶液，，B-乙腈 流 流 速： 0.3 mL/min 柱 温： 40℃ 进样体积： 2uL 洗脱方式： 梯度洗脱，B初始8%，见表1 表1 梯度洗脱程序 Time(min) Module Command Value (B%) 2.5 Pumps Pump B Conc. 10 6 Pumps Pump B Conc. 20 6.1 Pumps Pump B Conc. 30 30 Pumps Pump B Conc. 40 31 Pumps Pump B Conc. 60 37 Pumps Pump B Conc. 80 39 Pumps Pump B Conc. 90 45 Pumps Pump B Conc. 8 48 Controller Stop 1.3溶液的配制 标准储备溶液的配制 参考 GB/T37545-2019方法，将38种准用着色剂进行分组，称重适量，分别溶解在水、甲醇、四氢呋喃、二甲基亚砜中，获得各浓度均为1000 mg/L的储备溶液。具体分组为：食品红10、酸性紫43、酸性橙10、酸性蓝62、酸性黄1、酸性蓝7、酸性黄 11、食品红9、食品蓝1、食品红7、食品黄3、食品红17、食品蓝2、食品绿3和食品蓝5(总共15个)为第1组，溶解溶剂为水；溶剂红3、溶剂黄33、溶济绿3和颜料红4(总为4个)为第2组，溶解溶剂为四氢呋喃；颜料红49和颜料红64(2个)为第3组，溶解溶剂为 DMSO； 其他如酸性红88等总共17个化合物为第4组，溶解溶剂为甲醇。 校准溶液配制 准确移取标准储备溶液各 100 uL于 10 mL 容量瓶中，用标准溶液稀释液稀释至刻度，配制成各标准物质质量浓度均为 10 ug/mL的混合标准工作溶液。取适量 10 pg/mL混合标准工作溶液，参考GB/T37545-2019方法，配制成各标准物质质量浓度分别为1.0 ug/mL、2.0 ug/mL、4.0 ug/mL、6.0 ug/mL、8.0 ug/mL 和 10.0 ug/mL的系列标准工作溶液。 1.4样品前处理方法 准确称取 0.2g样品于15mL 离心管中，加入6mL四氢呋喃，涡旋并超声 10 min， 使样品分散、提取目标物(若样品无法分散，人可用80℃水浴适当加热1~2 min 即可)。继续向离心管中依次加入2mL甲醇和2mL醋酸铵水溶液(0.5 moL/L 乙酸铵、0.5%抗坏血酸钠))，涡旋混匀，超声提取 10 min， 接着10000 r/min 离心10 min， 移取上层提取液2mL于10mL塑料离心管中，氮吹浓缩至约 0.5 mL， 最后用10%乙腈水溶液稀释定容至4mL， 超声10 min， 用0.22 um PTFE 滤膜过滤后上机测试。 2.1色谱图 38种准用着色剂色谱图(10 ug/mL)如下图1-6所示，参照标准对38种着色剂按检测波长分为6组进行检测，着色剂编号同表2。 mAU(x100) 4PDA Ch1 254nm，4nm 3.0 2.0 1.0 山业 M 0.0 E 30.0 35.0 40.0 min 0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 入=254nm mAU(x100) 入=620nm 图138种准用着色剂色谱图 2.2应用 i-PDeA 的功能提升色谱峰的定量准确性 254 nm 检测波长下，14号和17号着色剂色谱峰分离度为1.11，色谱峰实现了较好分离。日常测试过程中，色谱柱因长期使用，老化等问题常常不可避免，此时色谱柱柱效下降，可能导致色谱峰分离度变差，影响定量准确性，这种情况下使用 i-PDeA II代解卷积算法对 PDA 色谱图进行解析，可以更好地实现色谱峰分离，从而达到准确定量目的。i-PDeA解卷积色谱图和参数设置示例见图2和图3。 图2 i-PDeA 解卷积色谱图(绿线：原始谱图蓝线：#14酸性蓝1红线：#17酸性绿22) 图3i-PDeAII参数设置 2.3线性关系 依据标准，将1.3中配制的1.0 pg/mL， 2.0 ug/mL， 4.0 ug/mL， 6.0 ug/mL， 8.0 ug/mL 和 10.0 ug/mL标准见图4。各浓度点线性回归的准确度、相关系数r见表2。结果显示，各化合物在相应线性范围内线性关系良好，相关系数r都大于0.997， 准确度在88.8~110.9%之间，满足 GB/T37545-2019相关要求。 图4 部分准用着色剂校准线性 2.4精密度 对不同浓度标准工作液连续测定6次，考察仪器精密度，保留时间和峰面积的重复性结果如表2所示。结果显示不同浓度化合物的保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在0.02%~0.45%和0.14%~3.16%之间，仪器精密度良好。 2.5回收率测试 取唇膏样品1加入一定浓度着色剂标液(加标浓度如表2所示)，按照1.4中样品制备方法，每个浓度平行制备3份样品。对本底样品进行测试，唇膏样品1未检出38种着色剂，加标回收率测试结果显示：38种准用着色剂样品的加标回收率在91.0%~106.0%之间，满足标准测试要求，结果如表2所示。 2.6实际样品测试 取某唇膏样品2，准确称量0.2g，参考1.4的样品前处理方法，制备上机。经检测，样品中检出酸性橙10(5#)，含量为 384.5 ug/g。样品色谱图如图5所示。 图5实际样品色谱图 表238种准用着色剂线性系数(权重1/C)、保留时间和峰面积重复性及回收率测试结果 序号 化合物名称 准确度% RSD% RSD% 加标浓度 加标浓度 线性范围 相关系数 (4ug/mL) (8ug/mL) (200 ug/g) (400 ug/g) (ug/mL) R.T1.. Area R.T. Area 检测值 回收率 检测值 回收率 1 食品红9 1.0~10.0 0.9991 92.7~108.3 0.45 2.90 0.14 3.06 189.2 94.6 383.6 95.9 2 食品蓝1 1.0~10.0 0.9990 93.9~109.8 0.29 3.16 0.21 0.86 181.4 90.7 374.3 93.6 3 食品红7 1.0~10.0 0.9991 92.7~108.0 0.07 1.80 0.08 0.42 190.5 95.3 386.4 96.6 4 酸性黄1 1.0~10.0 0.9991 91.5~107.9 0.04 1.60 0.10 0.20 186.3 93.2 375.9 94.0 5 酸性橙10 1.0~10.0 0.9992 92.6~106.9 0.06 1.71 0.06 0.58 194.7 97.4 385.3 96.3 6 食品黄3 1.0~10.0 0.9991 91.9~108.5 0.04 1.76 0.09 0.28 182.6 91.3 368.4 92.1 7 食品红10 1.0~10.0 0.9988 93.5~105.6 0.06 2.51 0.04 0.96 203.2 101.6 411.2 102.8 8 食品红17 1.0~10.0 0.9989 90.6~108.7 0.07 1.60 0.06 0.28 185.1 92.6 373.4 93.4 9 食品绿3 1.0~10.0 0.9986 89.3~110.1 0.06 2.74 0.05 0.33 193.4 96.7 377.2 94.3 10 食品蓝2 1.0~10.0 0.9987 91.4~107.1 0.08 7.41 0.04 0.62 197.3 98.7 394.3 98.6 11 酸性红50 1.0~10.0 0.9987 90.6~107.9 0.09 1.82 0.04 0.33 189.6 94.8 388.6 97.2 12 酸性黄11 1.0~10.0 0.9988 90.6~109.5 0.10 1.82 0.04 0.32 187.2 93.6 385.6 96.4 13 酸性黑1 1.0~10.0 0.9986 89.9~109.0 0.11 1.93 0.04 0.21 192.1 96.1 393.1 98.3 14 酸性蓝1 1.0~10.0 0.9984 89.1~109.8 0.11 2.77 0.04 3.31 206.2 103.1 423.9 106.0 15 酸性橙7 1.0~10.0 0.9992 92.4~107.8 0.11 1.59 0.05 0.28 210.4 105.2 407.3 101.8 16 酸性红52 1.0~10.0 0.9986 89.8-108.8 0.10 1.84 0.04 0.40 197.6 98.8 394.6 98.7 17 酸性绿22 1.0~10.0 0.9984 89.6-109.5 0.13 1.91 0.05 2.62 193.1 96.6 385.1 96.3 18 食品蓝5 1.0~10.0 0.9988 90.6-109.4 0.13 1.96 0.04 0.32 189.2 94.6 373.6 93.4 19 酸性红98 1.0~10.0 0.9988 91.8~109.6 0.12 1.82 0.04 0.32 183.5 91.8 395.4 98.9 20 酸性绿9 1.0~10.0 0.9986 90.9~108.3 0.20 2.01 0.04 0.35 204.3 102.2 398.5 99.6 21 酸性红88 1.0~10.0 0.9984 90.1~108.7 0.17 1.76 0.04 0.23 191.6 95.8 385.3 96.3 22 颜料红49 1.0~10.0 0.9979 90.5~106.6 0.15 2.66 0.05 0.14 206.3 103.2 402.9 100.7 23 溴甲酚绿 1.0~10.0 0.9984 95.2~104.5 0.18 2.16 0.05 0.34 212.4 106.2 409.3 102.3 24 酸性紫43 1.0~10.0 0.9987 91.1~110.9 0.16 1.56 0.05 0.26 187.5 93.8 395.9 99.0 25 酸性紫9 1.0~10.0 0.9988 90.7~109.0 0.15 2.00 0.05 0.28 197.6 98.8 405.1 101.3 26 酸性蓝62 1.0~10.0 0.9984 90.6~106.0 0.14 1.44 0.06 0.21 189.4 94.7 387.6 96.9 27 酸性蓝7 1.0~10.0 0.9989 91.1~108.4 0.15 1.89 0.06 0.31 183.5 91.8 369.5 92.4 28 碱性紫2 1.0~10.0 0.9985 89.7~109.4 0.23 1.87 0.06 0.26 204.4 102.2 405.6 101.4 29 酸性紫50 1.0~10.0 0.9990 92.3~108.2 0.15 1.88 0.07 0.31 190.1 95.1 385.2 96.3 30 溶剂黄33 1.0~10.0 0.9986 90.5~107.9 0.16 1.64 0.06 0.26 198.7 99.4 393.3 98.3 31 酸性黄121 1.0~10.0 0.9990 92.1~107.3 0.02 1.82 0.03 0.17 186.6 93.3 385.4 96.4 32 颜料红64 1.0~10.0 0.9974 92.5~107.3 0.03 2.60 0.03 2.79 202.2 101.1 396.7 99.2 33 溶剂红3 1.0~10.0 0.9984 90.4-108.4 0.02 1.60 0.03 0.44 181.9 91.0 374.2 93.6 34 分散黄16 1.0~10.0 0.9965 88.8-106.1 0.02 3.07 0.03 2.56 188.2 94.1 385.8 96.5 35 溶剂黄29 1.0~10.0 0.9991 93.4-107.6 0.03 1.64 0.03 0.15 197.9 99.0 402.4 100.6 36 颜料红4 1.0~10.0 0.9994 93.9~107.0 0.02 3.08 0.03 2.98 203.5 101.8 415.3 103.8 37 溶剂绿3 1.0~10.0 0.9986 93.9~102.4 0.03 3.16 0.05 2.89 188.7 94.4 403.6 100.9 38 碱性蓝26 1.0~10.0 0.9979 90.4~109.7 0.05 1.89 0.03 1.85 194.3 97.2 395.7 98.9 结论 本文参考 GB/T37545-2019《化妆品中38种准用着色剂高效液相色谱法》，使用岛津 Nexera LC-40X3高效液相色谱仪建立化妆品中38种准用着色剂的定量测定方法。在相应标曲范围内，各化合物的相关系数均在0.997以上。在分析精密度上，各化合物的保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在0.02%~0.45%和0.14%~3.16%之间；加标回收率在91.0%~106.0%之间。该方法具有灵敏度高、重复性好的优势，可用于化妆品中多种准用着色剂的定量检测。 岛津应用云