fluidot自动液体分装仪在大肠菌群测定中的应用（15管发酵法）

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fluidot自动液体分装仪在大肠菌群测定中的应用（15管发酵法）方案摘要：大肠菌群是一群能发酵乳糖并产酸产气,需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。将不同量的水样接种到含乳糖的培养基中,36 ℃士1 ℃培养 24 h士2h后,根据阳性反应管数可推算出原水样中大肠菌群的最可能数(most probable number,MPN)。对矿泉水水源水或直接饮用的矿泉水的检测,依据水样中大肠菌群的污染程度选择适合的多管发酵方法。本方法使用fluidot自动液体分装仪快速分装乳糖胆盐发酵培养液，使用15管发酵法快速检测矿泉水中大肠菌群的数量。方案详情：1、 实验原理‌多管发酵法 是一种用于检测水中总大肠菌群的方法，其基本原理基于大肠菌群能够发酵乳糖、产酸产气以及具备革兰氏染色阴性、无芽孢、呈杆状等特性。通过三个步骤进行检验，以求得水样中的总大肠菌群数。‌多管发酵法 需要分装大量的乳糖胆盐发酵培养液，fluidot自动液体分装仪可以一次性装四个试管架，循环做业。大大减轻实验人员的工作压力，提高实验效率。二、‌实验准备1、设配和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:① 试管:20 mmX150 mm、15 mmX140 mm、35 mmX200 mm 或其他适宜规格。② 小倒管:6 mmX30 mm、13 mmx100 mm 或其他适宜规格。③ 无菌吸管:1 mL（具0.01 mL刻度）FDT-SP01001④ 无菌吸管：10 mL（具0.1 mL刻度）FDT-SP01010⑤ 电动移液器：pipetty   10mL  MSIC90-001-10mL⑥ 手动移液器：fluidot  1 mL  MSP1K⑦ 恒温培养箱:36 ℃士1℃。⑧ 冰箱:2 ℃~8 ℃。⑨ pH 计或 pH 比色管或精密 pH 试纸。2、培养基和试剂① 乳糖胆盐发酵培养液。② 亮绿乳糖胆盐培养液。③ 无菌生理盐水。④ 无菌磷酸盐缓冲液。三、检验程序1、大肠菌群多管发酵法的检验程序如下：四、实验步骤1、初发酵实验① 吸取 10 mL 水样接种到 10 m 双料乳糖胆盐发酵培养液中,共接种5份。② 吸取1 ml 水样接种到 10 mL,单料乳糖胆盐发酵培养液中,共接种5份。③ 吸取1 mL 水样接种到9ml无菌生理盐水或无菌磷酸盐缓冲液中,混匀,从中吸取1 ml,稀释液到 10 mL单料乳糖胆盐发酵培养液中,共接种5份。④ 轻摇试管(避免小倒管中产生气泡),使液体充分混合,置 36 ℃士1 ℃培养箱内培养 24 h±2 h。观察每管是否产气,如有气体产生则为初发酵试验阳性,如不产气则为大肠菌群阴性。2、确证实验① 初发酵试验阳性管中培养液充分摇匀后,取一接种环培养液,接种到10 ml亮绿乳糖胆盐培养液中,置 36 ℃士1 ℃培养箱中培养 48 h士2 h。② 观察亮绿乳糖胆盐培养液中小倒管内的产气情况,如有气体产生,就可确定为大肠菌群阳性,记下产气的阳性试管数,查表28可得出水样中大肠菌群的MPN值;如无气体产生则为大肠菌群阴性。3、MPN值的计算如水样含菌量少,可按 100 mL、10 ml、1 mL 接种,实际 MPN 值应为表中的 MPN 值除以 10;如水样含菌量多,可按1 mL、0.1 mL、0.01 ml,接种,实际 MPN 值应为表中的 MPN 值乘以10,以此类推。4、 列举说明假设初发酵试验 15 支试管中的阳性管数如下:在接种量为 10 m 的管中有 5 支管阳性;在接种量为1 m 的管中有 4 支管阳性;在接种量为 0.1 m的管中有2支管阳性;作为初发酵试验结果为 5-4-2。当把以上阳性管转种到亮绿乳糖胆盐培养液管里,经培养后,若确证试验所给的结果为 5-3-1,那么査表 28,可得出每 100 m乚,水样中大肠菌群的 MPN 值为 110。接种量为 100 ml、10 ml、1 mL时,MPN 值为 11:接种量为1 mL,0.1 ml,0.01 mL,时,MPN值为1 100。五、 结果与报告根据确证试验证实的乳糖胆盐发酵管反应阳性管数,检索方法对应的MPN表,报告每100 ml, 样品中大肠菌群的MPN值,以 MPN/100 ml,表示。当所有接种水样的乳糖胆盐发酵管均为阴性反应,可报告100 m水样中未检出大肠菌群。